病理切片的特殊染色方法
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1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法
【染色方法】
(1)中性甲醛固定组织,石蜡切片;
(2)组织切片脱蜡至水;
(3)用Van Gieson液染1~5分钟;
(4)倾去染液,直接用95%乙醇分化和脱水;
(5)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
【结果】胶原纤维呈红色,肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。
2.Masson氏结缔组织三合染色法
【染色方法】
(1)石蜡切片厚6μm,脱蜡至水;
(2)0.2%冰醋酸水溶液浸泡片刻;
(3)Masson氏染色液中5分钟或更长时间;
(4)0.2%冰醋酸水溶液浸泡片刻;
(5)5%磷钨酸水溶液2~3分钟,再入0.2%冰醋酸水溶液浸洗(6)投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间;
(7)再入0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;
(8)脱水、透明和封固。
【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色,胶原纤维染绿色。
【染色方法】
(1)石蜡切片、脱蜡至水;
(2)0.25%高锰酸钾液3分钟;
(3)蒸馏水洗2次;
(4)1%草酸漂白即可;
(5)蒸馏水洗2次;
(6)2.5%铁明矾水溶液媒染5~10分钟,蒸馏水洗多次;(7)二氨氢氧化银浸染1分钟,蒸馏水洗3次;
(8)10%甲醛液还原2分钟,蒸馏水洗3次;
(9)0.2%氯化金液调色1~2分钟,蒸馏水洗3次;
(10)5%硫代硫酸钠固定5分钟;
(11)蒸馏水洗,需要时复染;
(12)水洗、脱水、透明和封固。
【结果】网状维呈黑色,其他组织呈复染的颜色。
显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法
【染色方法】
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;
(2)切片入70%乙醇中洗2分钟;
(3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5~2小时;
(4)直接入95%乙醇中分色数秒钟;
(5)浸入蒸馏水洗2分钟;
(6)用丽春红S液滴染切片5分钟;
(7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次;
(8)将切片在空气中或冷风干燥;
(9)二甲苯透明,中性树胶封固。
【结果】弹性纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈淡黄色。
【染色方法】
(1)冰冻切片厚度8~15μm;
(2)Harris苏木素,染约1分钟;
(3)自来水洗后,用0.5%盐酸乙醇分化,再水洗直至胞核返蓝为止;
(4)蒸馏水洗后移入70%乙醇内浸洗一下;
(5)浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间(如果置于56℃温箱中可适当缩短时间);
(6)在70%乙醇分化数秒钟;
(7)待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干;
(8)及时用明胶甘油封片。
【结果】脂肪呈橘红色,脂肪酸不着色,胞核淡蓝色。
高碘酸-Schiff(Periodic acid Schiff,PAS)染色法
【染色方法】
(1)切片脱蜡至蒸馏水;
(2)浸入高碘酸氧化液中10~20分钟;
(3)蒸馏水洗2次;
(4)Schiff液染色10~30分钟;
(5)流水冲洗5分钟;
(6)用苏木素染细胞核3~5分钟;
(7)在盐酸酒精中分化,自来水洗至细胞核变蓝为止;
(8)脱水、透明和封固。
【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色,细胞核染蓝色,霉菌也呈紫红色等。
【染色方法】
(1)切片入二甲苯,后递次向下直到入水;
(2)3%冰醋酸溶液3分钟;
(3)在奥辛兰溶液中染5分钟;
(4)入3%冰醋酸3分钟,蒸馏水洗(3次);
(5)用1%过碘酸处理10分钟,蒸馏水洗;
(6)入Schiff液10~30分钟;
(7)流动自来水洗10分钟;
(8)逐级酒精脱水,二甲苯透明;
(9)中性树胶封固。
【结果】酸性粘多糖染兰色;中性粘蛋白染品红色;中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。
Mallory磷钨酸-苏木素染色法PTAH
【染色方法】
(1)切片脱蜡至水;
(2)在酸性高锰酸钾液中氧化5~10分钟;
(3)自来水充分洗,蒸馏水洗2次;
(4)用1%草酸液漂白2分钟;
(5)自来水洗,蒸馏水洗2次;
(6)浸入MalloryPTAH液中12~48小时;
(7)直接用95%乙醇分化;
(8)无水乙醇急速脱水,二甲苯透明和树胶封固。
【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色;胶质纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色;粗弹力纤维有时被染成微紫色;有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。
【染色方法】
(1)石蜡切片,脱蜡至水;
(2)在1%刚果红水溶液中1小时或更长时间;
(3)投入饱和碳酸锂水溶液中15秒钟;
(4)用80%酒精分化,直至无多余燃料溜下为止;
(5)水洗后用苏木素进行核染色;
(6)等干后进行二甲苯透明和树胶封固。
【结果】淀粉样物质呈红色,细胞核呈兰色。
【染色方法】
(1)中性甲醛固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;
(2)0.2mol/L醋酸缓冲液洗2次;
(3)将切片置入1%硝酸银液内1小时左右(温箱56℃);
(4)直接把切片取出,立即浸入显影液内2~3分钟;
(5)将切片浸入56℃蒸馏水中洗1~2分钟;
(6)蒸馏水洗1次;
(7)无水乙醇脱水,二甲苯透明和中性树胶封固。
【结果】胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色,背景呈淡黄色。
【染色方法】
(1)石蜡切片厚6μm,脱蜡至水;
(2)用1%甲苯胺蓝水溶液置于50~60℃温箱内浸染20~40分钟;
(3)蒸馏水稍洗;
(4)95%乙醇迅速分化;
(5)无水乙醇脱水,二甲笨透明,中性树胶封固。
【结果】尼氏小体紫蓝色,胞核棕红色。
【染色方法】
(1)石蜡切片厚6μm,脱蜡至水;
(2)投入新鲜配置的20%盐酸和10%亚铁氰化钾等量混合液(用前过滤)中30分钟,必要时可延长时间;
(3)蒸馏水洗;
(4)在0.5%的碱性品红(溶剂为50%酒精)进行1分钟对比染色;
(5)在95%酒精中分化后晾干,透明,封固。
【结果】含铁血黄素呈蓝色,血棕色素呈红色。
【染色方法】