磁珠偶联抗原方法

磁珠偶联抗原

活化

移取0.5mL (10mg) 的BioMagPlus 羧基磁珠至15mL 尖头离心管内，并放置在磁分离架上直到上清液变完全透彻后，用吸管小心移弃上清。

加5mL of MES 缓冲液充分混匀洗涤. 将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step 2, 三次. 最后一次洗涤后, 重悬磁珠于5mL 的MES 缓冲液中。

活化试剂（），剧烈振荡摇匀。

室温下，将离心管置于旋转混匀仪上活化反应30 分钟。反应过程中，注意不让磁珠沉淀聚积在一起。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step 2, 四次。

蛋白偶联

计算需要偶联的蛋白，抗体量. 一般地，每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白（抗体）。可适量添加一些载体蛋白，如BSA Fraction V，增加反应体系中的总蛋白量，从而可以起到一定的封闭作用。保证抗体偶联的正确方向。

将蛋白加至5mL MES 缓冲液中。

（吸取50μL 蛋白液于950μL的MES缓冲中. 配成1：20的稀释液. 标记为偶联反应前蛋白液.置于一旁用于后面的偶联率计算。）

将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内，剧烈振荡混匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上偶联反应16-24小时。

（将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心收集上清. 标记为偶联后蛋白液，用于计算偶联率。）

重悬磁珠于5mL MES 缓冲液中，振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。

重复Step 6, 一次

加5mL 的淬灭液，振荡摇匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上30 分钟。

将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。

洗涤和贮存偶联后的磁珠

加5mL 洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。

重复Step 1, 三次。

最后一次洗涤后, 重悬磁珠于2mL 洗涤缓冲液内，此时磁珠的浓度约为5 mg/mL. 置于2-8摄氏度保存。

0.05M MES配方：2-（N-吗啉代）乙磺酸，用超纯水配制即可