结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF基因突变与临床病理特征关系的研究

结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF基因突变与临床病理特

征关系的研究

贠田;王长松;李富林;吕学霞;蒙念龙;高春芳

【摘要】目的探讨在结直肠癌中KRAS、NRAS和BRAF基因突变的状态与病理学因素之间的关系.方法采用RT-PCR的方法检测389例结直肠癌患者的KRAS、NRAS和BRAF基因突变情况,并用统计学方法分析与临床病理学因素之间的关系.结果KRAS总突变率为42.4％,该基因在直肠的突变率显著高于结肠.NRAS和BRAF基因的突变率分别为4.6％和4.1％,这两个基因的突变状态与临床病理学关系不大.结论KRAS、NRAS和BRAF基因属于相互联系的通路,一个发生突变将制约另外两个基因的发生改变,检测结直肠癌中KRAS、NRAS和BRAF基因的突变状态能够更好地指导个体化治疗.

【期刊名称】《实用医药杂志》

【年(卷),期】2019(036)008

【总页数】4页(P733-736)

【关键词】结直肠癌;KRAS;NRAS;BRAF;临床病理特征

【作者】贠田;王长松;李富林;吕学霞;蒙念龙;高春芳

【作者单位】471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科

【正文语种】中文

【中图分类】R735.34

散发性结直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率长期高居恶性肿瘤前列。结直肠癌的发生发展是多基因、多步骤的复杂过程，个体差异较大，随着精准治疗时代的来临，基于基因检测治疗策略的选择在提升结直肠癌的诊治水平中发挥着巨大的作用，在结直肠癌靶向治疗过程中检测KRAS、NRAS、BRAF基因

突变状态对于结直肠癌的治疗有很重要的意义［1，2］。结直肠癌是一个复杂的

多基因参与的疾病，这些个体化药物的靶点基因在结直肠癌中起到关键的作用，因此探讨这些靶点与病理学因素之间的关系也很有必要。此前也有很多的文献对这些基因进行研究，但是学者们对于这些基因与临床病理之间的关系众说纷纭，因此该文采用大样本量的病例更进一步研究在结直肠癌患者中，KRAS、NRAS、BRAF

基因状态与病理学因素之间的关系，以便能得到一个更确切的结果。

1 资料与方法

1.1 一般资料所有检测样本均来自2013年9月—2017年7月笔者所在医院病理科留存蜡块389例，均为结直肠癌病理诊断明确的肿瘤标本。其中男 225例，女164例；年龄27～92岁，中位年龄 60岁。所有患者均经病理组织学检查，确诊为结直肠癌患者。所有患者在做KRAS、NRAS、BRAF检测前均知情同意并签署

知情同意书。

1.2 实验方法

1.2.1 主要试剂和仪器石蜡组织样本DNA分离试剂盒购自福建厦门艾德有限公司，KRAS、NRAS、BRAF基因突变检测试剂盒购自厦门艾德公司。核酸蛋白质浓度

测量仪B-500购自上海创萌生物科技有限公司，Mx3000P实时荧光定量PCR仪

购自美国Stratagene公司。

1.2.2 DNA提取比照苏木精-伊红染色在显微镜下标记肿瘤区域，切片过程中仅选取相关肿瘤区域，将含有肿瘤区域的DNA组织的蜡块10μm厚连续切片5张，

严格按照试剂盒说明步骤进行操作。DNA提取后应用核酸蛋白质浓度测量仪测量DNA质量及浓度。按照测量的DNA浓度稀释至2～5 mg/L备用。

1.2.3 实时荧光定量PCR检测 KRAS基因突变检测试剂盒检测KRAS基因的12、13、61密码子上的7种突变类型。NRAS检测外显子2的12、13密码子，外显子3的59、61密码子，外显子4的117、146密码子。BRAF基因突变检测15

外显子上的V600E突变。检测仪器使用的是美国的Agilent Mx3000P。检测程序按照试剂盒说明书设定。

1.3 统计学分析所有数据采用SPSS 19.0统计软件，结果运用χ2检验及Fisher

确切概率法，检验水准α=0.05，并设定P值为双侧分布，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 KRAS基因突变与临床病理参数之间的相关性检测结直肠癌中KRAS基因第12、13位密码子7种热点突变，总突变率为42.4%（165/389）。389例结直肠癌中，KRAS基因在直肠的突变率（50%，120/240）显著高于结肠（30.2，

45/149，P＜0.05）。KRAS基因突变与性别，年龄、肿瘤分化程度，TNM分期，有无淋巴结转移以及远处转移特征无明显相关（P＞0.05）。见表 1。

2.2 NRAS基因突变与临床病理参数之间的相关性检测结直肠癌中 NRAS基因第12、13、59、61、117和146密码子突变，总突变率为4.6%（18/389）。389例结直肠癌中，NRAS基因突变率与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、TNM分期，有无淋巴结转移以及有无远处转移其他临床病理特征无明显相关（P

＞0.05，表1）。 NRAS基因突变的结直肠癌中未同时检测到KRAS基因突变。

表1 389例结直肠癌患者KRAS、NRAS和BRAF基因突变分析临床病理参数 n KRAS基因突变数［例（%）］ P值 NRAS基因突变数［例（%）］ P值 BRAF

基因突变数［例（%）］ P值年龄≥60 256 110（43.0） 0.760 14（5.5） 0.273 11（4.3）0.800＜60 133 55（41.4）4（3.0）5（3.8）性别男225 94（41.8）0.765 11（4.9） 0.774 10（4.4） 0.700女164 71（43.3） 7（4.3） 6（3.7）

肿瘤部位直肠 240 120（50.0） 0.000 15（6.3） 0.053 8（3.3） 0.326结肠

149 45（30.2） 3（2.0） 8（5.4）分化程度高123 54（43.9） 0.304 6（4.9）0.480 4（3.3）0.377中238 103（43.3）12（5.0）12（5.0）低28 8（28.6）0（0） 0（0.0）TNM分期Ⅰ～Ⅱ 209 88（42.1） 0.894 10（4.8） 0.873 7（3.3）0.414Ⅲ～Ⅳ 180 77（42.8） 8（4.4） 9（5.0）淋巴结转移有126 57（45.2） 0.436 5（4.0） 0.668 5（4.0） 0.921无263 108（41.0） 13（4.9）11（4.2）远处转移有46 18（39.1） 0.642 1（2.2） 0.401 0（0.0） 0.135无344 147（42.7） 17（4.9） 16（4.7）

表2 389例结直肠癌患者KRAS、NRAS和BRAF基因突变分析（%）42.4）35.0）6.94）14.7）0.77）2.31）2.06）7.96）7.46）7.46）4.6）0.8）0.8）13 号密码子 2（0.5）GGT→GAT 2（0.5）61 号密码子 13（3.3）GAA→AAA 6（1.5）GAA→CTA 7（1.8）BRAF 基因 16（4.1）V600E 16（4.1）

2.3 BRAF基因突变与临床病理参数之间的相关性检测结直肠癌中BRAF基因第600位密码子突变GTG→GAG （V600E），突变率为 4.1%（16/389）。389例结直肠癌患者中，BRAF基因突变与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移以及有无远处转移无相关性（P＞0.05，表1）。BRAF基因V600E突变的结直肠癌中未同时检测到KRAS基因突变。

2.4 KRAS、NRAS和BRAF基因突变分析在389例结直肠癌患者中，KRAS基因突变率为42.4%（165/389），12、13密码子中检测的 7个常见突变的比率分