掌握细菌的简单染色法精品PPT课件

固定方法： 热固定：涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态
4、染色
操作步骤（continued）
◇ 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上 （染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 ◇ 美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min。
5、水洗
倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂 片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。 Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载 玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。
细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一 种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱 性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而 碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷， 因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细 菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的 对比，在显微镜下更易于识别。
操作步骤（continued） 6、干燥 自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。
7、镜检 细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。
7、镜检（continued）
操作步骤（continued）
Notes:
1) 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油
2) 油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净， 否则可能损害镜头
革兰氏染色（Gram stain） 1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细 菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+） 和革兰氏阳性（G-）
革兰氏染色步骤: 1）结晶紫初染；2）碘液媒染； 3）酒精脱色； 4）番红复染
实验原理
G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网 状分子形成一种透性屏障，当 乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔 障缩小，故保留结晶紫-碘复 合物在细胞膜上。呈紫色。
实验 细菌的染色
细菌的单染色法 细菌的革兰氏染色 芽孢染色 荚膜的染色
实验目的
1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌 的简单染色法。 2、初步认识细菌的形态特征。
3、学习细菌的革兰氏染色原理和方法 4 、了解细菌的特殊形态结构：
芽孢、荚膜的染色
5、学习训练无菌操作技术。
1 细菌的简单染色
实验原理
Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取 菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
操作步骤（continued）
菌悬液
涂片
干燥
滴加无 菌水
取菌苔
涂片
固定
2、干燥 室温自然干燥
操作步骤（continued）
3、固定源自文库
固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
➢ 简单染色：枯草芽孢（1d）。 ➢ 革兰氏染色：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、本人
4细菌荚膜的染色
负染色法： 1、制片：取洁净的载玻
片一块，加一滴黑墨水， 取少量的菌体放入墨水滴 中混匀并涂片。
2、刮片：另取一载玻片， 以三十度角将其边缘浸入 黑素中向右端拖动，将黑 素涂成一薄层。
3、镜检：10x ，40x 物 镜观察（注意物镜不要接 触黑素，不要用油镜观察）
荚膜
本实验安排
每人
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复 红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌 所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红 等酸性染料染色。
实验材料 1、菌种
枯草芽孢杆菌12～18h培养物 金黄色葡萄球菌24h培养物
2、染色剂 吕氏碱性美蓝染液 齐氏石碳酸复红染液
四、实验步骤
革兰氏染色液一套
实验步骤
革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢染色 荚膜的染色 绘图、写实验报告
革兰氏染色的步骤
1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸
铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约15－20秒，后立 即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3分 钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
Figure 2 - Gram stain of Gram –
E. coli cells
3 枯草杆菌芽孢的染色
1、制备菌液：加2-4滴蒸馏水于小试管中，用 接种环从斜面挑取菌体4环于试管中充分混匀。 2、加染色液：加孔雀绿3滴于1.5ml 离心管中。 3、加热：沸水浴，15-20分钟。 4、涂片：用接种环从离心管中取一环菌涂于一 干净载玻片上，制成涂片。 5、干燥、火焰固定 6、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。 7、复染：加复红染色1-2分钟。水洗，吸水纸 吸干。 ８、镜检：10x ，40x 、100X（油镜）观察。
涂片 干燥
无菌操作
水洗
固定
干燥
染色
镜检
操作步骤
1、涂片
操作步骤（continued）
取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取） 生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无 菌操作从枯草杆菌（1d）斜面上挑取少许菌苔于水 滴中，混合并涂成薄膜。
如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2 环直接涂于载玻片上。
3）擦油镜镜头方法：分三步 A）先用擦镜纸揩去 镜头上的香柏油 B）从双层瓶的下层沾少许二甲 苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头； C）再用一 小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
2、革兰氏染色
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 荚膜染色法等。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松 散，乙醇脱色不能使其结构收 缩，其脂含量高,乙醇将脂溶 解，缝隙加大，结晶紫-碘复 合物溶出细胞壁，番红复染后 呈红色。
细菌的特殊形态结构
芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。
荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体
实验材料
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌（2d）、胶质芽胞杆菌