实验专题：_探究酵母菌种群数量变化(1)

☺关注本实验中的几个关键点：
♣ 酵母菌的计数 ►利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种 常用的微生物计数法，也叫做显微镜直接计数 法。 ►优点：直观、快速。 ►适用于稀释的菌悬液（或孢子悬液），即液体 培养基中Βιβλιοθήκη Baidu体的计数。 ►此法计得的是活菌体和死菌体的总和，又称为 总菌计数法。
探 究 培 养 液 中 酵 母 菌 种 群 数 量 的 动 态 变 化
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♣ 酵母菌的计数 （4）血球计数板的清洗：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗， 切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。 镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
A
B C
10
10 —
—
— 10
0.1
0.1 0.1
28
5 28
温度、营养物质对酵母菌生长的影响
试管 编号 A B C 培养液 /mL 10 10 —
无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
— — 10 0.1 0.1 0.1 28 5 28
探 究 培 养 液 中 酵 母 菌 种 群 数 量 的 动 态 变 化
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♣ 酵母菌的计数 （6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养： ♠培养液配制 ♠灭菌 ♠接种
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡 萄糖20g，1000 mL水），分装到5个 烧杯中（200mL/烧杯） 用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计 数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。 接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌 母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴 加量不要太多，避免初始菌数过多。） 将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
☺实验再探究
♣ 培养空间、氧气会影响酵母菌的生长吗？
例：（2008年江苏卷31题）为研究酵母菌种群密度的动态变 化，某同学按下表所列条件进行了A、B、C和D 共4组实验， 用1000mL锥形瓶作为培养器皿，棉塞封口，在25℃下静置 培养，其他实验条件均相同，定时用血球计数板计数。根据 实验结果绘出的酵母菌种群密度变化曲线图如下。
♣ 酵母菌的计数 （5）注意事项：
• 进行计数前，应先将试管摇匀，目的是使酵母菌在培 养液中混合均匀，以减少计数误差。 • 显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应 取相邻两边及顶角计数。 • 若一个小方格内酵母菌数量过多，难以数清时，则可 将培养液稀释一定倍数后再计数。 • 本实验无对照实验，酵母菌每天的数量变化可形成前 后对照。 • 血球计数板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和 冲洗的方法清洗。
酵母菌种群个体数量变化
酵母菌数量／万个〃mL-1
1200 1000 800 600 400 200 0 1 2 3 4 时间／d 5 6 7
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☺实验再探究
♣ 温度、营养物质影响酵母菌的生长吗？某同学按下 表完成了有关实验。
试管 编号 培养液 /mL 无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
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♣ 酵母菌的计数 （3）计数的操作 • 显微计数：静止5分钟后，先用低倍镜（16×10）找 到计数室所在的位置。然后根据血球计数 板规格，每个计数室选取5个（或4个）中 方格中的菌体进行计数。每个小方格内约 有5-10个菌体为宜。对于压在小方格界线 上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数。如 遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半 时，即作为两个菌体计数。计数一个样品 要从两个计数室中计得的值来计算样品的 含菌量。
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♣ 酵母菌的计数 （3）计数的操作
• 稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓， 可不必稀释。 • 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检 。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 • 加样品：在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无 菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴 入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝 隙自行渗入计数室。注意不可有气泡产生。
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♣ 结果分析 （1）数据记录 下表为一周的数据记录表：
时间 次数 1 2 3 平均 1 2 3 4 5 6 7
第3天
第1天
第7天
死亡
第6天
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♣ 结果分析 （2）构建数学模型：
无菌 操作
♠培养
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♣ 结果分析 （1）数据记录
以汤麦式血球计数板的数据记录为例。下表为某一次的 数据记录表，其中，A表示五个中方格的总菌数；B表示 菌液稀释倍数：
各中格的总菌数
1
第一室 第二室
2
3
4
5
A
B
二室平 菌数 均数 /ml
例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球 计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小 方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个 小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后 稀释 再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格 中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母 菌总数有 个。 2×108
•每块计数板由H形凹槽分为2个 同样的计数池。 •每个计数池分为9个大方格。
放大后的计数池
16个小格
25个中格
*
25X16 = 400小格
抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100个小格
*
*
*
*
16X25 = 400小格
* *
25个小格
每个计数室（大方格）共有400小格，总容积为0.1mm3
例3 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方
法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上， 用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用 滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝ 400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小 格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 个／ mL。 5n×105
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• 加样品：在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻 片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由 盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可 ），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。注意不 可有气泡产生。
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♣ 酵母菌的计数 （1）计数工具——血球计数板
实物图 ∆ 血球计数 板是一种 专门用于 计算较大 单细胞微 生物的一 正面图 种仪器。 ∆ 计数时， 常采用样 方法。 侧面图
计数室 滴液处
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♣ 酵母菌的计数 （1）计数工具——血球计数板
探究培养液中酵母菌种群数量 的动态变化
提出问题 作出假设
变量如何控制？ 酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
设计实验 完成实验 分析结果，得出结论 该探究活动中涉及4个科 学方法： （1）数学模型法； （2）抽样检测法； （3）显微观察法； （4）微生物培养法。
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♣ 酵母菌的计数 （5）注意事项：
• 进行计数前，应先将试管摇匀，目的是使酵母菌在培 养液中混合均匀，以减少计数误差。 • 显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应 取相邻两边及顶角计数。 • 若一个小方格内酵母菌数量过多，难以数清时，则可 将培养液稀释一定倍数后再计数。 • 本实验无对照实验，酵母菌每天的数量变化可形成前 后对照。 • 血球计数板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和 冲洗的方法清洗。
* *
16个中格
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♣ 酵母菌的计数 （2）计算： 每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？ 所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数 酵母细胞个数/mL= 所数的小方格数
例1 :在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释 50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内一个大格 （盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为 16，据此估算10mL培养液中有酵母菌 2x107个。