组培常见问题

植物组培过程中污染产生的原因及防治措施

一、污染的原因

污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象。组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。细菌污染常在接种1-2d后表现，培养基表面出现黏液状菌斑。真菌污染一般在接种后3d以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。

造成污染的原因也很多，主要有

(1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底

(2) 外植体消毒不彻底

(3) 接种时不严格无菌操作

(4) 接种和培养环境不清洁

(5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。

二、材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造成细菌污染的重要原因。培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜破损等主要引起真菌污染。2 污染的预防措施

2.1灭菌要彻底

在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。首先是培养基的灭菌，耐高温的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会在培养基表面产生细菌性的污染。一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。其次，接种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌，特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡，单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。

2.2环境消毒

不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高。接种和培养环境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每年熏蒸2-3次。平时读接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或喷2%来苏尔消毒。臭氧消毒机对环境消毒效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。

2.3严格无菌操作

在接种时要严格无菌操作，避免人为因素造成污染。为了使超净工作台有效工作，防止操作区域本身带菌，要定期读一过滤器进行清洗和更换。对内部的过滤器，不必经常更换，但每隔一定时间要检测操作区的带菌量，如果发现过滤器失败，则要整块更换。此外还需要测定操作区的风速，通过调压旋钮使操作区的风速达到无菌操作需要的20-30m/min。

植物组培过程中培养物的玻璃化及其防治方法

当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，苗体趋于透明，其茎、叶表面无蜡质，这种现象通常称为玻璃化。玻璃化为组培苗的生理失调症，它的出现会使组培苗生长缓慢、繁殖系数有所下降，玻璃化的嫩茎不宜诱导生根。

1 导致玻璃化的主要因素：

① 材料差异，在不同的种类、品种间，组培苗的玻璃化程度有所差异。

② 激素水平过高,若细胞分裂素浓度过高或细胞分裂素与生长素相对含量高，易引起玻璃化现象。

③ 培养基水势，培养基中离子种类,比例不适。

④ 环境温度、光照强度和通气性。温度过低或过高,光照时间强度不足及培养容器中空气湿度过高，透气性较差所造成的通气不良,易造成组培苗含水量高,从而发生玻璃化现象。

⑤ 琼脂浓度降低、有杂质等。

2 常用的防治措施有

① 增加光照强度和光照时数。

② 降低细胞分裂素含量。在培养基中添加少量聚乙烯醇、脱落酸等物质，能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生

③ 增大培养基中琼脂的含量，以降低培养基的水势

④ 降低NH4+浓度，减少培养基中含氮化合物的用量

⑤ 增加容器通风，最好进行 CO2施肥，这对减轻组培苗玻璃化的现象有明显的作用；

降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻组培苗玻璃化的现象发生；

组培苗瘦弱或徒长的防治措施

正常的组培苗应当叶色浓绿、植株粗壮。如果在增殖阶段出现芽苗瘦弱、徒长或节间过长，这种苗转入生根培养时能够生根，在环境条件较好的情况下，也会稍转粗壮，但总体看来，苗的株型、叶色、叶片大小等性状还是差于生长正常的增殖苗；有时即便是正常或健壮的增殖苗，若生根阶段培养基不适宜或培养的环境条件得不到保障，往往根原基及根还未形成，就很快表现出小苗徒长，节间明显伸长，叶片变细、变薄、变嫩并出现黄化。这样的苗进行过渡培养时，会出现萎蔫和烂根，很容易死亡，过渡成活率极低。

对组培苗瘦弱的原因分析如下。

(1)细胞分裂素浓度过高，产生了过多的不定芽，这些密集的芽若不及时进行转移和分切，很快就开始变成瘦弱苗。

(2)温度过高，高温有利于苗的生长，多数品种适宜的温度是25℃左右，在过高的温度条件下，苗木的伸长速度快，叶片变薄、变长。

(3)光照不足，组培苗会变黄、变弱、变细并加速生长，使苗在短时间内变得更瘦弱。

(4)培养基水分过多，在琼脂含量不足会引起植株徒长变弱。

(5)通气不良，在使用不透气膜时，会增加瓶内湿度，从而使苗表现嫩弱。

以上因素同时出现时，对苗的不良影响明显大于单一因素，各个因素之间相互促进又相互制约。因此控制瘦弱苗，培养粗壮苗应通过多个因素共同调节才可能获得理想的效果。

减少和避免徒长和瘦弱苗的产生，可从以下几个方面考虑。

(1)根据品种特点减少细胞分裂素用量，加速继代转瓶的速度，适当降低接种密度。

(2)利用空调降低培养室温度。

(3)提高光照强度和延长光照时间，充分利用较强的自然光做光源，调整摆放位置和密度。

(4)调整培养基硬度，改用透气膜做封口，进行培养基及环境因子的综合调控，力求获得最优质

健壮的组培瓶

苗。

植物组织培养技术原理之灭菌方法

常用的灭菌方法：常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和