食用菌组织分离制种及培养
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项食用菌菌种分离的方法和操作步骤菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，从而获得纯食用菌菌丝的过程。
菌种分离是一项重要而又细致的工作，每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。
食用菌的分离方法很多，常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。
1.组织分离法组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。
其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发快。
二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。
但对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。
1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优良品种。
切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌盖与菌柄两次，进行表面消毒。
接种时，只要将种菇撕开，用消毒后的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块放入PDA培养基的试管斜面中间。
置于24℃温度下培养3-5天就可以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。
如香菇、平菇等可以使用此方法。
1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采集。
而常见的是它储藏营养的菌核。
用菌核分离，同样可以获得菌种。
方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝后进行分离纯化。
应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分离出菌种。
1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。
方法是选新鲜的活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。
母种分离技术
1.肉眼观察：优良菌种菌丝浓白，绒状，粗壮密集，生长整齐，速度快，香味浓厚。
2.优良菌种标准可归纳为："纯、香、正、壮、润"五个字。检查时，打开瓶塞，从菌种瓶中部取出小块菌丝体，观察色泽，闻其气味，手捏料块检查其含水量，看是否符合上述要求标准。
3.显微镜检查：挑取少量菌丝，置显微镜上观察其形态，菌丝分枝，分隔情况，锁状联合，细胞膜的厚薄。 培养观察：从菌种瓶中挑取小块菌丝体，接种斜面试管培养基上，置23℃～25℃恒温中培养，经五周后检查菌种生活力。如果菌丝生长快，旺盛纯一，健壮浓厚，长且整齐，则表示菌种的生活力强。
如果生产量较大，在三角瓶的基础上，再逐级扩大种子缸，发酵罐中进行液体深层通气发酵，产生大量菌种。但由于生产中要求设备繁多，技术性强，我们还应创造条件；实现食用菌栽培的现代化。
（四）菌种质量的鉴定
菌种质量鉴定最好的方法是，做出菇试验。但是时间比较长。在购置菌种时，或在菌种生产中，如何能知菌丝生长情况，快速判断菌种质量？我们介绍几种方法：
孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种定植一星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大，一般到栽培种，转管不宜超过5次。
孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。
食用菌母种分离选育食用菌选育
食用菌母种分离选育食用菌选育食用菌母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。
作为一般制种专业户，可以采用人工选择方式分离培育母种，具体步骤与操作方法如下。
1、采集种源从******成人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源。
种菇的标准是：八成熟，朵形圆正、肉质肥厚，无病虫害。
采集1—2朵符合上述标准的种菇编上号码，作为分离母种的材料。
从栽培室采集的应标有原菌株代号。
2、培养基配制琼脂培养基又叫PDA培养基，常用配方为：马铃薯200—250克，琼脂15—20克，葡萄糖20—25克，清水1000毫升。
也可以加硫酸镁1—1.5克，维生素B1微量，磷酸二氢钾2—3克。
先将马铃薯洗净去皮，切成薄片，置于铝锅内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱布过滤，取汁。
然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让琼脂充分溶化；再将葡萄糖等加入，稍煮几分钟后，同样用4层纱布过滤，取其汁液，将汁液趁热装入玻璃试管内。
装至管长的1／5，管口用棉花塞紧，或将汁液装入玻璃三角瓶内，装量20毫升。
然后置于高压锅内，在98—108千帕／厘米的压力下灭菌30分钟左右。
灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌上，冷却后即成为固体斜面培养基。
3、母种分离方法有孢子弹射、组织分离和基内分离3种方法。
①孢子弹射法。
将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼脂培养基的三角瓶内，让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝。
也可以剪取一小决菇体，贴附在试管斜面培养基表面，让孢子散落在培养基上萌发菌丝，即能获得母种；②组织分离法。
将消毒过的种菇，在接种箱内用手从菇柄处对半解开，或用刀片切开，使菇体形成对开。
在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，用接种刀切取一小块菇体，然后纵切成5×10毫米的小薄片，用接种针挑取一块薄片，接入斜面培养基的中央，每支试管接种一小块薄片，待其萌发菌丝，即可得到母种；③基内分离法。
选择已长菇的木段，削去树皮及表层木质部，用70％的***精消毒后，锯成1厘米厚的薄片，放入0.1％的升汞水中消毒1—2分钟，再用灭菌水洗去残液。
食用菌母种分离
一、实验目标：
1、掌握组织分离法制备母种的方法。 2、掌握组织分离接种技术。 3、会使用超净工作台和培养箱。
二、实验原理：
组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯培 养菌丝的方法。
是一种无性繁殖，双亲的染色体没有经过重组， 因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特 性。
三、仪器设备与材料
接种孢子
用接种环 蘸孢子液或孢子粉
涂布于平板上
七、菌种质量的鉴定
鉴定 项目
形态特征、生理特性、 栽培性状、经济效益等
一般从菌种的纯度、长势、颜色、菌龄、 、
均匀度和出菇快慢等6个方面进行鉴定。
好母种
退化母种
出菇试验
栽培
出菇快 产量高 品质好 抗逆性强
菌种种类 品种名称 菌种级别 代 时 生产厂家 接种日期
10、贴标签
写明菌种名称，接种日期，姓名，学号，专业， 随后放入培养箱中，置适宜温度下培养，待 组织块长出菌丝无污染即为纯种。
培养3~5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状 菌丝，转管扩大即得到菌种。
十、结果
1、记录你制作的母种的生长状态； 2、是否有杂菌污染，如有分析其原因。
械及种菇表面消毒；
（3）0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；
4、菌种培养没备
（1）培养箱 培养少量菌种的恒温电器（20~40℃）
（2）培养室
六、菌种分离的方法
菌种分离：将有价值的子实体的局部组织、孢 子或基内菌丝移接到斜面试管培养基上，获得 纯培养菌丝的操作称为菌种分离。
必 备
1、组织分离：采用食用菌子实体或菌核、菌索 的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。
无
0.25%新洁尔灭浸2~3min 无菌纱布吸干表面水分
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法 -回复
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法-回复食用菌孢子分离和组织分离是研究食用菌的重要步骤。
通过这些方法，可以获得纯净的种子菌株，进一步进行研究和培育工作。
本文将详细介绍食用菌孢子分离和组织分离的方法。
食用菌孢子分离是从食用菌的子实体中提取和分离菌种的方法。
通常情况下，孢子是种子菌株的一种形态，具有较高的萌发率和遗传稳定性。
食用菌孢子分离的步骤如下：1. 孢子的收集：首先，需要选择新鲜的子实体作为材料。
将子实体放置在无菌条件下，避免受到外界的污染。
将子实体切成小块或研磨成粉末，然后加入适量的生理盐水、无菌蒸馏水或无菌缓冲液，将其悬浮起来。
2. 孢子的分离：将悬浮的子实体材料经过一系列稀释和分离操作，使得菌种的纯度逐渐提高。
常用的分离方法包括层析法、平板法和过滤法等。
- 层析法：根据菌种在特定环境中的生长特点，选取适当的培养基和培养条件，通过层析柱或滤纸片等材料将菌种分离出来。
层析法的优点是可以得到单独的孢子，分离纯度较高，缺点是操作过程相对复杂。
- 平板法：将悬浮的子实体材料均匀涂布在含有丰富养分的琼脂平板上，在适当的培养条件下培养。
随着细菌的生长，不同菌种会形成特殊的菌落形态，通过观察和筛选，得到纯净的菌种。
平板法简单易行，操作方便，但分离纯度可能较低。
- 过滤法：将悬浮的子实体材料过滤，使得孢子被隔离出来。
常用的过滤装置包括无菌纱布、无菌滤纸和无菌膜等。
过滤法分离快速方便，但分离纯度较低。
3. 孢子的培养：将分离得到的孢子接种到含有适当营养物质的培养基上，进行孢子的萌发和生长。
培养的环境因菌种而异，一般需要调节温度、湿度、光照等条件以促进其发育。
在培养的过程中，可以观察孢子的萌发率和生长状况，进一步筛选和培养纯净的种子菌株。
食用菌组织分离是从食用菌的组织中提取和分离菌种的方法。
与孢子分离相比，组织分离更加复杂，但可以得到更多更丰富的菌株资源。
食用菌组织分离的步骤如下：1. 组织的收集：选择新鲜的食用菌子实体作为材料，一般选择子实体颜色均匀、外观完整、没有腐败和感染的部分作为组织收集的对象。
食用菌栽培实验报告
食用菌栽培实验报告一、实验目的1.学习和掌握食用菌的组织分离法制作食用菌母种；2.掌握食用菌培养基的配置原理；3.通过平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
二、实验原理（一）食用菌母种的制作食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
（二）平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验1.食用菌的营养物质食用菌在生活时需要多种多样的营养物质，除水和氧气外，还要碳、氮、钾、磷、硫、镁、铁等大量元素和一些微量元素。
各种食用菌对营养物质的要求各不相同，有的要求不严格，有的要求严格。
[1]碳源：能利用自单糖到纤维素等各种复杂的碳水化合物，如：纤维素、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、糊精、淀粉、半纤维素、木质素、有机酸、某些醇类等。
[2]氮素：是食用菌合成蛋白质和核酸必不可少的主要原料。
主要有蛋白质、氨基酸、尿素、氨、铵盐和硝酸盐等。
蛋白质必须经蛋白酶分解成氨基酸后才能被吸收；其他小分子氮素化合物菌丝体可直接吸收。
[3]碳氮比:一般认为食用菌在营养生长阶段碳氮比（C/N）以20 : 1为好，而在生殖生长阶段碳氮比以30 : 1～40 : 1为好。
[4]无机盐类，如：磷酸二氢钾、硫酸钙、硫酸镁、氯化钠、硫酸锌、氯化锰等。
这些无机盐中的金属元素磷、钾、镁为最重要，适宜浓度是每升培养基加100—500毫克，而铁、钴、锰、锌、钼等微量元素，每升培养基只需1／4毫克。
这些金属元素在普通水（河水、自来水）中都有，一般培养料不再添加。
[5]各种维生素和生长素，量很微，但必不可少。
[6]栽培原料:广泛采用棉籽壳。
棉籽壳含粗蛋白73％，粗脂肪3.45％，粗纤维36.99％，无氮浸出物73.99%。
其物理性能良好，能使水分和空气的矛盾得到解决，以满足菌丝生长的要求，棉籽壳的表面密布的一层棉纤维，在合适的水分、空气和温度的条件下首先分解，加之壳内残存的棉籽碎屑，也易分解利用；经过试验，1斤干棉籽壳能产1斤左右的鲜平菇，最高达4斤左右。
食用菌的制种(母种的分离和培养)
食用菌的制种（母种的分离和培养）()---食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。
因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要的工艺。
食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。
从食用菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。
从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。
从原种扩大培养直接用于生产上播种的菌丝体；称为栽培种。
一、母种的分离和培养（一）母种培养基的配制1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。
因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基干麦芽 250克琼脂 15～20克葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基胡萝卜 100克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基蛋白胨 2克葡萄糖 20克磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克硫酸镁 0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法兹以最常用的马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块，加水1000毫升，煮沸15～20 分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。
趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。
菌种的分离与培养
菌种的分离与培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。
所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。
菌种分母种、原种、栽培种。
(一）母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。
形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。
待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。
方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。
并在纱布上倒少许升汞或无菌水。
移入20℃左右恒温箱培养。
②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。
食用菌母种的分离
孢子收集器示意图
3、母种转管接种与培养。
母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。 否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。 然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒 灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操 作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。 拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内， 挑小块菌种放入斜面培养基中（见下图）
3.工艺流程：
称量→煮制→分装→灭菌 → 排斜面→无菌检验
培养基的分装及排斜面示意图
（二）、母种的接种与培养
1．组织分离法制母种（无性繁殖） 将子实体、菌核、菌索等一小块组织放
于斜面培养基上，使其萌发为纯菌丝的方法， 称为组织分离。该法具有简便、易成功、能 保持原菌种性状等优点，但重复多，易退化， 应与孢子分离交替进行。组织分离法适用于 绝大多数食用菌
② 棉子壳培养基：棉子壳99.5%，石膏 0.3%，水适量。适用于培养平菇、猴头、金 针菇、鸡腿菇。
3.培养料的配制 ⑴ 木屑、棉籽壳培养料的拌料配制
木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制 混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水 中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60﹪ 左右 。
⑵ 谷粒培养料的配制
菌柄与菌盖交界处取组织块
用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒 的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的 0.3~0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上，置 24℃恒温箱中培养。
检查选
每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上 长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝 转移新的试管斜面。若在组织块附近或其他地方出现其他颜 色杂菌生长应予以淘汰。
谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌 丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高 等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸 泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。
食用菌组织分离技术实验
实验四食用菌组织分离技术一、实验目的通过实验，熟悉食用菌组织分离原理，掌握通过组织分离技术获得食用菌纯菌种的方法。
二、实验原理组织分离法是指切取食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织接种到培养基上培养成纯菌丝体的方法。
组织分离是一种无性繁殖技术。
食用菌子实体或菌核等由双核菌丝体组成，在无菌条件下切取消毒后的组织小块，接种到制备好的斜面培养基上进行适温培养就可以获得纯菌丝体菌种。
三、方法步骤（一）种菇选择选择外观典型、中等大小、菌肉肥厚、无病虫害、七八分成熟（未开伞）的菇作种菇。
（二）种菇消毒切取菇体基部，放入已消毒灭菌好的超净工作台上。
用75%的酒精棉球对菇体进行表面消毒后再用无菌水冲洗2～3次，然后用无菌纱布或滤纸吸干菇体表面水分。
（三）组织块接种用灭菌后的解剖刀或手将消毒后的菇从中间切开或掰开为两半，用无菌镊子夹取菇柄与菇盖交接处绿豆大小的菌肉组织一块，接在斜面培养基的中央。
（四）菌种培养将接种后的斜面培养基放在25℃下培养，经过7～15天，菌丝即可长满斜面。
培养期间要经常检查，及时捡出感染试管。
以下事情找陈老师商量一下：1.本实验用双孢蘑菇或香菇做分离材料，因为目前平菇菇质较差，不适于进行组织分离，让他购买未开伞的双孢蘑菇或香菇。
菇要提前晾两天，以减少水分影响。
2.需要使用两个实验室的超精工作台同时进行实验。
3.给陈老师讲一下每个同学至少接种两只试管，预防感染。
4.75％酒精棉球、无菌水、解刨刀、镊子等工具要准备好。
5.最好做个预备实验，讲解时可以给学生做示范。
6.讲解时把超精工作台的紫外线灯打开，以节约时间。
香菇组织分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握香菇组织分离的基本原理和操作技术。
2. 通过实验，分离出香菇的纯菌种，为后续的香菇育种和栽培研究提供菌种资源。
二、实验原理香菇（Lentinula edodes）是一种珍贵的食用菌，其子实体含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等营养成分。
香菇组织分离是指利用香菇子实体的菌肉组织作为接种物进行培养，从而获得纯菌种的方法。
该实验方法简单、快速、安全，是香菇菌种分离的重要手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜香菇子实体- PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）- 无菌水- 灭菌锅- 灭菌器械- 玻璃器皿- 显微镜2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌器- 电子天平- 灭菌柜- 培养箱四、实验步骤1. 香菇子实体表面消毒：将新鲜香菇子实体用无菌水冲洗干净，用75%酒精棉球擦拭表面，再用无菌水冲洗。
2. 香菇组织分离：- 取一小块香菇菌肉组织，用无菌手术刀切下。
- 将切下的菌肉组织置于无菌培养皿中。
- 在无菌条件下，用接种针挑取一小块菌肉组织，接种于PDA培养基平板上。
- 将接种后的平板放入培养箱中，于适宜温度下培养。
3. 观察与记录：- 每日观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色、大小等特征。
- 当菌落长至适宜大小后，挑取单菌落进行纯化培养。
4. 菌种纯化：- 将单菌落接种于新的PDA培养基平板上。
- 再次放入培养箱中培养。
- 观察菌落生长情况，确保菌种纯度。
5. 菌种保存：- 将纯化后的香菇菌种接种于斜面培养基上。
- 放入4℃冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 香菇组织分离成功，获得了纯菌种。
2. 菌落特征：菌落呈白色，表面光滑，边缘整齐，质地致密。
3. 菌种纯度较高，未发现杂菌污染。
六、实验结论1. 香菇组织分离是一种简单、快速、安全的菌种分离方法，适用于香菇菌种分离。
2. 通过实验，成功分离出香菇纯菌种，为后续的香菇育种和栽培研究提供了菌种资源。
七、实验讨论1. 实验过程中，注意无菌操作，避免杂菌污染。
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法
食用菌是指可以食用并具有药用价值的真菌类食物，如蘑菇、姬松茸等。
而食用菌的孢子分离和组织分离则是对食用菌进行研究和培育的重要步骤。
在食用菌的育种工作中，为了培育出更好的品种，更高产的果实，需要对食用菌的孢子和组织进行分离，以便于选育和培育工作的进行。
下面将从孢子分离和组织分离两个方面进行详细介绍。
一、食用菌孢子的分离方法食用菌的孢子是食用菌繁殖的重要途径，通过对孢子的分离研究可以得到更多的信息，为食用菌的培育提供更多的可能性。
食用菌孢子的分离方法主要有以下几种：（一）取材准备：首先需要选取新鲜的食用菌菌丝体，将其移植到含有蔗糖和琼脂的琼脂培养基上进行培养，使其长出菌丝。
（二）孢子成熟：待菌丝长成成熟后，可以使用电镜或显微镜观察孢子的成熟情况，判断孢子是否已经成熟，如果孢子已经成熟，则可以进行下一步的提取和分离工作。
（三）孢子提取：将成熟的孢子用生理盐水进行冲洗，得到高纯度的孢子悬浮液。
（四）孢子分离：通过对孢子进行稀释和悬浮，可以使孢子在琼脂培养基上形成分立的克隆菌落，方便后续的研究工作。
二、食用菌组织的分离方法食用菌的组织分离是为了研究食用菌的生长发育规律，以及进行病原菌的筛查和检测等工作。
食用菌组织的分离方法主要有以下几种：（一）细胞分离：通过组织分离酶的作用，可以将食用菌组织细胞从整个菌体中分离出来，得到高纯度的细胞悬浮液。
（二）组织培养：将分离出的食用菌组织细胞进行培养，可以观察到组织的生长和分化情况，并进行相关的研究工作。
（三）组织切片：将食用菌组织进行切片处理，通过显微镜观察组织的结构和形态，为后续的研究提供可靠的数据基础。
（四）组织冻存：将分离出的食用菌组织进行冷冻保存，以备后续的实验和研究。
通过以上对食用菌孢子分离和组织分离的方法进行详细介绍，可以看出，食用菌孢子分离和组织分离是食用菌育种和研究工作中重要的前期准备工作。
通过不断改进和优化这些分离方法，可以为食用菌的培育和研究工作提供更多的可能性和便利。
食用菌组织分离法实验报告
食用菌组织分离法实验报告食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。
2. 培养基：PDA培养基斜面。
3. 仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。
三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2. 要等刀片冷却后再切取组织块。
六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的PDA培养杂菌没有菌落产生基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。
第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌无杂菌，也无目的菌落实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。
接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。
实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。
平菇的组织分离及培养
平菇的组织分离和培养一、实验目的1、了解食用菌的基础知识。
2、了解、掌握食用菌培养基的配置原理。
3、通过平菇栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法。
二、实验原理（食用菌的组织分离法）食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
三、实验材料1、原种制作实验材料（1）食用菌：平菇。
（2）培养基：PDA培养基斜面。
（3）仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。
2、食用菌的组织离2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3（2）仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、姬菇菌种、茶树菌种、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋、颈圈、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH 5.5—9.0）、记号笔、麻绳等四、实验步骤平菇组织分离的方法和步骤一、种菇选择：一般选择在适宜出菇期出菇早、出菇整齐、特征典型、无病虫害、产量高的栽培袋，从中选择菌肉肥厚、大小适中、颜色正常、尚未散孢、长至七八分成熟的优质菇作种菇二、种菇消毒：用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表面的水分。
三、切块接种：将分离种菇沿菌柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菌盖和菌柄交界处划成田字形，取黄豆粒大一小块菌肉组织，接在PDA培养基上。
四、培养纯化：温度控制在22℃~25℃之间，培养1~2天，长出白色绒毛状菌丝体，4~5天通过筛选，挑出菌丝洁白、清晰、生长整齐、健壮的试管母种继续培养，将有杂菌、长势纤弱的淘汰。
7~10天菌丝长满斜面。
五、注意事项1、在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2、要等刀片冷却后再切取组织块。
3、栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时检查出处理掉。
经过30—40天的培养，菌丝长满袋后即可使用。
若菌袋内长出原基，说明菌种已经老化。
若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已经污染，不可使用。
食用菌组织分离与孢子分离制种有何区别,食用菌组织分离法的优缺点
食用菌组织分离与孢子分离制种有何区别，食用菌组织分离法的优缺点一、食用菌组织分离与孢子分离制种有何区别1、区别食用菌组织分离制种属于无性繁殖，而孢子分离制种属于有性繁殖。
2、组织分离（1）选择肉厚肥大，鲜嫩，出菇早，菌柄较短的食用菌作为种菇。
（2）将种菇清洗干净，然后放在接种箱内进行消毒。
具体操作：用镊子夹住种菇放至于培养皿内，然后使用另一把镊子夹住75%酒精棉球或者是0.1%升汞棉球，进行消毒，接着转移至另一培养皿内用无菌水清洗3次。
（3）使用解剖刀蘸取适量酒精，进行火焰消毒，待刀冷却后将种菇切开，在菌盖与菌柄的交界处，切取0.3-0.5cm的菌肉组织块，转移至斜面培养基上，置于24°C的恒温箱中进行培养。
（4）检查生长情况，如果分离出来的菌肉组织块上长出了正常的白色菌丝，说明分离成功。
3、孢子分离（多孢分离）（1）选择朵形圆正，长势较好，没有病虫害，出菇均匀，8-9分熟的种菇。
（2）切掉种菇的大部分，使用无菌水冲洗菌柄处，然后使用脱脂棉将表面水分擦干。
（3）使用铁丝将种菇的菌褶朝下，挂在玻璃漏斗下面。
漏斗倒盖在培养皿上，上端部分使用棉花将小孔堵住。
（4）将培养皿放在搪瓷盘上（盘内铺设纱布），静置12-20小时后，孢子散落在培养皿上，形成孢子印。
（5）使用接种针沾取孢子在试管中的琼脂上进行接种。
等到孢子萌发，生成菌落时，选择萌发时间早，长势好的菌落进行培养。
二、食用菌组织分离法的优缺点1、优点（1）食用菌组织分离相较于孢子分离操作更为简单，成功率更高，后代不容易产生变异，能够较好的保持菌种的优良性质，防止菌种品性退化。
（2）组织分离法的适应性较广，能够用于绝大多数食用菌制种。
2、缺点（1）在多次重复操作过后，容易发生退化。
（2）组织分离制种很难制出比母体更加优秀的品种。
（3）在大规模应用与生产之前，需要做品种对比试验，在确定菌种的优良特性没有变异后，才能进行繁殖。
微生物食用菌的组织培养
锁状联合及担孢子形成的简介
担子菌子实体成熟后产生担孢子，担孢子从成 熟的子实体菌褶里弹射出来
担子和担孢子形成的连续阶段 (A) 双核菌丝的顶端细胞膨大；（ B ）核配后的单核双倍体担子；（ C ）
减数分裂后含四个子核的担子，担孢子梗开始长出； (D) 担孢子梗上产生 担孢子原基， 细胞核准备移入其中； (E) 细胞核移入担孢子原基中； (F) 高度液泡的成熟担子，其上着生四个单核的担孢子。
双核菌丝体及锁状联合的观察平菇双核菌丝体及锁状联合的观察平菇载玻片中央滴一滴水用解剖针于试管斜面或培养料内挑载玻片中央滴一滴水用解剖针于试管斜面或培养料内挑取少许菌丝置于载玻片液滴中并将菌丝体挑开使之分散取少许菌丝置于载玻片液滴中并将菌丝体挑开使之分散加盖玻片后观察双核菌丝体及锁状联合的形态结构
实验十一 食用菌的组织分离及子实 体的形态结构
三、材料及用具
1.材料： 各种食用菌。 2.用具：电炉，培养箱，接种针等
四、实验步骤 （一）、食用菌的组织分离及培养
1 香菇及平菇的组织分离及培养（2皿/人；3块/皿）。先到平 板（2皿/人）
菇体表面用70%酒精消毒；用手从菌柄处对开菌盖；解剖 刀过火；从菌柄与菌盖交界处的菌肉组织取黄豆粒大小的 组织块（3块）；用接种针挑取放入平皿；25度培养；下次 实验观察结果
目的： 1 认识和掌握常见的栽培食用菌子实体的形态特征； 2 观察食用菌双核菌丝的形态及其锁状联合结构
方法： 1 识别香菇、双孢磨菇、平菇、木耳、金针菇等的形态特征 2 用解剖刀纵切香菇、双孢磨菇、平菇的子实体，观察其菇 盖组成、菌肉 的颜色、质地、菌褶形状和着生情况（离生、 延生、直生、弯生）；再观察菌柄的质地，中空或中实。 3 双核菌丝体及锁状联合的观察（平菇） 载玻片中央滴一滴水，用解剖针于试管斜面或培养料内挑 取少许菌丝置于载玻片液滴中，并将菌丝体挑开使之分散， 加盖玻片后观察双核菌丝体及锁状联合的形态结构。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。