PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版
液相色谱柱前衍生
液相色谱柱前衍生是一种用于提高液相色谱分析灵敏度和选择性的技术。
在液相色谱分析中，样品中的某些化合物可能不具有足够的紫外吸收或响应，导致无法在液相色谱仪中进行检测。
这时，可以使用柱前衍生技术，通过在样品中加入一种或多种衍生剂，将目标化合物转化为具有更强紫外吸收或响应的衍生物，从而提高了检测灵敏度和选择性。
柱前衍生技术可以用于多种类型的液相色谱分析，包括反相高效液相色谱、正相高效液相色谱、离子交换高效液相色谱等。
在反相高效液相色谱中，常用的衍生剂包括甲醇、乙醇、乙腈等有机溶剂，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强紫外吸收的衍生物。
在正相高效液相色谱中，常用的衍生剂包括胺类、醇类等化合物，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强极性的衍生物，从而提高了分离效果。
在离子交换高效液相色谱中，常用的衍生剂包括酸类、碱类等化合物，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强离子交换能力的衍生物。
柱前衍生技术的优点包括：提高检测灵敏度和选择性；改善分离效果；简化样品处理过程；适用于多种类型的液相色谱分析。
然而，柱前衍生技术也存在一些缺点，例如操
作繁琐、需要使用有毒有害的衍生剂等。
因此，在使用柱前衍生技术时需要注意安全问题，并选择合适的衍生剂和实验条件。
柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
图 3 当归 多糖 经 TFA 水 解的 时 间对 各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖 醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半 乳 糖 ( galactose); 6. 葡 萄 糖 ( g lucose) ; 7. 阿 拉 伯 糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离 为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结 果表明, 磷 酸缓 冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时 间梯 度 为 0→ 10→ 30 m in 和 相 应浓 度 梯度 为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完 善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易 裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规 的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准 确、方便和可在线大批量分析的目标。
柱前衍生高效液相色谱法测定减肥药中的芬氟拉明 翦英红 龙
表 !$ 回收率及精密度 ! " (e* " = 6 ^ D :!$4 : 9 2 Y : G > : ?6 8 H\ G : 9 > ? > 2 8! (e*
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酸水解-柱前衍生化-高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸
酸水解-柱前衍生化-高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸黄芳;邓欣;王玉芹;谢淑桐;黄晓兰;吴惠勤【摘要】面膜化妆品样品在酸性条件下水解后,得到的水解产物与1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮发生衍生化反应,采用高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸的含量.以Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,用乙腈和0.025 mol·L-1乙酸铵溶液以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱,用紫外检测器测定.透明质酸的质量浓度在10.0～1000 mg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.010％.以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为101％～106％,回收量的相对标准偏差(n=6)为1.5％～7.2％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2019(055)008【总页数】6页(P898-903)【关键词】高效液相色谱法;酸水解;柱前衍生化;透明质酸;化妆品;面膜【作者】黄芳;邓欣;王玉芹;谢淑桐;黄晓兰;吴惠勤【作者单位】中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070【正文语种】中文【中图分类】O652.63透明质酸（HA）又名玻璃酸、玻尿酸，是一种天然存在于生物体内的糖胺聚糖，最早由美国哥伦比亚大学的MEYER和PALMER在1934年从牛眼玻璃体中分离出来［1］。
现在透明质酸的生产方法主要有两种，一种是从动物中提取（如鸡冠中），另一种是微生物发酵，多数生产厂家都采用微生物发酵生产透明质酸［2－3］。
免疫亲和柱净化柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测法测定粮谷中的T-2毒素
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! ! 自然界中多种农作物的致病菌可以产 生 #"# 毒 素， 其中大部分来自镰孢菌属， 产毒能力随真菌种类 不同而异， 并受 到 环 境 因 素 的 影 响。 玉 米 和 黑 麦 中 的致病菌产毒能 力 较 强， 其 次 为 大 麦、 大 米 和 小 麦。 #"# 毒素的毒 性 主 要 作 用 于 增 殖 活 跃 的 细 胞， 如骨 髓、 肝、 黏膜上皮和 淋 巴 细 胞 等， 而对淋巴细胞的损 呕 害最为严重。 #"# 毒 素 的 中 毒 症 状 主 要 为 恶 心、 吐、 食欲减退或拒 食、 倦 怠 和 体 重 减 轻 等， 同时还具 有致畸性和弱的致癌性。在动物实验中发 现 #"# 毒 素对动 物 的 小 肠、 脾、 胸 腺、 肠 黏 膜、 淋 巴 器 官、 造血 器官和睾丸都有损 伤， 过量时可导致骨髓和淋巴组 织坏死、 溶解、 外周 血 粒 细 胞 减 少， 淋巴细胞严重缺 乏。同时 #"# 毒素 进 入 机 体 后， 迅速经酯酶代谢成 $#"# 毒素等多 种 代 谢 物［ ( ］。 国 际 上 对 #"# 毒 素 非 常重视， 前苏联已 提 出 国 家 的 食 品 卫 生 限 量 标 准 为 ()) ! % ! &% 。我国小麦 中 #"# 毒 素 的 污 染 率 和 含 量 是比较高的， 据对 "") 份小麦样品的调查结果 表明， 正常小麦中 #"# 毒 素 的 污 染 阳 性 率 为 *) ’ ， 平均含 量为 ’"& " ! % ! &% ， 最高含量可达( (##& ) ! % ! &%［ # ］。 ! ! #"# 毒 素 的 测 定 方 法 主 要 有： 薄层色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的背景和意义。
下面是一个概述的范例：正如我们所知，液相色谱法是一种常用的分离和检测分析技术，在化学、药学、环境科学等领域具有广泛的应用。
然而，传统的液相色谱法在某些情况下可能面临一些挑战，如分离效果不理想、分析时间较长等。
为了克服这些问题，柱前衍生-反相高效液相色谱法被提出并逐渐受到关注。
柱前衍生是指在样品处理中，在样品中引入适当的衍生试剂，通过与目标分析物发生化学反应，使其在色谱分析中具有更好的分离性能和检测灵敏度。
反相高效液相色谱法是基于分离样品中不同化学性质的分子在反相色谱柱上的亲水作用，达到分离和定量分析的目的。
柱前衍生-反相高效液相色谱法不仅可以提高色谱分析的分离效果，还能够提高检测灵敏度和减少分析时间。
这对于复杂样品的分析具有重要意义，例如药物代谢产物、环境污染物等。
通过引入适当的衍生试剂，可以有效地改善样品的分离性能，同时提高对目标分析物的响应，从而实现快速、灵敏的定量分析。
本文将对柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理、方法和应用进行详细介绍。
首先，我们将阐述柱前衍生的基本原理和常用的衍生试剂。
然后，重点介绍反相高效液相色谱法的步骤和关键参数。
最后，我们将通过实例和应用案例来阐述柱前衍生-反相高效液相色谱法在药物分析、环境监测等领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理和实践，为他们的研究和实验工作提供参考和指导。
文章结构部分应包括以下内容：本文主要分为三个部分，即引言、正文和结论。
具体结构如下：1. 引言1.1 概述本部分将简要介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的研究背景和意义。
首先，说明柱前衍生技术在分析化学领域的重要性，该技术可以通过将样品与特定试剂反应生成易于分析的化合物，从而提高液相色谱分析的敏感性和选择性。
其次，介绍反相高效液相色谱法在分析化学中的广泛应用，包括药物分析、环境监测和食品安全等领域。
柱前衍生化-高效液相色谱法测定白念珠菌中多胺的含量
柱前衍生化-高效液相色谱法测定白念珠菌中多胺的含量纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【摘要】目的建立同时测定白念珠菌中4种多胺(腐胺、尸胺、亚精胺和精胺)的HPLC方法.方法样品经苯甲酰氯衍生化,资生堂C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,3.0μm)分离,以甲醇(A)-0.1％甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,0～5min,30％～48％ B; 5～12 min,48％ B;12～15 min,48％～70％ B;15～25 min,70％B,流速0.6 ml/min,检测波长254 nm.结果腐胺、尸胺、亚精胺和精胺浓度分别在0.775 ～77.50 μg/ml(r=0.999 9)、1.160 ～116.0 μg/ml(r =0、999 9)、5.800 ～580.0μg/ml(r=0.9998)、2.533 ～192.7 μg/ml(r =0.999 9)的范围内线性关系良好.4种多胺的加样回收率为94.27％～ 109.3％,精密度RSD ＜4％.结论该含量测定方法灵敏、重现性好,能同时测定白念珠菌中4种多胺的含量.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2013(031)006【总页数】4页(P412-414,453)【关键词】多胺;柱前衍生化;高效液相色谱法;白念珠菌【作者】纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【作者单位】解放军第401医院药剂科,山东青岛,266071;第二军医大学药学院,上海,200433;解放军第169医院,湖南衡阳,421000;第二军医大学药学院,上海,200433;第二军医大学药学院,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R917多胺是一类具有生物活性、低分子量的含氮有机化合物的总称[1]，广泛存在于原核及真核生物细胞中。
多胺具有多种重要的生理功能，如:稳定核酸上的电荷、清除活性氧[2，3]；调节细胞的生长和分化[4]。
有研究表明,通过控制多胺水平可影响白念珠菌菌丝形成[5],所以多胺可能是诱导白念珠菌被膜形成的重要因素之一。
柱前衍生化高效液相色谱法测定他达拉非中氯乙酸残留量
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
２０１９年 １０月 ５日 第 ２８卷第 １９期 Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．１９牞Ｏｃｔｏｂｅｒ５牞２０１９
·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．１９．０１２
柱前衍生化高效液相色谱法测定他达拉非中氯乙酸残留量
徐然
（江苏省南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 ２１１１００）
摘要：目的 建立测定他达拉非中氯乙酸残留量的柱前衍生化高效液相色谱法。方法 用 ２－硝基苯肼盐酸盐对样品进行衍生化，色谱 柱为岛津 ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈 －０．１％磷酸溶液 牗梯度洗脱 牘，流速 １．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长 ３９２ｎｍ。
结果 氯乙酸衍生物检测的专属性强，检测限 ２０ｎｇ／ｍＬ，定量限 ５０ｎｇ／ｍＬ；质量浓度在 ５０～５００ｎｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好 （ｒ＝０．９９９６）；平均回收率为 ９４．６８％，ＲＳＤ为 ３．９４％（ｎ＝９）。结论 经方法学验证，该方法适用于他达拉非中氯乙酸残留量的测定。
关键词：他达拉非；氯乙酸；衍生化；高效液相色谱法
色 谱 柱 ：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱 （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ， ５μｍ）；流动相：乙腈（Ａ相）－０．１％磷酸溶液（Ｂ相），梯 度洗脱，０ｍｉｎ３０％Ａ～７０％Ｂ、１２ｍｉｎ５５％Ａ～４５％Ｂ；流 速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：２０μＬ；柱温：３０℃；检测波长： ３９２ｎｍ。 ２．２ 溶液制备
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｄｕａｌｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ
PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量
PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量作者：余亦婷皮文霞谢辉曹丽娟李西文李霞陆兔林严国俊来源：《中国药房》2021年第12期摘要目的：分析并比较不同生长年限黄芪中6种单糖的含量。
方法：取来自3个产地的2～4年生黄芪药材，经水提醇沉、Sevage除蛋白后制得黄芪多糖;将上述多糖经三氟乙酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后，采用高效液相色谱法测定其中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等6种单糖的含量。
以Symmetry C18为色谱柱，以磷酸盐缓冲液（pH 6.8）-乙腈（84 ∶ 16，V/V）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为245nm，柱温为35 ℃，进样量为20 µL。
结果：黄芪多糖中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的含量分别为0.50～0.94、0.76～1.60、3.35～7.86、87.33～275.77、1.95～8.96、2.35～14.04 mg/g，2、3、4年生黄芪中上述单糖的总含量分别为98.26～139.92、173.81～295.71、122.37～182.41 mg/g。
3年生黄芪中葡萄糖的含量与2、4年生黄芪有显著差异（162.71～275.77 mg/g vs. 87.33～107.70、111.54～167.26 mg/g，P关键词黄芪;多糖;单糖;柱前衍生化;高效液相色谱法ABSTRACT OBJECTIVE： To analyze and compare the contents of 6 kinds of monosaccharide in Astragalus membranaceus from different growth years. METHODS： 2-4 years old A. membranaceus from three areas were extracted with water extraction and alcohol precipitation，Sevage deproteinization to obtain A. membranaceus polysaccharide. The samples were firstly hydrolyzed with trifluoroacetic acid （TFA） and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP）. HPLC analysis was adopted to determine the contents of 6 kinds of monosaccharide as mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose， arabinose. The determination was performed on Symmetry C18 column with phosphate buffer solution （pH 6.8）-acetonitrile （84 ∶ 16， V/V） as mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 245 nm， and column temperature was 35 ℃. The sample size was 20 µL. RESULTS： The contents of mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose and arabinose were 0.50-0.94， 0.76-1.60， 3.35-7.86， 87.33-275.77， 1.95-8.96， 2.35-14.04 mg/g，respectively. Total contents of monosaccharide from 2， 3， 4 years old A. membranaceus were 98.26-139.92， 173.81-295.71， 122.37-182.41 mg/g， respectively. There was significant difference in the contents of glucose between 3 old years A. membranaceus and 2， 4 old years A. membranaceus （162.71-275.77 mg/g vs. 87.33-107.70， 111.54-167.26 mg/g， PKEYWORDS Astragalus membranaceus;Polysaccharides;Monosaccharides;Pre-column derivatization;HPLC黃芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根[1]，主产于我国山西、内蒙古等地[2]。
柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量
第29卷2001年7月 分析化学(FE NXI H UAX UE ) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry 第7期779～781柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量王 超3 王 星(中国进出口商品检验技术研究所,北京100025)摘 要 样品采用乙腈直接提取,离心分离及用液2液分配和固相萃取(C 18柱)净化方式,经衍生后,用液相色谱紫外检测器测定猪肉中5种青霉素残留量。
使用的分离柱是N ova Pak C 18柱,流动相为乙腈和磷酸盐混合液。
方法检出限0.02mg/kg ,回收率为70.9%～96.5%,相对标准偏差为3.10%～6.71%。
关键词 青霉素,残留,高效液相色谱,猪肉,柱前衍生化 2000208210收稿;2001201219接受1 引 言青霉素作为治疗家畜疾病的抗菌剂已获得广泛应用。
当食用肉食品时,可能会受到青霉素残留的危害。
为了保证人类食品的安全,欧盟对肉中青霉素最高残留限量规定为苄青霉素0.05mg/kg ,苯唑青霉素、邻氯青霉素和双氯青霉素分别为0.3mg/kg 。
测定猪肉中青霉素的方法已有许多报道,但对多种青霉素残留的测定方法,都是使用离子对反相色谱进行分离测定〔1～3〕。
由于离子对试剂对色谱的分离影响较大,作者报道了用反相液相色谱分离测定牛奶中多种青霉素残留量的方法〔4〕,在此基础上,本文通过增加样品脱脂净化处理,采用柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中多种青霉素残留量。
并用于实际样品分析,结果满意。
2 实验部分2.1 仪器与试剂日本岛津LC 210AD 高效液相色谱仪,RF 210A 紫外检测器,CR 27AD 数据处理机。
净化柱为Supel 2clean T M LC 218SPE Tubes (3m L )。
磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、氯化汞、氯化钠、氢氧化钠和正己烷为分析纯。
乙腈为色谱纯。
水为蒸馏水或相应的去离子水。
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成
PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化结合高效液相色谱法（HPLC）测定地参多糖中单糖组成的方法。
地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物，其多糖成分具有显著的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此，对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。
This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法，通过与单糖上的羟基反应，将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物，从而便于HPLC 检测。
PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版
PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版糖组成分析（PMP-HPLC）混合单糖标准品的准备：称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml 以待分析。
多糖的水解称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。
单糖的PMP衍生化取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。
加入100μL 0.3 mo l/L的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。
吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。
用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。
HPLC分析糖组成Agilent 1260高效液相色谱系统色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm；流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7）KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中；乙腈（HPLC级）；时间（min）1030354545.0155柱温：20℃；紫外检测波长：254nm；流速：1ml/min；进样体积：20μl。
PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成
PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成陈燕文;李玉娟;宋梦璐;崔耀天;许方雪;李佳;胡晶红;张永清【摘要】应用水提醇沉法获得玛咖多糖,苯酚-硫酸法测定玛咖多糖含量,PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生法对酸水解的玛咖多糖衍生化,HPLC法分析其单糖组成.结果表明,PMP柱前衍生化-HPLC法精密度、稳定性和重现性实验的相对标准偏差均小于3%,线性实验结果显示在1.50~650.00μg/mL浓度范围内各单糖的相关系数均大于0.9991,加样回收实验各单糖的回收率均在98.83%~102.82%之间,确定玛咖多糖的单糖组成及摩尔比为m(D-甘露糖):m(葡萄糖):m(D-半乳糖):m(阿拉伯糖)=1:196:6:6.该方法分析玛咖多糖单糖组成简单易行,结果稳定可靠.%To study the composition of maca polysaccharides by PMP (1-phenyl-3-methyl-5- pyrazolone) pre-column derivatization and HPLC, maca polysaccharides were extracted by the method of water extraction and alcohol precipitation and measured by phenol-sulfuric acid method, derivatization of acid-hydrolyzed maca polysaccharide was carried out by pre-column derivatization of PMP, and its monosaccharides composition was analyzed by HPLC method. The relative standard deviations of precision test, stability test and reproducibility test were less than 3%, the correlation coefficient of each monosaccharide in the concentration range of 1.50~650.00μg/mL was more than 0.9991, and the recoveries of the monosaccharides were between 98.83%~102.82%. The composition and proportion of monosaccharide of maca polysaccharide werem(D-mannose):m(glucose):m(D-galactose):m(arabinose)= 1: 196: 6: 6. The PMPpre-column derivatization-HPLC method is simple and easy to determine the composition of the monosaccharides of maca.【期刊名称】《当代化工》【年(卷),期】2017(046)008【总页数】5页(P1513-1516,1520)【关键词】玛咖;多糖;单糖组成;PMP柱前衍生化;高效液相色谱法【作者】陈燕文;李玉娟;宋梦璐;崔耀天;许方雪;李佳;胡晶红;张永清【作者单位】山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东省中药材良种选育工程技术研究中心,山东济南 250355;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东省中药材良种选育工程技术研究中心,山东济南 250355;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东省中药材良种选育工程技术研究中心,山东济南 250355;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东省中药材良种选育工程技术研究中心,山东济南 250355;山东中医药大学药学院,山东济南 2503552;山东省中药材良种选育工程技术研究中心,山东济南 250355【正文语种】中文【中图分类】O657玛咖（Lepidium meyenii）为十字花科独行菜属植物玛咖的块状根茎[1]，原产于南美安第斯山区秘鲁境内，现在北美洲、欧洲和东亚地区均有种植。
猪苓多糖的PMP柱前衍生化-HPLC指纹图谱研究
猪苓多糖的PMP柱前衍生化-HPLC指纹图谱研究作者：赖戈娜贾文玉罗思婉周昌园黎雄张娴曾星来源：《中国药房》2020年第07期摘要目的：建立豬苓多糖的柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并测定其主要单糖组分含量，为猪苓药材的质量评价提供参考。
方法：11批不同产地猪苓药材经水提醇沉、Sevage除蛋白后得到猪苓多糖。
多糖经三氟乙酸（TFA）水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化后，进行HPLC分析。
色谱柱为HypersiL BDS C18，流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.84）-乙腈（84 ∶ 16，V/V），检测波长为254 nm，柱温为30 ℃，流速为1 mL/min，进样量为20 µL。
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版）建立11批多糖样品的指纹图谱并进行相似度评价，通过与对照品比对进行色谱峰指认，再采用SPSS 23.0软件进行聚类分析，并测定多糖中主要单糖组分的含量。
结果：11批猪苓多糖样品HPLC 指纹图谱中共呈现出3个共有峰，分别指认为甘露糖、葡萄糖和半乳糖，各批次样品的相似度均大于0.94。
聚类分析将11批多糖样品分为3类，药材编号为S1～S6、S8的样品聚为一类，药材编号为S7、S10、S11的样品聚为一类，药材编号为S9的样品单独聚为一类。
含量测定结果显示，11批样品中甘露糖含量为1.571～8.771 mg/g、葡萄糖含量为26.072～132.194 mg/g、半乳糖含量为3.420～36.593 mg/g。
结论：本研究建立的柱前衍生化-HPLC指纹图谱方法可为猪苓的药材质量评价提供参考;不同批次猪苓多糖中单糖组成相同，指纹图谱特征峰与药材的产地无明显相关性，药材之间的单糖含量存在明显差异。
关键词猪苓多糖;单糖;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮;柱前衍生化;高效液相色谱法;指纹图谱ABSTRACT OBJECTIVE： To establish pre-column derivatization-HPLC fingerprint of Polyporus polysaccharide， and to determine the contents of main monosaccharide components， so as to provide reference for quality evaluation of Polyporus umbellatus. METHODS： Polyporus polysaccharide was extracted with boiling water and precipitated by ethanol and deproteinized by Sevage from 11 batches of P. umbellatus from different producing areas. The samples were firstly hydrolyzed with trifluoro-acetic acid （TFA） and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone （PMP）. HPLC analysis was then conducted. The determination was carried out on HypersiL BDS C18 column with mobile phase composed of 0.1 mol/L phosphate buffer （pH 6.84）-acetonitrile （84 ∶ 16， V/V） by gradient elution at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 20 µL. The similarity of 11 batches of Polyporus polysaccharide was evaluated by using TCM Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System （2012A edition）， and the contents of main monosassharide components were detected. The peak was identified by comparing with the reference substance， and cluster analysis was performed by using SPSS 23.0 software. RESULTS： In HPLC fingerprints of the 11 batches of samples， 3 common peaks were identified， namely mannose，glucose and galactose. The similarity of all samples was above 0.94. Cluster analysis classified 11 batches of samples into three categories. S1-S6， and S8 were grouped into category 1; S7， S10 and S11 were grouped into category 2; S9 was individually grouped into one category. Results of content determination showed that the contents of mannose ranged from 1.571 to 8.771 mg/g; those of glucose ranged from 26.072 to 132.194 mg/g， and those of galactose ranged from 3.420 to 36.593 mg/g. CONCLUSIONS： Established pre-column derivatization HPLC fingerprints can provide reference for quality evaluation of P. umbellatus. The monosaccharide composition of different batches of Polyporus polysaccharide is the same; there is no significant correlation between fingerprint characteristic peak and the origin of herbs; there is significant difference in the content of monosaccharide of P. umbellatus.KEYWORDS Polyporus polysaccharide; Monosaccharide; PMP; Pre-column derivatization; HPLC; Fingerprint猪苓又名猪灵芝、野猪苓、猪屎苓、鸡屎苓，始载于《神农百草经》，是多孔菌科真菌猪苓[Polyporus umbellatus（Pers.）Fries]的干燥菌核[1]。
高效液相色谱耦合柱前衍生化定量测定木质纤维素原料酸水解过程中还原糖的方法
第29卷第4期2021年12月纤维素科学与技术Journal of Cellulose Science and TechnologyV ol. 29 No. 4Dec. 2021文章编号：1004-8405(2021)04-0011-08 DOI: 10.16561/ki.xws.2021.04.08高效液相色谱耦合柱前衍生化定量测定木质纤维素原料酸水解过程中还原糖的方法杨世波1，雀静2，宋云杉2，范敏2，许康2，李冬雪2，何亮1*（1. 昆明理工大学化学工程学院，云南昆明650500；2. 云南红塔蓝鹰纸业有限公司，云南建水654300）摘要：报道了一种通过高效液相色谱（HPLC）耦合柱前衍生化方法测定木质纤维素水解液中还原糖的方法。
以六种还原糖作为标准物，通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化反应，六种糖具有很高的分离度，可精确检测出各还原糖。
通过研究温度、时间和PMP用量，可以确定衍生化反应的最佳条件；此外还评估了该方法的精密度、准确性和回收率。
结果表明，HPLC柱前衍生化方法最佳条件：200 μL还原糖溶液加入400 μL PMP甲醇溶液和400 μL NaOH溶液于70℃反应40 min。
此外，该方法的精密度、准确性和可重复性的相对标准偏差分别小于2.17%、1.67%和2.04%，表明该方法具有良好的测量精密度、准确性和可重复性，各标准糖的回收率为95.89%～101.51%。
总体来说，该方法可用于实验室研究和工厂应用中木质纤维素水解产物中还原糖的测定。
关键词：木质纤维素；水解；柱前衍生化；高效液相色谱法；还原糖；定量检测中图分类号：TQ352.78 文献标识码：A由于不可再生化石资源的过度消耗和严重的环境污染问题，开发可再生的木质纤维素生物质资源以实现资源的可持续发展越来越受到人们的重视[1]。
半纤维素作为木质纤维素的第二大组分，主要由木聚糖、葡糖醛酸木聚糖、阿拉伯木聚糖、甘露聚糖等组成[2]。
柱前衍生高效液相色谱法
柱前衍生高效液相色谱法（Pre-column derivatization HPLC）是一种色谱分析方法，主要用于对样品中的化合物进行衍生化处理，以提高其在色谱柱上的分离效果和检测灵敏度。
在柱前衍生高效液相色谱法中，样品首先与衍生化试剂反应，生成易于色谱柱上分离和检测的衍生物。
衍生化反应通常涉及样品中的官能团（如羟基、羧基、氨基等）与衍生化试剂的反应。
反应后的衍生物再通过色谱柱进行分离，最后用检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）进行检测。
柱前衍生高效液相色谱法的优点包括：
1. 提高分离效果：衍生化处理可以改变样品中化合物的性质，使其在色谱柱上分离得更完全。
2. 提高检测灵敏度：衍生化处理可以增加化合物在检测器上的响应信号，从而提高检测灵敏度。
3. 增加选择性：通过选择合适的衍生化试剂，可以使某些难以分离的化合物产生不同的衍生物，从而实现选择性检测。
4. 扩大应用范围：柱前衍生高效液相色谱法适用于许多不同类型的样品，包括生物样品、食品、环境样品等。
柱前衍生高效液相色谱法在药物分析、生物分析、环境监测等领域得到了广泛应用。
然而，这种方法也存在一定的局限性，如衍生化反应可能受到反应条件、试剂纯度等因素的影响，因此需要仔细优化实验条件以确保分析结果的准确性。
柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中二甲基噁唑烷防腐剂
柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中二甲基噁唑烷防腐剂王强;寻知庆;黄金凤;卢剑;郭新东;吴楚森【摘要】建立了化妆品中二甲基噁唑烷防腐剂的柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)分析方法.样品使用体积分数50％的乙腈溶液提取,9-芴甲基羰基氯柱前衍生,经RRHD-C18(2.1 mm×50 mm×1.7μm)色谱柱分离后,高效液相色谱-二极管阵列检测器检测,以保留时间和紫外吸收光谱定性,外标法定量.结果表明,二甲基噁唑烷衍生物在质量浓度1.00～20.0 mg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9990;方法检出限和定量限分别为6.50 mg/kg和20.0 mg/kg.样品平均加标回收率在83.4％～99.6％之间,日内和日间精密度(RSD,n=6)分别为2.1％～6.7％和5.0％～7.8％.该方法检出限、回收率和精密度满足化妆品中二甲基噁唑烷防腐剂的测定要求.【期刊名称】《香料香精化妆品》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】5页(P55-59)【关键词】高效液相色谱法;(HPLC);化妆品;防腐剂;二甲基噁唑烷【作者】王强;寻知庆;黄金凤;卢剑;郭新东;吴楚森【作者单位】广州质量监督检测研究院,广东广州 511447;广州质量监督检测研究院,广东广州 511447;广州质量监督检测研究院,广东广州 511447;江苏省产品质量监督检验研究院,江苏南京 210007;广州质量监督检测研究院,广东广州 511447;广州质量监督检测研究院,广东广州 511447【正文语种】中文二甲基噁唑烷，主体结构为噁唑烷五元环，具有广泛的抑菌活性，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等具有很好的抗菌活性，最低抑制浓度可达125 mg/kg。
二甲基噁唑烷是一种化妆品准用防腐剂[1-2]，它本身没有离子性，它可以在pH 5.5 ～11.0范围内的阳离子、阴离子和非离子性化妆品中充分发挥抑菌活性[3-5]。
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糖组成分析（PMP-HPLC）
混合单糖标准品的准备：
称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。
多糖的水解
称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。
单糖的PMP衍生化
取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。
加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。
吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。
用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。
HPLC分析糖组成
Agilent 1260高效液相色谱系统
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm；
流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液
Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液
磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7）
KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中；
乙腈（HPLC级）；
时间（min）Buffer A Buffer B
0 100 0
10 90 10
30 80 20
35 80 20
45 80 20
45.01 100 0
55 100 0
柱温：20℃；
紫外检测波长：254nm；
流速：1ml/min；
进样体积：20μl。