免疫学检测技术及应用

1.免疫酶染色(又称免疫组化技术, immunohistochemistry technique)
原理：用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸 酶等) 标记抗体(酶标抗体)，将酶标抗体 与抗原(细胞或组织切片)作用，抗原与酶 标记抗体结合，加底物，酶催化底物产生 有色物质，观察结果。
应用：细胞内、组织内抗原的定性、 定量和定位检测。
检测未知抗原； 来自百度文库测未知抗体。
Sensitivity of varior immunoassays
一、沉淀反应(precipitation)
可溶性抗原与相应抗体在电解质存在 条件下结合，出现沉淀物的现象。
沉淀反应的试验方法：环状法 絮状法 琼脂中沉淀法
琼脂中沉淀反应法：
• 双向免疫扩散(double immunodiffusion) • 单向免疫扩散(single radial
凝集反应包括：
◆ 直接凝集反应 (direct agglutination) ◆ 间接(被动)凝集反应(indirect/passive
agglutination) ◆ 间接凝集抑制试验(indirect agglutination
inhibition test) ◆ 协同凝集试验(coagglutination test) ◆ 抗球蛋白试验(antiglobulin test，Coomb’s
technique) （二）免疫酶技术(immunoenzymatic
technique) （三）同位素标记技术(isotope labelling
technique) （四）发光免疫测定(luminescent immuno-
assay, LIA) （五）免疫胶体金标记技术(colloidal gold
抗原抗体反应的主要影响因素：
1.电解质:
在中性或碱性条件下,抗原抗体均带负电 荷,•适当浓度的电解质会使它们失去一部 分负电荷而互相结合,出现明显的沉淀或凝 集现象。
2.温度:
37℃
3. 酸碱度:
pH6-8
抗原抗体反应包括：
沉淀反应 凝集反应 溶解反应 补体结合反应 中和反应
已知抗体 已知抗原
胞、蛋白质等 4. 免疫细胞的分离、鉴定及功能测定：
如：T细胞及其亚群等
抗原－抗体反应
抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生 特异性结合，呈现的某种反应现象。
抗原抗体反应有以下几个特点:
1.抗原与抗体结合是特异性结合 表位(抗原)——超变区(抗体)
2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合 氢键、疏水键、静电引力和范德华力
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
test)
三.免疫标记技术
用荧光素、同位素、酶及发光等示踪物 质标记抗体(或抗原)，与抗原(或抗体)进行反 应，通过检测示踪物质，分析被检抗原(或抗 体)的存在或含量的方法。
灵敏度：高，1X10-4 ～1X10-5ug抗体/ml 应用：微量物质的定性、定量或定位。
免疫标记技术的基本类型：
（一）免疫荧光技术(immunofluorescence
(Van der waal‘s force) 、电子云力的合 力。
抗原和抗体可解离,性质不变。
3.抗原抗体反应可分为两个阶段 （1）特异性结合阶段
此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见 反应出现 （2）可见反应阶段
需时较长,数分,数小时或数日出现可见现 象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等 4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现 象,与两者的分子比例密切相关
特异性强 应用：微量抗原和抗体检测。 缺点：不稳定，废物处理麻烦等。
（四）发光免疫分析(luminescent immunoassay, LIA)
原理：用发光物质标记抗体(或抗原),再同 抗原(或抗体)进行反应，以发光现象作为抗原 抗体反应的指示系统。
2.酶免疫测定
酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)
原理：①将抗原(或抗体)结合于固相载体； ②与抗体(或抗原)反应；③加酶底物，酶促反 应。
灵敏度：2X10-5 μg／ml 应用：广泛，可检测微量抗体和抗原(如微 生物成分、激素、细胞因子、粘附分子等）。
immunodiffusion) • 对流免疫电泳(counter
immunoelectrophoresis) • 火箭电泳(rocket electrophoresis) • 免疫电泳(immunoelectrophoresis)
二、凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗 原(或抗体)于相应抗体(或抗原)，在电解质 存在下出现凝集物的现象。
免疫学检测技术及 应用
免疫学检测技术应用：
1. 疾病的诊断、治疗效果评价及发病 机理探讨：
如：感染性疾病、免疫缺陷病、超敏 反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排 斥反应、肿瘤等
2. 免疫分子的定性、定量测定：
如：细胞因子、粘附分子、细胞受体、 补体、抗体等
3. 抗原物质的定性、定量检测： 如：病原微生物及其代谢产物，组织细