还原糖测定(菲林法)

还原糖的测定(菲林试剂法)

一.基本原理

还原糖可以将菲林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，反应终点可以由次甲基兰指示（蓝色消失形成砖红色），根据一定量的菲林试剂完全还原所需的还原糖量，可计算加入样品中的还原糖的含量。

二.试剂和仪器

1.试剂

菲林试剂甲液：称取69.3g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解，定容至1000ml

菲林试剂乙液：称取346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml

次甲基蓝溶液：1g次甲基蓝溶于100ml水

2.仪器

水浴锅

三.操作步骤

体积的确定

1 倾倒出一半样品于烧杯，于水浴锅加热至不产生气泡

2 菲林试剂的标定

取菲林试剂甲乙液各5ml，于250ml锥形瓶，加水10ml，并从滴定管中加入0.4％标准葡萄糖若干毫升，电炉上加热至沸，并保持微沸2min，加2滴次甲基蓝溶液，继续用标准葡萄糖滴定。至要求操作在1min内完成，记录耗用的标准葡萄糖的体积V0。

3定糖预备实验

菲林试剂甲乙液各5ml于250ml锥形瓶，准确加入20ml样液，摇匀加热至沸。加2滴次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖体积

V1毫升

4样品中还原糖的测定

准确量菲林试剂甲乙液各5ml于250ml锥形瓶，准确加入20ml样液，摇匀，

补加V0—V1毫升蒸馏水，并从滴定管中预加V1毫升样液。摇匀加热至沸，保持微沸2min，加入2滴次甲基兰溶液，继续用样液滴定至蓝色消失。记录消耗样液的总体积。

四.计算

还原糖含量（g/ml，以葡萄糖计）＝（V0-V1）× 0.4× n × 1/10

N——样品稀释倍数