常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度

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685.9
使用:
贮存浓度:1mg/ml,使用浓度:
0.7 μg/ml(1 μM)
EDTA-Na2
特性:
金属蛋白酶抑制剂
溶解性:
溶于水至
0.5M,在pH8-9的条件下,4℃稳定至少6个月
分子量:
372.24
使用:
工作浓度:
0.2–
0.5 mg/ml(
0.5–
1.3 mM),不需现用现配,在溶液pH值调至8-9时再加入。
磷酸酶抑制剂
NaF氟化钠
溶解性:
溶于水
分子量:
41.99
使用:
贮存液:5M工作浓度:10-20mM
Na3VO4原矾酸钠
分子量:
183.91
溶解性:
溶于水,我们购买过来的是原矾酸钠.原矾酸钠需要经过处理以后才能成为激活的矾酸钠,激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用.原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是:100mM原矾酸钠激活储存液配制
常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度
在与蛋白相关的检测中,首先最关键的一步便是蛋白质的提取。蛋白质的提取过程中,我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中,磷酸酶抑制剂也是必不可少的,本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF,Leupeptin亮肽素,Aprotin抑肽酶,Pepstatin胃蛋白酶抑制剂,EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠,Na3VO4原矾酸钠,BETA-glycerophosphate甘油磷酸钠,Na2P2O4焦磷酸钠等。对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制,贮存液与工作液浓度,保存都做了详细的说明。
蛋白酶抑制剂
PMSF:
特性:
丝氨酸蛋白酶抑制剂,如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶和凝血酶,也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶(可逆的地面处理)。
溶解性:
溶于异丙醇,乙醇,甲醇和丙二醇果>10mg/ml。在水溶液中不稳定。在100%异丙醇,+25℃时稳定至少9个月
分子量:
174.2
使用:
贮存浓度:200mM,工作浓度:1mM
溶解性:
易溶于水(10mg/ml)或缓冲液(例如,tris,
0.1M,pH
8.0)。pH约7-8的溶液在4℃可保存1周,分装保存在-20℃可至少保存6个月。避免反复冻融, pH>
12.8的碱性环境可使其灭活。
分子量:6,512
使用:
贮存浓度:1mg/ml,工作浓度:
0.06–
2.0 ug/ml(
ຫໍສະໝຸດ Baidu0.01–
0.3 uM)
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂
特性:
抑制天冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶,肾素,组织蛋白酶D,凝乳酶,许多微生物酸性蛋白酶
溶解性:
溶于甲醇约1mg/ml;可溶于乙醇,过夜溶解可达到1 mg/ml;在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。4℃稳定一周,分装储存于-20℃时可保存1个月
分子量:
(1).取
0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10(颜色变黄)
(2).煮至无色
(3).室温冷却
(4).重调PH至10
(5)重复(1)(2)(3)(4)直至溶液保持无色,并且PH稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管.(终浓度为1mM),-20度保存.
使用:
贮存液:100mM工作浓度:1mM
Leupeptin亮肽素
特性:
抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,纤溶酶,和组织蛋白酶B溶解性:
高度溶于水(1mg/ml)。4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月
分子量:
使用:
贮存浓度:1mg/ml,工作浓度
0.5 ug/ml (1mM)
Aprotin抑肽酶
特性:
丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制纤维蛋白溶酶,激肽释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。
BETA-glycerophosphate甘油磷酸钠
溶解性:
溶于水
分子量:
306.11
使用:
贮存液:100mM工作浓度:25mM
Na2P2O4xx磷酸钠
溶解性:
溶于水
分子量:
265.9
贮存液:100mM,工作浓度:1-2 mM
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