免疫电泳详细教程课件
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火箭免疫电泳只追求对抗原进行定量分析。可以 精确、简单、快速的定量分析0.5-2μg的抗原。
在这个过程中，我们在1-2%的琼脂糖凝胶中（厚 约1.5mm）打上几个大约3-8mm长的小洞，待测 样品和稀释不同程度的标准抗原被加入这样的小 洞以建立标准曲线。和交叉免疫电泳的第二步类 似，抗原在含有抗体的胶中进行电泳，很快火箭 样的沉淀线形成并向着电极的方向移动直到稳定 下来。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
由于大多数抗体的等电点大约为中性pH值 范围，因此利用中性缓冲液体系进行电泳 时，抗体分子不动或者移动很小。因为抗 原在胶中的迁移是根据其带的净电荷，所 以它们的等电点必须与缓冲液体系的pH值 有较大的差异。如果这些条件都满足了， 如带负电的抗原其Байду номын сангаас抗体结合的沉淀线便 会在适当的区域产生并快速向正极移动 （形成逐渐向正极移动的沉淀峰）。除非 再也没有抗原可以进行扩散，这时沉淀峰 的移动才会停止。
只有在抗原和抗体具有不同的等电点并且伴随不 同的迁移速率，火箭电泳才能进行。如果不满足 这个条件，可以由氨甲酰化抗原来降低其等电点， 方法是这样的：
一体积抗原溶液和一体积KCNO(2mM)在45℃孵 育30min。待冷却以后，该混合液用电泳缓冲液 调整到要求的浓度，然后加入到胶中即可。
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除了可以进行定量分析，交叉免疫电泳相对于简 单免疫电泳仍有很多的优势：它提供了更好的解 决方案，并且可以明显的快速进行。第一向分离 抗原的电泳大约需要3小时，而接下来的扩散需要 30-90分钟就可以了。
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7.1.4.3火箭免疫电泳
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在抗体浓度恒定的胶中沉淀线的最大的迁移距离 和抗原浓度的关系是线性的。由已知浓度的标准 抗原溶液可以得到标准曲线，沉淀线的迁移距离 和凝胶中抗血清的浓度是成反比的。因此降低胶 中抗血清的浓度可以增加该方法的敏感性。
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7.2当今的免疫沉淀
免疫沉淀现在更多的被用作一种分析方法。利用 该技术，细胞大家族里面的某些特定抗原能够被 检测出来。
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7.1.4.1简单免疫电泳
简单免疫电泳只追求单纯的定性分析。它 尤其适用于在复杂样品中同时检测多种抗 原。对抗原的分离是基于其电荷的差异， 因此该技术提供了更好的解决方法。因为 抗原在免疫电泳的过程中扩散占用了较大 的空间，所以它的灵敏性不是太高。
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利用胶中连续的抗体浓度，峰的最大高度是和提 供的抗原的浓度呈比例的。根据已知浓度的各种 标准抗原，交叉免疫电泳可以定性和定量的分析 抗原。
7.1.5其局限性及其重要性
经典的免疫沉淀的方法已经从实验室里逐渐的消 失了。简单免疫电泳基本被Western Blot方法所 替代，定量分析方法比如放射免疫扩散、火箭免 疫电泳越来越多的被更灵敏的方法如ELISA、RIA 所代替了。主要原因除了其灵敏性低，还有一个 原因就是其反应时间较长。
如果实验对敏感性没有特殊的要求，并且如果不 是要检测半抗原，可以考虑这些经典免疫沉淀方 法。它们操作简单，并且不会造成大量的物质消 耗，不需要昂贵的ELISA等仪器。
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和琼脂平板法相似，简单免疫电泳的各种 沉淀线也代表着抗原的同一性、部分同一 性和非同一性。如果电泳分离的两抗原其 沉淀线距离很远相互没有接触，那电泳的 时间就要减少一下了。
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免疫电泳的各种方法是电泳和免疫沉淀的结合应 用。通过这种技术，可以对复杂样品如血清、细 菌裂解液中的抗原进行定量和定性的分析。浓度 为1-2%的琼脂糖凝胶可以作为电泳和沉淀的基质。 例如pH值范围在6-9的硼酸盐溶液可以用作反应 的缓冲液体系。必须要注意缓冲液的离子浓度不 能太高，另外，电泳对温度的变化也是很敏感的。 同时我们也要避免凝胶的融化以及蛋白的变性， 因为这有可能会使其失去抗原性。
如果要验证一个已知抗原的话，可以将样 品和参考标准抗原平行加样进行电泳。然 后将抗血清加入到两者之间的加样槽中进 行免疫扩散即可。
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7.1.4.2交叉免疫电泳
交叉免疫电泳是简单免疫电泳的一种提高。 相似的，样品中的抗原依据电荷不同经电 泳后被分离，然后使已经分开的抗原成分 与原电泳方向呈90°角的方向在含有抗体 的琼脂糖凝胶中进行二向电泳。抗原和抗 体根据各自所带电荷的不同在胶中进行迁 移。
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将抗原溶液加入到加样槽中，在电流作用 下电泳分离过程就开始了。根据分子所带 净电荷的不同，分子量大小的差异，在琼 脂糖凝胶中进行电泳时分子的迁移速率和 方向也不同，这样电泳就会将不同抗原分 子在琼脂糖凝胶中分离成若干区带。然后 与电泳方向平行挖一小槽，加入抗血清 （含抗体），通过免疫扩散，抗体与已经 分离的抗原在琼脂糖凝胶中双向扩散，二 者特异性结合在比例合适处形成弧形沉淀 线。
在这个过程中，我们在1-2%的琼脂糖凝胶中（厚 约1.5mm）打上几个大约3-8mm长的小洞，待测 样品和稀释不同程度的标准抗原被加入这样的小 洞以建立标准曲线。和交叉免疫电泳的第二步类 似，抗原在含有抗体的胶中进行电泳，很快火箭 样的沉淀线形成并向着电极的方向移动直到稳定 下来。
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由于大多数抗体的等电点大约为中性pH值 范围，因此利用中性缓冲液体系进行电泳 时，抗体分子不动或者移动很小。因为抗 原在胶中的迁移是根据其带的净电荷，所 以它们的等电点必须与缓冲液体系的pH值 有较大的差异。如果这些条件都满足了， 如带负电的抗原其Байду номын сангаас抗体结合的沉淀线便 会在适当的区域产生并快速向正极移动 （形成逐渐向正极移动的沉淀峰）。除非 再也没有抗原可以进行扩散，这时沉淀峰 的移动才会停止。
只有在抗原和抗体具有不同的等电点并且伴随不 同的迁移速率，火箭电泳才能进行。如果不满足 这个条件，可以由氨甲酰化抗原来降低其等电点， 方法是这样的：
一体积抗原溶液和一体积KCNO(2mM)在45℃孵 育30min。待冷却以后，该混合液用电泳缓冲液 调整到要求的浓度，然后加入到胶中即可。
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除了可以进行定量分析，交叉免疫电泳相对于简 单免疫电泳仍有很多的优势：它提供了更好的解 决方案，并且可以明显的快速进行。第一向分离 抗原的电泳大约需要3小时，而接下来的扩散需要 30-90分钟就可以了。
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7.1.4.3火箭免疫电泳
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在抗体浓度恒定的胶中沉淀线的最大的迁移距离 和抗原浓度的关系是线性的。由已知浓度的标准 抗原溶液可以得到标准曲线，沉淀线的迁移距离 和凝胶中抗血清的浓度是成反比的。因此降低胶 中抗血清的浓度可以增加该方法的敏感性。
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7.2当今的免疫沉淀
免疫沉淀现在更多的被用作一种分析方法。利用 该技术，细胞大家族里面的某些特定抗原能够被 检测出来。
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7.1.4.1简单免疫电泳
简单免疫电泳只追求单纯的定性分析。它 尤其适用于在复杂样品中同时检测多种抗 原。对抗原的分离是基于其电荷的差异， 因此该技术提供了更好的解决方法。因为 抗原在免疫电泳的过程中扩散占用了较大 的空间，所以它的灵敏性不是太高。
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利用胶中连续的抗体浓度，峰的最大高度是和提 供的抗原的浓度呈比例的。根据已知浓度的各种 标准抗原，交叉免疫电泳可以定性和定量的分析 抗原。
7.1.5其局限性及其重要性
经典的免疫沉淀的方法已经从实验室里逐渐的消 失了。简单免疫电泳基本被Western Blot方法所 替代，定量分析方法比如放射免疫扩散、火箭免 疫电泳越来越多的被更灵敏的方法如ELISA、RIA 所代替了。主要原因除了其灵敏性低，还有一个 原因就是其反应时间较长。
如果实验对敏感性没有特殊的要求，并且如果不 是要检测半抗原，可以考虑这些经典免疫沉淀方 法。它们操作简单，并且不会造成大量的物质消 耗，不需要昂贵的ELISA等仪器。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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和琼脂平板法相似，简单免疫电泳的各种 沉淀线也代表着抗原的同一性、部分同一 性和非同一性。如果电泳分离的两抗原其 沉淀线距离很远相互没有接触，那电泳的 时间就要减少一下了。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
免疫电泳的各种方法是电泳和免疫沉淀的结合应 用。通过这种技术，可以对复杂样品如血清、细 菌裂解液中的抗原进行定量和定性的分析。浓度 为1-2%的琼脂糖凝胶可以作为电泳和沉淀的基质。 例如pH值范围在6-9的硼酸盐溶液可以用作反应 的缓冲液体系。必须要注意缓冲液的离子浓度不 能太高，另外，电泳对温度的变化也是很敏感的。 同时我们也要避免凝胶的融化以及蛋白的变性， 因为这有可能会使其失去抗原性。
如果要验证一个已知抗原的话，可以将样 品和参考标准抗原平行加样进行电泳。然 后将抗血清加入到两者之间的加样槽中进 行免疫扩散即可。
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7.1.4.2交叉免疫电泳
交叉免疫电泳是简单免疫电泳的一种提高。 相似的，样品中的抗原依据电荷不同经电 泳后被分离，然后使已经分开的抗原成分 与原电泳方向呈90°角的方向在含有抗体 的琼脂糖凝胶中进行二向电泳。抗原和抗 体根据各自所带电荷的不同在胶中进行迁 移。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
将抗原溶液加入到加样槽中，在电流作用 下电泳分离过程就开始了。根据分子所带 净电荷的不同，分子量大小的差异，在琼 脂糖凝胶中进行电泳时分子的迁移速率和 方向也不同，这样电泳就会将不同抗原分 子在琼脂糖凝胶中分离成若干区带。然后 与电泳方向平行挖一小槽，加入抗血清 （含抗体），通过免疫扩散，抗体与已经 分离的抗原在琼脂糖凝胶中双向扩散，二 者特异性结合在比例合适处形成弧形沉淀 线。