薄层色谱法概述PPT课件..

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载板——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中 浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后 充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。 要求光滑、平整、洗净后不附水珠。 黏结剂 无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加 石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏 结剂的吸附剂以字母“H”表示。无机黏 结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂 铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄 层强度差。
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薄层色谱系统

薄层板 未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料， 对能形成氢键的物质有特别的选择性。
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表面改性固定相 疏水改性硅胶——化学键合烷基 亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二 羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和 疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨 基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。 表面改性纤维素——乙酰化纤维素 药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、 氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一 般要求10 – 40 um。

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薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例： 硅胶板（粒度10 ～40um） 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。 硅胶或硅胶G ——以CMC为黏合剂。配 制0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使 悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂 匀浆。

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有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、 淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特 点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓 硫酸作显色剂。 荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指 示剂，常用的荧光指示剂 在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光 素、硫化镉、阴极绿等。 在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。 含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示， 并以下标注明其激发光波长。例 硅胶HF254

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点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽 可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待 前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾， 分离度变差，以最小检测量的几倍～几 十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 – 5ul），微量注射器。
第四章 薄 层 色 谱 法
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概 述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。

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原点
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离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。 锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶 剂 前 沿

薄层被刮 掉部分
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自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气 流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层 上流下样品条带。 • 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加； 条带宽度不超过2mm，有利于改善分 辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要 求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径 2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。
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反相薄层板制备——以不同链长的 正构烷 烃为固定液, 配制成适当浓度的溶液(如5% 硅酮油乙醚溶液), 浸渍硅胶板。 薄层板活化 涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前 置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后 置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有 不同，如： 硅胶 110℃ 1h 氧化铝 110℃ 30min
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色谱分离 TLC可同时分离多个样品，并可采用相同 或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通 常采用正相色谱，色谱后衍生化方便。 HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。

对污染物抗受力强 TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。 HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、 不可逆吸附物质均有大的影响。

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展开方式 多数采用直线形上行展开，薄层板水平 角度以75 为最佳。展开距离一般为1015cm。 多次展开——一次展开未达满意分离时， 可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展 开，可重复多次，直到混合物分离为止。 分步展开——混合物性质差别较大时， 一种流动相不能有效分离时，可采用不 同溶剂依次展开不同距离。
15பைடு நூலகம்

检测
物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭 化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、 持久、专属、灵敏、线性良好。 斑点定位方法 碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将 碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸 内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂 置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时 间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信 噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风 处使碘挥发。
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薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点） 固定相和流动相 TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制，固定相不用 再生。而 HPLC是在封闭的系统内， 流动相流量靠泵控制，溶剂选择受检 测器限制，固定相需再生。 样品处理 TLC要求没有HPLC严格。
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连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。 二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。