以受体为靶点的药物筛选模型的建立和应用

研究 目的： 建立 中药对神经干细胞诱导转变为神经细胞的体外模型 ， 不仅对研究脑的发育和分化 以及神经系 统疾病 的治疗具有重要价值 ，而且也有助于了解 中药的作用机制，为中药的临床应用提供坚 实的科 学依据 。本研 究评价体外海马神经干细胞在胶原凝胶 内的生长情况 ， 探讨胶原凝胶作为神经系统组织支架材料 的可行性 ，以建 立适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型 。研究方法 ：①细胞培养 ：体外培养来源于孕 １ ３天胎 鼠的海马部位神经干细胞，传 至第 三代；根据胶 原的特性 ，把神经干细胞均 匀混合于胶 原的预凝胶 溶液中，便 可 形成 “ 细胞一 胶原 ” 的凝 胶三 维结构。②检测指标：倒置相差显微镜和激光共聚焦 显微镜观 察胶 原凝胶 中神经干 细胞的生长、伸展情况；通 用免疫细 胞化 学方法及 荧光 显微 技术鉴定神经干细胞 ，Ｂ ｒ ｄ Ｕ 染色标 记增 殖的细胞 ； 采用 Ｃ Ｃ Ｋ － ８ 法及 Ｌ ｉ ｖ ｅ ／ Ｄ ｅ ａ ｄ Ｖ ｉ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ／ Ｃ ｙ ｔ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｙ ｔ Ｋｉ ｔ 试剂盒检测神经干细胞 不同培养条件 下的生存和增殖 能力， 筛选 出最 佳的胶 原工作浓度 。结果 ：①倒置相 差显微镜 下观 察发现胶 原凝胶中的神经干细胞生长状态 良好 ； ② 胶 原凝胶 中的神经干细胞大部分呈 Ｎｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 、Ｂ ｒ ｄ Ｕ 阳性 ； ③与悬浮二维培养方式相 比，三维胶原凝胶更利于神 经干细胞 的生存及增殖 ；④通过 Ｃ Ｃ Ｋ一 ８法筛选出最佳的胶原浓度为 ０ ． ５ ｍｇ ／ ｍｌ 。结论 ：神经干细胞在胶原凝胶 中 生长 良好 ，适合于构建干细胞药物筛选的三维培养模型 。
中国药理通讯 ２ ０ ０ ９年第 二士六卷第三塑
合物对 Ｅ Ｔ Ａ Ｒ 亚 型 均 有 极 高 亲和 力 ， 尤其是 Ｅ Ｔ Ｐ ２ ｏ 对Ｅ Ｔ Ａ Ｒ的亲和力超过阳性对照 Ｂ Ｑ１ ２ ３ （ － １ ０ ０倍 ） 和Ｂ Ｑ ４ ８ ５ （ ～ １ ０
倍） 。同阳性对照药一样 ，所选用 的 ５个化合物对 Ｅ Ｔ Ｂ Ｒ亲和力极低 。３个 Ｇ Ｆ类化合物对 Ｅ Ｔ Ａ Ｒ亚型有较高亲和 力 ，而 ３个 Ｇ Ｆ类化合物对 Ｅ Ｔ Ｂ Ｒ亲和力也极低 。用放射性配体受体结合实验 ，确定 了合成的全新结构化合物竞 争性拮抗 内皮素受体的效能和效价 ， 观察这些化合物对 内皮素受体不 同亚型的选择性 ， 为从受体水平阐 明这类化 合物 的作用机制提供 了有力实验依据 。
以受体为靶 点的药物筛选模 型 的建立和应用
池木根 郑 建 全
军事医学科学院毒物药物研究所
北京 １ ０ ０ ８ ５ ０
我 国的新药研制工作面临着十分严峻 的竞争和挑战 。 在创 制新药的研究 中寻找和发现具有生物活性 的先导化
合物是至关重要的环节之一 ， 而对大量化合物进行 活性筛选 则是发现 先导化合物的主要手段和途径 。 近年来 ，我 们应用 以受体为靶 点的药物筛选模型筛选新药技术 ，已取得 了一定的经验 。 所谓 受体 配体结合 技术 ，就是利用从 器官 中分离 出细胞膜受体或重组受体技术制备的受体作为筛选模型 ， 利用受体和配体结合 的高度特异性 以及放射 性核素测量的高灵敏度的特点，用放射 性核素标记配体 （ ’ Ｌ ） ，在一定 的条件下 ，使其与受体 （ Ｒ）结合 ，形成 受体—— 配体复合物 （ Ｒ・ ‘ Ｌ） ，通过测量 Ｒ＊ Ｌ的放射性 ，达到 了解受体 的结合活性 的 目的，使用这种技术测定 标记配体 的类似物和受体的亲和力 ， 来比较一系列的化合 物与受体结合的亲和力 。由于受体配体结合分析操作快 速 ，简便 ，药 品用量少 ，可作为药物构效关系研究 的工具 。通过大 量类似活 性药物结构的化合物研 究，不难总结 出构效关系 ，明确定位 出药物活性 的分子部位 ，指导化学合成 ， 研制安全有 效的新型特 异性药品提 供可靠的评价
手段 。 我们利用这种技术 已建立了二十六种 受体配体结合技术模型，并在这些模 型上分别筛选到 了有价值的亲和
力大小和功能活性的新化合物参数 ，从而大大加快 了先导化合物发现 的进程 。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
体外神经干 细胞 三维药物筛选模 型的构建
关 水 陆瑞 欣 刘 天 庆 马学虎 崔 占峰 大 连 理 工 大 学 干 细 胞 与 组 织 工 程 研 究 室 辽 宁 大 连 １ １ ６ ０ ２ ４ ； 牛滓大学科学与工程系 英 国 牛津
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