烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生

烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生

2001级生物科学1班 200113515 黄麟飞

摘要：在MS培养基上,接种烟草无菌苗的叶片,分别放在光照和黑暗条件下诱导愈伤组织,接种于MS分化培养基上,在光照下分化再生植株。结果表明:光照和植物生长调

节剂对植物愈伤组织的诱导和植株再生产生影响。

关键词: 烟草 愈伤组织 植株再生

Callus Inducement and Plant Regegeration Of Tobacco

Huang Linfei

Abstract: culture the leaves of tobacco into MS inducing medium separately under light and darkness. Then culture the induced callus into MSregeneration medium under under light. The result sayed that callus inducement and plant regeneration of tobacco was effected by light and plant grow regulators.

Key Word: tobacco callus plant regeneration

二十一世纪是生命科学的时代，这一上世纪末科学家的语预言现在已经真切地在众多科技领域强大背景下款款而来了。1998年8月12日美国总统克林顿发表了美国生物物质研究战略,决定2000年拨款2.1亿美元作为研究经费。 日本于2000年制定了“21世纪生物技术发展规划”，并提出了“生物产业利国”的口号[1]。生物技术在医疗、保健、农业、环保、轻化工、食品等重要领域对改善人类健康与生存环境，提高农牧业与工业产量与质量都开始

发挥越来越重要的作用。

生物技术涵盖的技术领域范围很广，包括遗传工程、细胞融合、细胞组织培养、胚胎及细胞核移植等技术。其中细胞组织培养是诸多技术的基础。它又分为植物和动物的细胞组织培养。所谓植物细胞组织培养是指在无菌条件下利用人工培养基对植物细胞组织进行的培养。它在作物育种、花果蔬菜及中草药的脱毒和快繁方面具有其他技术[2]手段都无可比拟的优势。目前已经广泛应用于工农业生产、濒危植物的营救以及种质资源的保存、低等植物的生态研究等方面，为保护生态提供了理论依据[3]。

早在1902年，德国科学家哈伯兰特就预言植物细胞具有全能性，经过几十年的不断探索，美国人斯图尔德在20世纪50年代初，用胡萝卜体细胞经胚状体途径培养成完整植株，首次证明了植物细胞全能性。此后，植物细胞和组织培养发展迅速，目前大约有1500种植物能进行组织培养，其中包括烟草，早期的许多科学家就是把它作为研究对象。

烟草（tobacco），茄科烟草属（Nico tianal L.）含有尼古丁的叶用一年生作物，是烟草加工业的重要原料，同时也是医药、食品和饲料工业的原料之一。人类使用烟草大约有1500年的历史。印地安人于1519年开始在墨西哥栽培烟草。现在烟草的栽培种植已遍布世界，成为一种重要的经济作物[4][5]。

在本实验中，通过对烟草叶片愈伤组织诱导及植株再生，学习植物细胞组织培养责这

一技术以及观察分析外界条件对外植体生长发育的影响。

1材料与方法

1．1材料

将烟草种子用消毒液84#消毒后，无菌水反复洗3次，无菌吸水纸吸干水分，接种在

MS培养基上，获得的无菌苗作为愈伤组织诱导的材料。

1．2方法

1．2．1培养基的配制

本实验中获得无菌苗、愈伤组织的诱导和植株再生等各步骤均要使用MS培养基[6]；而后二者还应在MS培养基的基础上添加一定种类和浓度的植物生长调节剂。（各类培养基的配方见表1~3）

表3 分化培养基

按照培养基的配方和实验中所要用到培养基的量计算各种药品的用量，并向烧杯中顺序加入培养基母液，加入实际用量体积约2/3~3/4的蒸馏水，按20g/ L加入蔗糖调节渗透压，用0.5N的NaOH 和 0.5N HCl调整PH至5.8~6.0。按7g/L假加入琼脂，加热，搅拌。待琼脂完全熔化后定容至500mL，继续加热几分钟后均匀分装入三角瓶中（按每瓶30mL）。作上记号。

分装好后放置于高压蒸汽灭菌锅 中灭菌20min左右，温度1210C ,压力1.1Kg/cm。灭菌后的培养基放置于无菌室保存备用。

1.2.2愈伤组织的诱导

进入超净工作台前，对接种室用紫外灯灭菌1~2小时。进入超净工作台时，用75%的酒精对设备、工具、三角瓶及手消毒。点燃酒精灯，将镊子、解剖刀在酒精灯上烘烤干。取一

个无菌培养皿，加入几滴无菌水，然后用解剖刀切1~2片无菌叶片成2mm2左右的小片，并迅速夹取小叶片接种于培养基上，一般每瓶接种5片。迅速封好瓶口，作上记号。3瓶放置于光下培养，3瓶放置于黑暗中培养。

接种后的三角瓶放在240C下黑暗中先培养7天，然后在同样温度下有光和黑暗下培养至愈伤组织形成。全部过程持续28天。

1.2.3器官分化及植株再生

将诱导好的愈伤组织分别转入分化培养基上，每瓶放五块愈伤组织，并作上标记，放在连续光照或16h/d光照，温度20~220C培养21天。若没有芽形成，或愈伤组织状态没有明显变化，应及时调整培养基的激素浓度，更换新鲜培养基。

2.结果与分析

2.1愈伤组织诱导的结果与分析

实验结果表明，MS诱导培养基对烟草无菌苗叶片有很高的诱导率，二者均为100%。说明较高浓度的生长素和细胞分裂素能很好地诱导愈伤组织[7]。诱导率的高低与光照无关，但是光照对愈伤组织的状态有明显的影响。这首先表现在光照条件下诱导出的愈伤组织呈现绿色，愈伤组织细胞在光下形成叶绿体；而黑暗条件下诱导出的愈伤组织呈现乳白色或淡黄色，愈伤组织的细胞不形成叶绿体。其次，黑暗下诱导的愈伤组织相对光照下诱导的愈伤组织生长的更大，结构更疏松，生长更良好。说明暗培养比光培养更有利于愈伤组织的诱导。