实验一大肠杆菌培养与分离

一、基础知识: 2.关于大肠杆菌:
• 革兰氏染色：革兰氏阴性菌 • 代谢类型： 异养兼性厌氧型 • 主要分布： 肠道 • 危害： 一般无害，少数有害 • 应用：是基因工程中的主要受体菌之一
二、微生物的培养:
培养基（培养液）是由人工方法配制而成的， 专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。
•1)培养基的种类: 液体培养基：用于微生物的扩大培养
选修1需学习的实验
（微生物的利用） 实验1 大肠杆菌的培养和分离 实验2 分离以尿素为氮源的微生物
（酶的应用） 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检
测 （生物工程在食品加工中的应用） 实验8 果酒及果醋的制作实验 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 （浅尝现代生物工程） 实验11 植物的组织培养
第一部分 :微生物的利用
实验1 大肠杆菌的培养和分离
一、基础知识
1微生物 2培养基 3无菌技术
二、实验操作
1操作步骤 2微生物的接种技术
一、基础知识:
1.关于微生物: 是一切肉眼看不见或看不清楚的微
小生物的总称．
病毒
病毒界
细菌 微生物包括 放线菌
原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。
三、无菌技术
1、无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
成功地培养微生物的关键。
从制备培养基到接种与培养等全部 实验过程要无菌操作
• （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 ；
• （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器 具进行灭菌 ；
• （3）为避免周围微生物污染，实验操作应 在酒精灯火焰附近进行；
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
1-3 现代生物技术
• 一般而言，現代生物技术可以分成以下五种： • 一、细胞工程 • 二、发酵工程 • 三、蛋白质工程 • 四、酶工程 • 五、基因工程
现代生物技术与传统生物技术的本质区别是 现代生物技术中用到了基因工程。
• （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物 品相接触。
2、消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义：
是指杀灭病原微生物的方法。
（2）灭菌的定义：
是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、 孢子） 的方法。
(1)常用消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯 气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）
按物理性质分 成分区别：琼脂 固体培养基：用于微生物的分离、鉴
定、纯化
普通培养基： 按功能分 选择培养基：筛选
鉴别培养基：鉴定
伊红——美蓝培养基用 于鉴别大肠杆菌
•2)培养基的成分：它质为和微生生存物环提境供。所需要的营养物 不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另还需要满足微生 物生长对pH 、氧气、渗透压要求．
1
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他 外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
杆 菌
• ①固定细胞外形；
细
②保护细胞免受外力的损伤；
胞
壁
③阻拦大分子物质Βιβλιοθήκη 人细胞；中④使细胞具有致病性及对
含
噬菌体的敏感性。
毒
素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
3、常用的消毒与灭菌的方法 灭菌的方法： 1）干热灭菌法 ——适用于金属或玻璃用具。
利用火焰将微生物杀死，或在140~160℃的烘箱 中加热2~3小时将微生物的营养体和芽孢杀死。
2）高压蒸气灭菌法：——常用的灭菌法。 100kPa、121 ℃下维持15-30min.
思考： 哪些用具可以用高压蒸汽灭菌法来灭菌？这些用 具在灭菌前要如何处理？灭菌后还要如何处理？
• pH值
细菌喜中性偏碱，霉菌喜中性偏酸
• 氧气的含量 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件
•3）不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方：
细菌喜荤，霉菌喜素
大肠杆菌配方：酵母提取物 0.5g 蛋白胨 0.5g Nacl 0.5g ——维持一定的渗透压 琼脂 1g 水:50ml
霉菌培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖 的豆芽汁
用途：90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素 多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳 由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染， 在新能源领域将发挥巨大作用。
1）放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
2）病毒
SARS病毒、 禽流感病毒
朊病毒（蛋白质病毒）
病毒的增殖：
3）真菌
酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
4）细菌的外形与大小
细菌：单细胞不分枝的原核微生物。 细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色（革
兰氏染色）后显微镜观察
图1-1 常见的三种细菌典型形态
A.球菌
B.杆菌
C.弧菌
*细胞壁
伤
• 成分：肽聚糖
寒
• 细胞壁有哪些功能？
四、实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀
3）紫外线灭菌法
紫外线的光谱范围是100~400nm，灭菌最有效的波 长是253.7nm。 注意：紫外光对人的皮肤、眼睛等会造成伤害， 开启紫外灯后人必须离开。
4）过滤灭菌法
有些化合物加热会分解，如尿素。 通常用G6玻璃砂漏斗来过滤。 问：玻璃砂漏斗在使用前后的处理？
5）化学药剂灭菌法
如：2~5﹪漂白粉溶液、红药水、70~75﹪酒精等。