四种提取土壤DNA的方法

OMEGA试剂盒法

1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。

2.加入100µl Buffer DS，震荡混匀。

3.70o C水浴10min,水浴过程中，轻轻震荡。

4.于室温离心（3000rpm）3min，上清吸取800µl至2ml离心管，加入270µl Buffer SP2，充分震荡混匀。

5.冰浴5min, 4o C、12000rpm离心5min。

6.小心将上清移至新的2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀（轻轻地20-30次），于室温放置30min。

7.4o C、12000rpm离心10min，以沉淀DNA。

8.弃上清，确保不将DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上1min，以流干液体。

9.加入200µl Elution Buffer于管内，轻轻震荡10s。

10.加入50-100µl HTR Reagent ,轻轻震荡10S。

11.室温放置2min，12000rpm离心2min。

12.将上清移至新的离心管中，加入等体积XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。

13.将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中，10000rpm室温离心1min，弃上清。

14.加入300µl XP2 Buffer， 10000rpm离心2min，弃收集管。

15.将柱子插入新的收集管，加入700µl SPW Wash Buffer（提前用无水乙醇配好）， 10000rpm离心1min，弃上清。

16.重复上一步。

17.弃液体，12000rpm室温离心2min。

18.将柱子插入新的离心管中，加入30-50µl Elution Buffer于柱子中央，65o C水浴10-15min。

19.12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱液保留。

20.重复步骤18、19。

周法

1.称取5g土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2％CTAB提取液pH8.0）和50µl蛋白酶K（20mg／ml），置于37o C恒温摇床上（水平放置），150-180rpm摇1h。

2.加入1.5ml 20％SDS，轻轻混匀，65o C水浴45min，每隔20min轻轻摇动一次，混匀泥浆。

3.6000rpm常温离心10min，将上清液转移至新的50ml离心管中。

注：转移上清时，动作要慢、轻

4.加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），轻轻颠倒2-3min混匀，12000rpm、低温（ 4o C ）离心10min，将上清轻轻转移至新的50ml离心管。

5.向上清中加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，室温放置1h。

6.低温、 12000rpm离心15min，弃上清，倒置卫生纸上。

7.加入300-500µl 70％乙醇洗涤，盖紧盖子，轻轻转动离心管，12000rpm离心3min。

8.吸干乙醇， 37o C烘干。

9.加入200-300µlTE，所得溶液即为DNA粗提液。

改良CTAB法

1.取2g样品置于50ml离心管中，加入5ml 2XCTAB抽屉缓冲液。

2.放入液氮中速冻30S，立即取出65o C水浴30S，如此反复3次。

3.加入1／3体积的玻璃珠，高速震荡3min.

4.置于65o C水浴20min,每隔10min轻轻摇匀一次。

5.加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），轻轻颠倒2-3min混匀，12000rpm、低温（ 4o C ）离心10min，将上清轻轻转移至新的50ml离心管。

以下步骤同周法5-9。

SDS-CTAB-溶菌酶法

1.取5g样品置于50ml离心管中，加入12ml抽提液（100mM Tris-HCl、100mMNa2EDTA、100mMNa2HPO4、1.5M NaCl ），再加入500µl溶菌酶（50mg／ml），于37o C 震荡30min。

2.加入7µl蛋白酶K（ 20mg／ml ）和1.5ml 2％CTAB轻轻混匀。

3.加入1.5ml 20％SDS， 65o C 水浴45min，每隔20min摇匀一次。

以下步骤同周法4-9