植物器官的培养课件

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植物 器官 培养
营养器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、
叶 鞘、叶片、子叶）
生殖器 官培养
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药）
种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、
子房、胚乳培养 ）
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第二节 营养器官的培养
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（二）茎尖培养方法及步骤
及材
取
消料
材
毒处
理
接
培
驯
化
种
养
移 栽
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1、 取材
①直接取材：在生长旺盛、枝 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 （1－2cm）（取前可喷杀菌 药，可顶芽或侧芽）。
②从试管苗获取。
取1-2㎝顶梢
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2、材料处理及消毒
一、离体根的培养 二、茎尖的培养 三、茎段的培养 四、离体叶的培养
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一、离体根的培养
（一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种
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（二） 培养方法
1. 培养基选择
White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基 注：离体根生长要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入B1、B6最 重要，生长素对离体根影响不一致。培养温度25－27℃， 暗光培养。
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（2）初代培养条件
每天 光照16h， 光强度1500-30001x， 温度25±2℃
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（3） 继代培养
茎尖长成的新梢→→切成小段→→增殖培养基中→→ 1 个月左右→→新梢又可切成小段→→再转入新培养基 →→建立和维持了茎尖无性系。 （即微型扦插）
继代培养可用MS培养基。
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三、茎段培养
（一）定义： 指不带芽和带一个以上定芽或不定芽（包
括块茎、球茎在内）的幼茎切段的无菌培养。
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（二）意义 ：
快速繁殖； 探讨茎细胞的生理特点 进行育种上的筛选突变体的过程
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（三）培养步骤
1.材料的选择和处理 （1） 取材：当年生嫩枝→→
2.器官培养在生产实践上具有重要的应用价值.
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如利用茎、叶和花器培养建立的试管苗，可在短期内 提高繁殖速率，进行名贵品种的快速繁殖；
利用茎尖培养可得到脱毒试管苗，解决品种的退化 问题，提高产量和质量；
将植物器官作诱变处理，用器官培养可得到突变株， 进行细胞突变育种。
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植物器官的培养
第一节 概述
一、器官培养的种类
包括离体的根、茎、叶、花器和果实的 培养。以器官作为外植体进行离体培养，是 植物组织培养中最主要的一个方面，进行的 植物种类最多，应用的范围也最广。
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二、器官培养的意义：
1. 器官培养是研究器官生长、营养代谢、生理生化、 组织分化和形态建成的最源自文库材料和方法；
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3.普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及 侧芽。 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单， 操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短 。
4.茎尖培养的意义： 普通茎尖培养技术简单，操作方便，易成活，成苗 时间短，加快繁殖。 微茎尖培养可获得脱毒苗；
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再
体
伤
化生
根
组
芽植
织
株
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二、茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型 （二）茎尖培养方法及步骤
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(一)茎尖培养概念及类型
1.茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，
进行无菌培养。茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 2.微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超 过 0.5mm。
将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长→→去叶（休眠 芽预先剥除鳞片） →→流水冲洗2-4h →→ 75％的酒 精中处理30s →→稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min(取 自老枝条上的可适当延长时间） →→用无菌水冲洗数 次，准备接种。
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3、接种
接种前再剥掉一些叶片，使茎尖0.5cm →→接种 要求：随切随接，动作迅速。 亦可将切下 茎尖材 料在1－5% VC液中浸一下。
去叶→→剪成5cm的小段→→ 自来水冲洗1-3h
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（4） 诱导生根
采用1／2MS培养基 加入一定的生长素类调节物质，如NAA、IBA等。 新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液处理4-8h， 然后转移到无激素的生根培养基中。
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(5) 驯化移栽入土
在生根培养1个月左右→→生长健壮而发达的根系→→ 炼苗→→移栽 →→管理（温、光、湿、气）
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4、培养的方法和程序
（1）培养基 ① 基本培养基 MS、White、 B5、 Heller培养基。 ② 蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。 ③ 激素（ 2，4-D，IAA， NAA ）和有机添加 物有明显影响。但激素浓度以0.1mg/L为宜， 不要太高。
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茎尖生长状态
暗光和温度25-27℃。
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根无性繁殖系的建立
接后1周
无菌种子
1.2cm
侧根
根 无 性 反复转接 繁 殖 系
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4.植株再生培养
根段的离体培养也可以用来再生植株。
第一步诱导形成愈伤组织。
第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、在愈伤组织上分化
成小植株。
离 脱分化培养基 愈 再分化培养基 分
生长太慢：茎尖不增大→→变绿→→细胞逐渐老化→→休眠 原因: 生长素浓度太低；温度过低或过高；
生长太快：茎尖迅速增大→→愈伤组织→→丧失成苗能力 原因: 生长素浓度过高；光照太弱或温度太高；
生长正常：茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色 逐渐变绿，并伸长，叶原基发育成可见的小叶， 进而形成小苗。
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2. 无性繁殖系的建立
种子消毒 →→ 接种→→待根伸长后从根尖一端切取长 1.2cm的根尖→→接种于培养基→→发育出侧根→→待侧 根生长约1周后切取侧根的根尖进行扩大培养→→又迅速 生长并长出侧根→→切下进行培养，如此反复→→得到 从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。
3. 培养条件