生化实验-血糖的测定.ppt
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邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不 便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和 科研上已很少采用。
思考题
1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖 参考值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.9~6.1mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.9~6.1mmol/L
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋ O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm
分光光度计的原理
生物化学的四大研究技术：
? 分光光度技术
?光的波粒二象性 ?物质的光吸收性
? 评价
结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。
? 空腹正常血糖参考值
3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL
葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能 反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒， 广泛应用与临床。
Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质 均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原 物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考 值较其他方法略高。
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。
2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。
其他常用血糖测定方法介绍
? 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 ? Folin-Wu法 ? 邻-甲苯胺法
Folin-Wu法
? 原理 葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成 Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过 比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。
空白管 (ml)
– – 0.02 3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律 ： A=KLC 标准管葡萄糖浓度： 5mmol/L
测定管光密度
测定管葡萄糖含量 ＝
×5
（mmol/L）
实验四
血糖的测定
血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L
?调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质 激素和肾上腺素。 ?血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖
测定血糖的意义
?临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾 病的主要依据。
? 评价 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还 原物质的影响。
? 空腹正常血糖参考值 4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL
其他常用血糖测定方法介绍
? 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 ? Folin-Wu法 ? 邻-甲苯胺法
邻-甲苯胺法
? 原理
葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产 生蓝绿色的席弗(Schiff)碱，颜色的深浅与葡萄糖含量 成正比，可通过比色法测得血糖含量。
样品的吸光度值。
葡萄糖氧化酶 -过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响
方 法
实验步骤：
（1）取4支试管，按下表加入试剂:
试剂
血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂
标准管 (ml)
– 0.02
– 3.00
测定管 1(ml)
0.02 – –
3.00
测定管 2(ml)
0.02 – –
3.00
?科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在 某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。
体液பைடு நூலகம்的测定项目：
①血糖浓度测定 ②口服糖耐量试验 ③糖化血红蛋白试验 ④糖化血清白蛋白测定 ⑤胰岛素测定 ⑥C-肽测定等
血糖测定的常用方法
测定 方法
无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法
酶法：葡萄糖氧化酶法
C样=
A样 A标
× C标
标准品法测定未知样品含量
分光光度计的使用
1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中
，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖
）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测
标准管光密度
注意事项
? 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的2/3。
? 血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。
? 酶酚混合液一般现用现配。
补充实验
?测2-3名同学早餐后和空腹血糖的 水平，并比较二者之间的区别。
?使用怡成JPS-5型血糖仪。
小结
2、肾上腺素使血糖升高的机理是什么？能够 升高血糖的激素有哪些？
? 电泳技术
?分光光度计的原理
? 层析技术
? 离心技术
分光光度计的工作原理
朗伯-比尔定律
朗伯定律 ：A=k1L 比尔定律 ：A=k2C 朗伯-比尔定律 ：如同时考虑液
层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。
A=KLC
朗伯-比尔定律应用
A标=KC标L A样=KC样L
思考题
1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖 参考值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.9~6.1mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.9~6.1mmol/L
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋ O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm
分光光度计的原理
生物化学的四大研究技术：
? 分光光度技术
?光的波粒二象性 ?物质的光吸收性
? 评价
结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。
? 空腹正常血糖参考值
3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL
葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能 反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒， 广泛应用与临床。
Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质 均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原 物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考 值较其他方法略高。
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。
2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。
其他常用血糖测定方法介绍
? 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 ? Folin-Wu法 ? 邻-甲苯胺法
Folin-Wu法
? 原理 葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成 Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过 比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。
空白管 (ml)
– – 0.02 3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律 ： A=KLC 标准管葡萄糖浓度： 5mmol/L
测定管光密度
测定管葡萄糖含量 ＝
×5
（mmol/L）
实验四
血糖的测定
血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L
?调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质 激素和肾上腺素。 ?血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖
测定血糖的意义
?临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾 病的主要依据。
? 评价 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还 原物质的影响。
? 空腹正常血糖参考值 4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL
其他常用血糖测定方法介绍
? 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 ? Folin-Wu法 ? 邻-甲苯胺法
邻-甲苯胺法
? 原理
葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产 生蓝绿色的席弗(Schiff)碱，颜色的深浅与葡萄糖含量 成正比，可通过比色法测得血糖含量。
样品的吸光度值。
葡萄糖氧化酶 -过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响
方 法
实验步骤：
（1）取4支试管，按下表加入试剂:
试剂
血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂
标准管 (ml)
– 0.02
– 3.00
测定管 1(ml)
0.02 – –
3.00
测定管 2(ml)
0.02 – –
3.00
?科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在 某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。
体液பைடு நூலகம்的测定项目：
①血糖浓度测定 ②口服糖耐量试验 ③糖化血红蛋白试验 ④糖化血清白蛋白测定 ⑤胰岛素测定 ⑥C-肽测定等
血糖测定的常用方法
测定 方法
无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法
酶法：葡萄糖氧化酶法
C样=
A样 A标
× C标
标准品法测定未知样品含量
分光光度计的使用
1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中
，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖
）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测
标准管光密度
注意事项
? 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的2/3。
? 血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。
? 酶酚混合液一般现用现配。
补充实验
?测2-3名同学早餐后和空腹血糖的 水平，并比较二者之间的区别。
?使用怡成JPS-5型血糖仪。
小结
2、肾上腺素使血糖升高的机理是什么？能够 升高血糖的激素有哪些？
? 电泳技术
?分光光度计的原理
? 层析技术
? 离心技术
分光光度计的工作原理
朗伯-比尔定律
朗伯定律 ：A=k1L 比尔定律 ：A=k2C 朗伯-比尔定律 ：如同时考虑液
层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。
A=KLC
朗伯-比尔定律应用
A标=KC标L A样=KC样L