实验四 胶体金试纸条检测技术

实验四
胶体金试纸条诊断技术
一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层 析技术研制而成，该技术是90 90年代初在免疫 析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免 疫学检测技术， 疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激 HCG） 素 （ HCG） 的测定和乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg）等检测。 （HBsAg）等检测。
胶体金标记的原理： 胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷， 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique） technique） 是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
H5亚型 亚型AIV尿 亚型 尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 Ａ 细胞 毒阳性结果
阴性对照
gold） 胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 的水溶胶， （HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作 用下，聚合成特定大小的金颗粒， 用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静 电作用成为一种稳定的胶体状态。 电作用成为一种稳定的胶体状态。
胶体金的质量判定标准 质量好的胶体金：溶液呈红色， 质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球 大小均一，无棱角。 形，大小均一，无棱角。 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一， 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。 各异。
测
定
若标本中有待测特异抗原， 若标本中有待测特异抗原 ， 即 可与免疫金复合物中的抗体结 合 ， 此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获， 试区即被固相抗体捕获 ， 在膜 上显出红色反应线条 反应线条（ 上显出红色反应线条（T）。
测
定
过剩的免疫金复合物继续前行， 过剩的免疫金复合物继续前行 ， 至参照区与固相抗小鼠IgG IgG结合 至参照区与固相抗小鼠IgG结合 （ 免疫金复合物中的单克隆抗 体为小鼠IgG IgG） 而显出红色质 体为小鼠IgG），而显出红色质 控线条（ 控线条（R）。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
胶体金试纸条示意图
连接垫 胶体金垫） （胶体金垫） 样品垫 质检线 吸收垫
背衬 底板） （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
测
定
测定时将试纸条下端浸入液体 标本中， 标本中 ， 下端吸水材料即吸取 液体向上端移动，流经C 液体向上端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物 复溶， 免疫金复合物复溶 干片上的 免疫金复合物 复溶 ， 并带动其向膜条渗移。 并带动其向膜条渗移。
测
定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。 阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5 10min 简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就 会出结果， 而其它方法如ELISA 需要1 ELISA需要 会出结果 ， 而其它方法如 ELISA 需要 1 -2h ， 需要时间更长。 PCR 需要时间更长。 结果易于判定： 阳性呈色很明显， 结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。 很容易判断。 特异性好： 特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 这决定了它具有很好的特异性。 记，这决定了它具有很好的特异性。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体， 以硝Biblioteka Baidu纤维素膜为载体 ， 利用了微孔膜 的毛细血管作用， 的毛细血管作用 ， 滴加在膜条一端的液体慢 慢向另一端渗移， 通过抗原抗体结合， 慢向另一端渗移 ， 通过抗原抗体结合 ， 并利 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ 抗体。 抗体。
胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。 寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、 寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 恙虫病。 病、恙虫病。 细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。 细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。