水质微生物检测

除矿物质指标不能达到饮用天然矿泉水的要求外，其余从开采、 水源保护、加工工艺等都应与矿泉水保持一致。国家标准起草 中，一般可参考GB19298-2003，微生物学指标为4项：菌落总 数、大肠菌群、霉菌和酵母、致病菌（沙门、志贺、金葡）；
3、其他天然饮用水
对于来源于井水、水库水、溪流、湖泊、高山冰川等，未受污染， 未经公共供水系统的水，可以称为“天然”。国家标准起草中， 一般可参考GB19298-2003，微生物学指标为4项：菌落总数、大 肠菌群、霉菌和酵母、致病菌（沙门、志贺、金葡）； 4、饮用纯净水 经过反渗透、电渗析等水处理工艺的产品。产品标准为 GB17323 瓶装饮用纯净水和GB17323 瓶装饮用纯净水卫生标准，微生物 学指标为4项：菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母、致病菌（沙 门、志贺、金葡）要求高于GB19298-2003； 5、饮用矿物质水 强化矿物质成分的一种水，也有叫矿化水，国家标准起草中； 6、其他包装饮用水
1 2 1 2
多管发酵法 滤膜法 多管发酵法
滤膜法
3 酶底物法
5贾第鞭毛虫和隐孢子虫
免疫磁分离荧光抗体法
二、水样的采集和保存方法GB/T 5750.2
1、水样的采集方法 • 范围：适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存 • 采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。 • 容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放或产生 出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学物质。 • 取样体积：0.5L 采样容器的洗涤和灭菌： 1）容器洗涤：将容器用自来水和洗涤剂洗涤，并且用自来水彻 底冲洗后用质量分数为10％的盐酸溶液浸泡过夜，然后依次用 自来水，蒸馏水洗净；
5）采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按每125ml 水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。
2、水样保存 各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由于物理的、
化学的、生物的作用会发生不同程度的变化，这些变化使 得进行分析时的样品已不再是采样时的样品，为了使这种 变化降低到最小的程度，必须在采样时对样品加以保护。 • 微生物：0～4℃避光保存，每125ml水样加入0.1mg硫代硫 酸钠除去残余余氯，保存时间4h。
• 水质检验项目由原35项增加至106项，旧标准微生
物指标只有细菌总数和总大肠菌群2项，不能确切
的评价水质的卫生状况。 • 修订后的微生物学指标增加为6项： 菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希 氏菌、贾第鞭毛虫和隐孢子虫。
（二）包装饮用水 1、饮用天然矿泉水 新发布的产品标准GB8537-2008《饮用天然矿泉水》标准检验方 法为GB/T 8538-2008《饮用天然矿泉水检验方法》取消了菌落 总数，增加了三个新的致病菌粪链球菌、铜绿假单胞菌和产气 荚膜梭菌，加上大肠菌群共4项微生物指标； 2、饮用天然泉水
报告方式 /(CFU/mL)
16000或1.6×104 38000或3.8×104 27000或2.7×104 1500或1.5×103 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104 < l×l0
四、总大肠菌群检测
1.方法——多管发酵法（另有滤膜法和酶底物法） 2.定义
总大肠菌群（total coliforms）指一群在37℃培养 24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。
3.主要培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基
和革兰氏染液。
4.主要仪器：培养箱、平皿和试管等。
5.检验步骤
①乳糖发酵试验 • 取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接 种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注入9mL灭菌生理 盐水中，混匀后吸取1mL（即0.1mL水样）注入到10mL单料乳糖蛋白 胨培养液中，每一稀释度接种5管。 对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接 接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL水样。 检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1， 0.01mL甚至0.1， 0.01，0.001mL，每个稀释度接种5管，每个水样共 接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接 种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。
50 cfu/mL 3 MPN/100mL 10 cfu/mL 10 cfu/mL 不得检出
10000 个/L 2000 个/L
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数 2 总大肠菌群
1 平皿计数法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法
3 耐热大肠菌群 4大肠埃希氏菌
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例5）；
④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的 平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例6）；
⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接 近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例7）； ⑥若所以稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之； ⑦如果所以平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应 在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数， 除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2， 再乘其稀释倍数作报告；
二、水微生物的种类 • 水微生物的种类很多，有细菌、真菌、病毒、藻 类和原生动物； • 水中大多数微生物属于异养微生物，它能利用水 中有机物质生长，另一类为自养微生物，它只需 无机物质就能合成新的细胞。 三、水中细菌的特点 • 个体小； • 多有鞭毛和纤毛能运动； • 常聚集在一起，或粘附于颗粒物质表面能耐受低 浓度的营养物质； • 多为革兰阴性菌。
调味水，不经调色，增加各种香精风味。
三、与水质相关的各类标准和检验方法
GB5749-2006， 《生活饮用水卫生标准》 GB/T5750-2006， 《生活饮用水标准检验方法》 GB8537－2008，《 饮用天然矿泉水》 GB/T8538－2008，《饮用天然矿泉水检验方法》 GB17323－1998，《瓶装饮用纯净水》 GB17324－2003，《瓶装饮用纯净水卫生标准》 GB19298－2003，《瓶（桶）装饮用水卫生标准》
四、水微生物的卫生学意义
1、引起介水传染病 水是传染性疾病的重要传播途径。病原体进入水体 后可能导致介水传染病的传播和流行； 2、污染食品引起感染 水生微生物还会使水产品和水生生物受到污染，人 在食用后也可引起感染； 3、污染食品引起食品腐败变质 即使污染的不是致病微生物，也有可能引起食品腐 败变质，间接影响人类健康。
不同稀释度的平均菌落数
10-2 164 295 271 30 1650 11 305 0 10-3 20 46 60 8 513 5 12 0
两个稀释度 菌落数之比
—— 1.6 2.2 2 —— —— —— ——
菌落总数/ （CFU/mL）
16400 37750 27100 1500 513000 270 30500 < l×l0
4.主要培养基：营养琼脂 5.主要仪器：培养箱36 ℃+1 ℃等
6.检验步骤
• 生活饮用水 1mL水样+15mL45℃左右琼脂，摇匀，做平 行样和空白对照。冷却后，翻转平板，36 ℃+1 ℃培养48h后计数。 • 水源水 先制成1：10，1：100等稀释液，再按生活 饮用水的检验步骤进行检验。
生活饮用水菌落总数检测操作流程
⑧菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于 100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以 四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指 数来表示。
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
实例
10-1 1 2 3 4 5 6 7 8 1365 2760 2890 150 多不可计 27 多不可计 0
四、各类水质的微生物指标要求
标准名称 生活饮用水 卫生标准 标准号 GB5749-2006 细菌学项目 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 大肠菌群 粪链球菌 铜绿假单胞菌 产气荚膜梭菌 限量 100cfu/ml 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL <1 （个/10L） <1 （个/10L） 100（cfu/ml） 每 100ml 水样中不得检出 每 100ml 水样中不得检出 0 MPN/100mL 0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
第十二章 水质微生物检测
第一节 水中微生物
一、水生境的特征 影响水中微生物分布类群的主要因素： 温度 静水压 光照 溶解氧 氢离子强度 化学物质 营养物质
• 光照：日光中紫外线射入水中强度明显减弱，具有光合作 用的微生物和藻类主要分布在水的表层； • 溶解氧：水中的需氧微生物利用溶解氧，水体表层主要是 需氧和兼性需氧微生物，深层和水底以厌氧微生物为主； • PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然 水的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数 微生物生长的最适pH7.2～7.6； • 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜； • 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
2）容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求160℃，2h；高压蒸 汽灭菌 121℃， 15min 。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用， 应于60℃将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2周内使用。 3）同一水源，同一时间采集几类检测指标的水样时，应先采
集供微生物学指标检测的水样，采样时应直接采集，不得用 水样涮洗已灭菌的采样瓶，并避免手指和其他物品对瓶口的 污染。 4）在取自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后 把水龙头完全打开，放水几分钟后，再取水样。
生活饮用水 卫生规范 饮用天然矿 泉水
卫 生 2001.9.1
部
GΒιβλιοθήκη Baidu8537-2008
各类水质的微生物指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 1998 水卫生标准 菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤ 霉菌和酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 瓶（桶）装饮用 GB19298 － 菌落总数 ≤ 2003 水卫生标准 大肠菌群 ≤ 霉菌 ≤ 酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 海水水质标准 GB3097 － 大肠菌群 ≤ 1997 粪大肠菌群 ≤ 20 cfu/mL 3 MPN/100mL 不得检出 不得检出
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水
• 新发布的产品标准 GB5749-2006
• 标准检验方法为 GB/T5750-2006
生活饮用水
7.菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要 时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落 数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计 算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个 平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以 无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。 若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数 分布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2以代表全 皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
3 、水样的过滤和离心 需要进行微生物检测的样品， 不能进行过滤和离心。
三、细菌菌落总数检测
1.方法——平皿计数法 2.范围：此方法适用于测定生活饮用水及其水源水
中的细菌总数
3.定义:
菌落总数（standard plate-count bacteria） 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后， 所得1mL水样所含细菌的总数。
8.不同稀释度的选择及报告方法
①首选30～300之间进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落 数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表 1实例1）； ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视 二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数 （见表1实例2），若大于或等于2则报告其中稀释度较小的 菌落数（见表1实例3、4）；