大一上学期实验二.酸碱蛋白显示教学课件
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实验二
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示
一、目的要求
㈠ 掌握血涂片的制作方法。 ㈡ 掌握酸性蛋白、碱性蛋白显示的原理。 ㈢了解上述化学成分显示的方法。 ㈣熟悉上述化学成分在细胞中的分布。
二、 实验原理
利用化学试剂与细胞内蛋白质产生有色的沉 淀反应，可对蛋白质进行定性、定位。
➢蛋白质的基本组成单位是氨基酸，它们同时具 有氨基和羧基。 细胞内不同蛋白质分子中所带 的碱性基团和酸性基团的数量不同，在不同PH溶 液中，整个蛋白质所带静电荷多少也不同。如整 个蛋白质所带的负电荷多，就为酸性蛋白；带正 电荷多，就为碱性蛋白。
注意事项
■ 在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回 推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细 胞应成单层均匀排列。
■ 抽提核酸是该实验中的关键。核酸带负电荷，如 未被提取，显示碱性蛋白时，核内 不能染色， 或整个切片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。
■ 染液pH必须控制在要求范围，从而使其他蛋白质 染色极微。
四、观察结果
酸性蛋白与碱性内 遍布绿色，细胞核内绿色稀少。
碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为 绿色。
显示细胞内酸性蛋白
显示细胞核内碱性蛋白
五、 实验报告结果部分的书写要求
1、说明细胞内酸性蛋白和碱性蛋白染色 原理。 2、根据实验情况说明酸性蛋白与碱性蛋白在细 胞
2. 将涂片作好标记放在70％乙醇中固定5分钟，室温 晾干。
3．放入5％三氯醋酸中60℃ 20分钟，抽提出核酸。 4．清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去残留的三氯
醋酸。 5．滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1％碱性固绿 (pH8.0～8.5) 中染色
30分钟, 另一张片放入0.1％酸性固绿 (pH2.0～ 2.5)染色5分钟。 7．清水冲洗，镜检。
➢正常生理条件下细胞内酸性蛋白负电荷多，在 染色时需带正离子（H+）多酸性染料与之反应； 而碱性蛋白正电荷多，在染色时需带负离子 （OH-）多碱性染料与之反应。
➢据此，可将细胞经三氯醋酸处理抽提掉核酸后， 用不同PH的固绿染液分别染色，使细胞内的酸 性和碱性蛋白质分别显示出来 。
三 实验方法
1. 临时装片的制备。
中的分布，可做简要分析。 3、画酸性蛋白与碱性蛋白在细胞中的分布图
（各选一个细胞，结构完整）
Golgi complex
×10
×40
Centrosome
×10
×40
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示
一、目的要求
㈠ 掌握血涂片的制作方法。 ㈡ 掌握酸性蛋白、碱性蛋白显示的原理。 ㈢了解上述化学成分显示的方法。 ㈣熟悉上述化学成分在细胞中的分布。
二、 实验原理
利用化学试剂与细胞内蛋白质产生有色的沉 淀反应，可对蛋白质进行定性、定位。
➢蛋白质的基本组成单位是氨基酸，它们同时具 有氨基和羧基。 细胞内不同蛋白质分子中所带 的碱性基团和酸性基团的数量不同，在不同PH溶 液中，整个蛋白质所带静电荷多少也不同。如整 个蛋白质所带的负电荷多，就为酸性蛋白；带正 电荷多，就为碱性蛋白。
注意事项
■ 在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回 推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细 胞应成单层均匀排列。
■ 抽提核酸是该实验中的关键。核酸带负电荷，如 未被提取，显示碱性蛋白时，核内 不能染色， 或整个切片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。
■ 染液pH必须控制在要求范围，从而使其他蛋白质 染色极微。
四、观察结果
酸性蛋白与碱性内 遍布绿色，细胞核内绿色稀少。
碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为 绿色。
显示细胞内酸性蛋白
显示细胞核内碱性蛋白
五、 实验报告结果部分的书写要求
1、说明细胞内酸性蛋白和碱性蛋白染色 原理。 2、根据实验情况说明酸性蛋白与碱性蛋白在细 胞
2. 将涂片作好标记放在70％乙醇中固定5分钟，室温 晾干。
3．放入5％三氯醋酸中60℃ 20分钟，抽提出核酸。 4．清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去残留的三氯
醋酸。 5．滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1％碱性固绿 (pH8.0～8.5) 中染色
30分钟, 另一张片放入0.1％酸性固绿 (pH2.0～ 2.5)染色5分钟。 7．清水冲洗，镜检。
➢正常生理条件下细胞内酸性蛋白负电荷多，在 染色时需带正离子（H+）多酸性染料与之反应； 而碱性蛋白正电荷多，在染色时需带负离子 （OH-）多碱性染料与之反应。
➢据此，可将细胞经三氯醋酸处理抽提掉核酸后， 用不同PH的固绿染液分别染色，使细胞内的酸 性和碱性蛋白质分别显示出来 。
三 实验方法
1. 临时装片的制备。
中的分布，可做简要分析。 3、画酸性蛋白与碱性蛋白在细胞中的分布图
（各选一个细胞，结构完整）
Golgi complex
×10
×40
Centrosome
×10
×40