从拟南芥的T0123代获得纯合株系转基因必经之路

从拟南芥的T0123代获得纯合株系转基因必经之路

作为模式生物，拟南芥（Arabidopsis thaliana）主要有以下几方面的优势：第一，拟南芥的基因组在常见的植物模型中是最小的，染色体数目也很少，只

有五对同源染色体。

第二，植株体积小，对环境的适应性强，生活周期短，繁殖能力强，播种到收

种需要两个月左右。

第三，自然条件下，拟南芥是严格的闭花自花传粉，基因高度纯合，易稳定遗传，强可诱变性。

第四，拟南芥研究的相关遗传手段和生化分子技术都已经比较成熟。

第五，丰富的种质资源。运用高通量转化技术得到的T-DNA插入的突变体库，

已经鉴定的独立的T-DNA插入株，几乎覆盖了所有的编码基因。

健康生长的时候还是蛮可爱的

获得转基因拟南芥T0代：

日常使用浸花法（floral dip method）（Clough等，1998）转化拟南芥。将拟南芥的花序放到含有农杆菌的转化介质中浸泡3～5分钟，在转化介质的帮助下，农杆

菌可以穿过植物细胞壁和质膜，侵染雌配子体即胚囊，并将带有目的基因和元件的

T-DNA片段整合到雌配子的基因组上（Desfeux等，2000; Bent A, 2023）。

T1T2T3获得纯合株系：

1.野生型拟南芥，称为T0代，经过侵染之后，而从T0代上收集到的种子是T1代种子（混合收种）

2.将T1代种子铺种在含有抗生素的MS培养基上，直接筛选出转基因T1代阳性

的幼苗，移栽到穴盘，悉心呵护，收集到T2代种子（单株收种）。需要注意的是，T1代均为杂合子，但是并不确定是单拷贝或是多拷贝插入。

3.将T2代种子铺种在含有抗生素的MS培养基上，此时阳性苗：阴性苗（未发芽

的种子不计入）如果符合3：1的分离比，则目的基因以单拷贝插入，将其中的阳

性苗移栽，同样悉心呵护，收集T3代种子（单株收种）。不符合3:1则可能有多

个拷贝插入不同位点（多拷贝插入往往会引起基因沉默现象，扔了算了）。

4.将T3代种子铺种在含有抗生素的MS培养基上，一段时间之后，你发现一些培

养皿里全是阳性苗，恭喜！你拿到了自己的转基因纯合株系。

没错，是我的崽

实用tips：

种子灭菌消毒，越到后面的时候，培养基上种子的密度要控制好，有能力的话最好做到粒粒分明，方便统计。

每次播种不要全部播完，给自己留条后路。你永远不知道自己会不会碰到配错培养基，抗生素加错，培养基污染，疫情开不了学苗子活活旱死等各种状况（血泪控诉）。

1篇相关文献，感兴趣可以康康：唐微.几个转基因植株后代的遗传分析[J].安徽农业科学,2023(31):9867-9868.