硫酸乙酰肝素
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２ 脐 带 提 取 物 提 供 一 种低 硫 酸 化 硫 酸 乙 酰肝 素 的 来 源 。提 胡 建 强 编译 樊 志 萍 校
（ Ｖｉ ｃ ｔ ｏ ｒ Ｇｉ ｎ ｓ ｂ ｕ ｒ ｇ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｉ ｎ Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ． Ｖ ｏ １ ． Ｘ ＸⅧ ．
将样 品溶 于 ５ ０ ｍＬ水 ， 上 至 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ 一Ｘ ２（ Ｃ１ 一 ，
硫 酸 基 和 氨 基 糖 。 电 泳 和 吖 啶 橙 染 色 后 出现 单 一 点 ，且 ２ ０ ０ － ４ ０ ０ 目 ）柱 （ ２ ． ２ ｃ ｍ×３ ５ ｃ ｍ ）， 约２ ／ ３ 样 品还 未 与 树 脂 ０％多糖 随后 被 １ ． ０ － １ ． ２ ５ Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ Ｇ 一 ２ ０ ０ 凝 胶 色 谱 出现 单 一 峰 则 表 明 此批 产 品有 较 结 合 ， 所 以用 水反 复 冲 洗 几 次 。约 ９ Ｆ Ｌ 氯 化 钠洗 脱 ，用 乙醇 回收 沉 淀 。 好 的 均 一 性 。 同样 的 ， 电 泳 显 示 部 分 １ ． ５ ： ２ 也 有 较 好 的均 匀 ｍｏ
． ５ ４ ，『 ￣ ］ ２ ５ ￣ ６ ５ 。 。总 氨 基 己糖 中氨 基 半 乳 糖 需要注意 的是各 部分中硫酸基含量 随洗 脱液盐浓度增 己糖 的 摩 尔 比 ０
加而增加 ，硫酸基含量 最高的物质被３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化钠洗脱 出 含 量 少 于 １ ％。 来 。３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 洗脱液和 １ ． ５ ： ３ 部分含有 一些硫酸皮肤素 ，其 可被作为铜络合物沉淀 除去 。
加 入 黏 多 糖粗 品溶 液后 ，用 约２ 倍 柱 体 积 水 冲 洗 色
． ２ ５ ，１ ． ５ 和３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯 化 钠 梯 度 明质 酸 、６ 一 硫 酸软骨素 和硫酸皮肤 素，下面 也给 出由此来 谱 柱 ， 硫 酸 乙酰 肝 素 经 １ 洗脱 ，除３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 洗 脱 液 ， 其 他 浓 度 的 洗 脱 液 各 分 为 ３ 部 分 ，体积 见表 ｌ 。 每 种 溶 液 持 续 洗 脱 ，直 至 流 出物 的 Ｍｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 反 应 呈 较 弱 或 阴 性 。 洗 脱 液 透 析 ，浓 缩 至 ２ ０ ～ ３ ０ ｍＬ ， 加 入４ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化 钠２ ｍＬ 和２ 倍 体 积 乙醇 。沉 淀 物 用 乙
１ ５ ２
食 品与药 品
Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ
２ ０ １ ３ 年第 １ ５ 卷第 ２ 期
・
知识介绍 ・
硫酸 乙酰肝素
硫酸 乙酰 肝素一般来 自牛肺制 备肝素时 的副产 品 。副
目 ）柱 （ ４ ． ５ ｃ ｍ ×４ ０ ｃ ｍ） （ 使 用 前 ，用 ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 盐 酸 清 洗 树
几 种 部 分 的 组 成 表 明这 些 变 化 主 要 是 硫 酸 基 的 含 量 ，
倍 乙醇 ，典 型 产 品 的 收 率是 ３ ５ ０ ｍｇ 。 电泳 迁移 率 说 明 了相应 的不 同。最 主 要 的部分 是 由１ ． ２ ５ 加入３
ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化 钠洗 脱 的 ，即部分 １ ． ２ ５ ： ２ ，含 有约等 摩尔 量 的
Ｃｏ ｍｐ ｌ ｅ ｘ Ｃａ ｒ ｂ ｏ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ． Ｐ ａ ｒ ｔ Ｂ． Ｎｅ ｗ Ｙｏ ｒ ｋ ａ ｎ ｄ Ｌ ｏ ｎ ｄ ｏ ｎ ：
Βιβλιοθήκη Baidu
取６ ． 硫酸软骨 素时获得 的部 分Ｂ按如下 步骤 分级分离 ：取１
１ 肝 素副产 品 （ ４ ｇ ）于４ ０ ０ ｍＬ水中溶解 ，得到浅黄 色溶 醇 冲 洗 ３ 次 、 乙醚 冲 洗２ 次 ，真 空 干 燥 。
液 ， 放 置 几 小 时 后 ，将 其 上 至 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ ． Ｘ２ （ Ｃ １ 一 ，２ ０ ０ ～ ４ ０ ０
各组分 的分析 数据和 收率见表 １ 。此结果 代表几种 不
产 品混 合 物 经 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ 分级 可得 到 几 个 不 同硫 酸 基 含 量 的 部 脂 直 ￣ ］ ｉ ２ ６ ０ ｎ ｍ处 吸光 度 低 于 ０ ． １ ）。
分 。脐带 中也含 有硫酸 乙酰 肝素 。因此 组织可用于提 取透
源 提 取 硫 酸 乙酰 肝 素 的 步 骤 。 材 料 提 取 自牛 肺 的 肝 素 副产 品 。 步 骤
同洗 脱 组 分 虽然一些 副产 品制 品的个 别部分 的收率变化 钠、本 氏溶液 （ 体积 比１ ０ ： １ ： ２ ）的溶液 １ ５ ０ ｍＬ 清洗 。合并上
显著 。
清 和 洗 涤 液 ，醋 酸 中 和 ， 对 水 透 析 过 夜 。 经 透 析 的液 体 过
Ａｍｂ ｅ ｒ ｌ ｉ ｔ ｅ Ｉ Ｒ ． １ ２ ０（ Ｈ 形 式 ）柱 ， 中和 后 ，浓 缩 至２ ０ ｍＬ，
性。但是，该部分在Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ Ｇ 一 ２ ０ ０ 凝胶色谱时经常表现小
幅 分 散度 ， 需进 一 步 分 级 。
纯 化得 到 的产 品 有 以下 组 成和 性质 ：糖 醛 酸 ４ ４ ． ９％ ， 氨 基 己糖 ２ ９ ． ０％，Ｎ － 硫 酸氨 基葡 糖 １ １ ％ ，总 硫 酸 基 对 氨 基
表１肝 素副产 品中分级的硫酸 乙酰肝 素组分ａ
用 Ｍｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 反应监测洗脱液：１ 滴Ｍ ｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 试剂 （ ０ ． ３％ 。 【 一 萘 酚 乙 醇 液 ）加 至 １ 或２ 滴 洗 脱 液 中 ， 加 入０ ． ８ ｍＬ
硫酸 ，再加入２ 滴水混匀。 １ ． ２ ５ 和１ ． ５ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化钠梯度洗脱 的洗脱液各分３ 部分收集。
（ Ｖｉ ｃ ｔ ｏ ｒ Ｇｉ ｎ ｓ ｂ ｕ ｒ ｇ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｉ ｎ Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ． Ｖ ｏ １ ． Ｘ ＸⅧ ．
将样 品溶 于 ５ ０ ｍＬ水 ， 上 至 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ 一Ｘ ２（ Ｃ１ 一 ，
硫 酸 基 和 氨 基 糖 。 电 泳 和 吖 啶 橙 染 色 后 出现 单 一 点 ，且 ２ ０ ０ － ４ ０ ０ 目 ）柱 （ ２ ． ２ ｃ ｍ×３ ５ ｃ ｍ ）， 约２ ／ ３ 样 品还 未 与 树 脂 ０％多糖 随后 被 １ ． ０ － １ ． ２ ５ Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ Ｇ 一 ２ ０ ０ 凝 胶 色 谱 出现 单 一 峰 则 表 明 此批 产 品有 较 结 合 ， 所 以用 水反 复 冲 洗 几 次 。约 ９ Ｆ Ｌ 氯 化 钠洗 脱 ，用 乙醇 回收 沉 淀 。 好 的 均 一 性 。 同样 的 ， 电 泳 显 示 部 分 １ ． ５ ： ２ 也 有 较 好 的均 匀 ｍｏ
． ５ ４ ，『 ￣ ］ ２ ５ ￣ ６ ５ 。 。总 氨 基 己糖 中氨 基 半 乳 糖 需要注意 的是各 部分中硫酸基含量 随洗 脱液盐浓度增 己糖 的 摩 尔 比 ０
加而增加 ，硫酸基含量 最高的物质被３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化钠洗脱 出 含 量 少 于 １ ％。 来 。３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 洗脱液和 １ ． ５ ： ３ 部分含有 一些硫酸皮肤素 ，其 可被作为铜络合物沉淀 除去 。
加 入 黏 多 糖粗 品溶 液后 ，用 约２ 倍 柱 体 积 水 冲 洗 色
． ２ ５ ，１ ． ５ 和３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯 化 钠 梯 度 明质 酸 、６ 一 硫 酸软骨素 和硫酸皮肤 素，下面 也给 出由此来 谱 柱 ， 硫 酸 乙酰 肝 素 经 １ 洗脱 ，除３ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 洗 脱 液 ， 其 他 浓 度 的 洗 脱 液 各 分 为 ３ 部 分 ，体积 见表 ｌ 。 每 种 溶 液 持 续 洗 脱 ，直 至 流 出物 的 Ｍｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 反 应 呈 较 弱 或 阴 性 。 洗 脱 液 透 析 ，浓 缩 至 ２ ０ ～ ３ ０ ｍＬ ， 加 入４ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化 钠２ ｍＬ 和２ 倍 体 积 乙醇 。沉 淀 物 用 乙
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食 品与药 品
Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ
２ ０ １ ３ 年第 １ ５ 卷第 ２ 期
・
知识介绍 ・
硫酸 乙酰肝素
硫酸 乙酰 肝素一般来 自牛肺制 备肝素时 的副产 品 。副
目 ）柱 （ ４ ． ５ ｃ ｍ ×４ ０ ｃ ｍ） （ 使 用 前 ，用 ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 盐 酸 清 洗 树
几 种 部 分 的 组 成 表 明这 些 变 化 主 要 是 硫 酸 基 的 含 量 ，
倍 乙醇 ，典 型 产 品 的 收 率是 ３ ５ ０ ｍｇ 。 电泳 迁移 率 说 明 了相应 的不 同。最 主 要 的部分 是 由１ ． ２ ５ 加入３
ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化 钠洗 脱 的 ，即部分 １ ． ２ ５ ： ２ ，含 有约等 摩尔 量 的
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取６ ． 硫酸软骨 素时获得 的部 分Ｂ按如下 步骤 分级分离 ：取１
１ 肝 素副产 品 （ ４ ｇ ）于４ ０ ０ ｍＬ水中溶解 ，得到浅黄 色溶 醇 冲 洗 ３ 次 、 乙醚 冲 洗２ 次 ，真 空 干 燥 。
液 ， 放 置 几 小 时 后 ，将 其 上 至 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ ． Ｘ２ （ Ｃ １ 一 ，２ ０ ０ ～ ４ ０ ０
各组分 的分析 数据和 收率见表 １ 。此结果 代表几种 不
产 品混 合 物 经 Ｄｏ ｗｅ ｘ １ 分级 可得 到 几 个 不 同硫 酸 基 含 量 的 部 脂 直 ￣ ］ ｉ ２ ６ ０ ｎ ｍ处 吸光 度 低 于 ０ ． １ ）。
分 。脐带 中也含 有硫酸 乙酰 肝素 。因此 组织可用于提 取透
源 提 取 硫 酸 乙酰 肝 素 的 步 骤 。 材 料 提 取 自牛 肺 的 肝 素 副产 品 。 步 骤
同洗 脱 组 分 虽然一些 副产 品制 品的个 别部分 的收率变化 钠、本 氏溶液 （ 体积 比１ ０ ： １ ： ２ ）的溶液 １ ５ ０ ｍＬ 清洗 。合并上
显著 。
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幅 分 散度 ， 需进 一 步 分 级 。
纯 化得 到 的产 品 有 以下 组 成和 性质 ：糖 醛 酸 ４ ４ ． ９％ ， 氨 基 己糖 ２ ９ ． ０％，Ｎ － 硫 酸氨 基葡 糖 １ １ ％ ，总 硫 酸 基 对 氨 基
表１肝 素副产 品中分级的硫酸 乙酰肝 素组分ａ
用 Ｍｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 反应监测洗脱液：１ 滴Ｍ ｏ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ 试剂 （ ０ ． ３％ 。 【 一 萘 酚 乙 醇 液 ）加 至 １ 或２ 滴 洗 脱 液 中 ， 加 入０ ． ８ ｍＬ
硫酸 ，再加入２ 滴水混匀。 １ ． ２ ５ 和１ ． ５ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 氯化钠梯度洗脱 的洗脱液各分３ 部分收集。