食用菌组织分离制种及培养

食用菌组织分离制种及培养

杨海营
（生科院生物技术一班 山农大 000001）
摘要：本文介绍了食用菌组织分离法制作母种的一些关键问题及一些容易忽视的细节问题，母种的扩接技术，以及食用菌的培养方法。
关键词：食用菌，制种，接种，出菇

实验室内菌种资源有限，如果都在市场上买菌种，价格高，耗费资金。我们自己在实验室制作新菌种，既能节省开支，又能掌握制作技术，可为以后你的菌种扩充提供技术依据。一下是制作母种的具体问题总结。

1 制种用具的选用
1.1 培养容器
在制作母种中，一般采用试管作为培养容器，常用规格有15x150mm,18x180mm,20x200mm等。一般采用18x180试管。试管太小，培养空间小，且操作不方便；太大气生菌丝太多，延长培养时间，浪费了培养基，且菌丝差异更大。
1.2 接种工具
1.2.1接种铲
全长要求比所选试管稍长，一般为23cm左右。铲面要求薄，使其在灼烧灭菌后能迅速冷却。边缘要求较为锋利，在扩展母钟=种时易于切割母种。
1.2.2 接种刀
要求刀刃锋利，刀尖亦尖峰，这样在切取组织时更易更快。
1.2.3 接种耙
此工具在母种扩接以及原种制作时使用，全长要求同接种铲。耙部宜薄，曲折部位不宜太长或太短，太长不便于伸入管内操作，太短在钩切时未折部分易烫伤乃至烫伤菌种。
1.3 接种箱
由于其结构简单，易于制作，且造价低廉，移动方便，易于消毒灭菌，操作者在箱外，操作方便，故是制作母种的首选设备。实验室的超净工作台就可以当做接种箱。
1.3.1 箱内光源
若配置白纸灯泡，在操作过程中，其将不断发热，使箱体内空气升温，当升达35度以上时，将使接入的组织，特别是扩接时的菌种的生活力下降，造成接后菌丝就不萌发，延长母种培养时间，影响生产安排。
1.3.2 接种箱的灭菌
在放入经灭菌的培养基，接种工具后即可灭菌。采用紫外灯灭菌，一是射线穿透性弱，灭菌果差,二是紫外线对人体造成危害。灭菌时不易站在灭菌箱对面。


2 培养基的选择及灭菌
2.1培养基的选用
在选用培养基时，宜选用天然培养基，因其原料廉价，配置方便。常用的光谱性培养基配方有PDA、PSA、玉米汁培养基等。但值得注意的是，有些菌类对葡萄糖吸收较好，而对蔗糖却不能很好的吸收利用，有些却相反。同样其他养分的吸收也因菌类而异。在此用的是PDA，但在原来的基础上1000ml培养基要加磷酸二氢钾3g、硫酸镁2g。
2.2 培养基的灭菌
2.2.1 高压湿热灭菌
在高压灭菌过程中，排冷空气极为重要，否则会造成压力上去了，而温度上不去。另外，在灭菌结

束时，开锅放气过急，压力下降过快
，将导致培养基冲湿棉塞，而导致培养基作废。
在培养基中，部分未凝固的水，将使接入的组织受浸而无法长出菌丝。为了避免出现水珠，灭菌后取出试管时，先直立2分钟，待水汽冷凝回流后，再放置斜面。若由于多种原因还是出现水珠，可在接种前，在酒精灯火焰边迅速倒掉。
灭菌时间一般在25分钟左右，时间过长易导致培养基内部分营养分解变质，颜色变黄，影响培养效果。

3 种菇与组织的选择
3.1 种菇的选择
种菇要求新鲜、优质、无病虫污染。伞菇类，如香菇、平菇、蘑菇、金针菇等等，选取菇蕾刚长出不久，边缘尚内卷，菇柄短小，菇盖肥厚者。草菇应选取菌蛋作种菇。
3.2 组织位置的选取
切取位置，对于母种的萌发生长极为重要，如果切取位置不当，即使分离接入培养基未被杂菌感染，仍将久不发菌丝，以致制种失败。切取位置对伞菇类应切取菌盖与菌柄交接处菌柄上的组织，组织切取时不宜过小，否则易被培养基表面极少量的水浸住而不长菌丝，过大则费种菇，且由于表面积过大，易感染杂菌。

4 分离接种与母种扩接
4.1分离接种
用接种铲挑取组织块，放入试管口棉塞以下部位，迅速盖好棉塞，缓缓竖起试管让组织块沿着试管壁滑至管底，接种后的试管应竖直放置，即使组织感染有杂菌，也不会污染整个培养及表面。
4.2 母种的扩接
在整个过程中，除了保持无菌操作外，还必需保证接入的菌种有生活力。为此，在使用火焰灭菌后的接种铲时，伸入菌种试管后，应先接触无菌体的部分，待其冷却，再铲取菌种，以免烫死菌种。试管应平放，防止杂菌进入试管，而造成污染。
5 培养出菇
5.1棉籽壳培养基的制作
材料及用量：棉籽壳1500g，麦麸150g，葡萄糖15g，石灰15g，石膏15g，水。
步骤：称取定量棉籽壳、麦麸放入盆中，把称量好的葡萄糖、石灰、石膏、在水中溶解，倒入盆中。加适量的水，用手抓时，有湿的感觉，但不滴水。调节PH值，在8到9范围之间。装袋，灭菌2小时。
5.2 接种
在超净工作台中，灭菌后，在酒精灯附近，将扩充的母种分成几块，接于棉籽壳培养基上，系上口。标明标号、日期、接种人。
5.3 培养发菌
在较黑暗的环境中，以眼刚好看到上面的字为宜，进行发菌培养。
5.3 出菇
在菌丝长满棉籽壳培养基时，进行出菇管理，在湿度为65%左右的环境中，温度因菇类不同而异。进行每天观察，记录，保持湿度。另外要控制温差，无温差，子实体不生长。

参考文献：
（1）张腹安，王付涛，食用菌制种指南[M].上海

科学技术出版社，1992年11月，90~108
（2）郭炳然，郭荣华，易艳君，食用菌制种
与栽培学[M].山东大学出版社，1999年3月，30~35，43~60
（3）潘冲环，新编食用菌生产技术图解[M].北京：中国农业出版社，1999年7月，21~22