皮肤刺激皮内试验

一般材料：取平整部位表面积600cm2剪碎， 加入氯化钠注射液100mL，70℃放置24小时 后取出冷却备用。
0.9％氯化钠注射液及其浸提液
将浸提液滴到25mm×25mm的4层纱 布块上(每块约0.5mL), 按下图所示部位 敷贴于动物背部两侧。将滴有0.9％氯化 钠注射液的纱布块敷贴在对照接触部位。
然后敷料外层用纱布包裹，再用半封闭 性包扎带固定敷料和纱布4h以上，依次 取下包扎带、纱布及敷料, 对接触部位进 行标记,用温水清洗并擦干。
供试品部位 对照部位
头部 尾部
去毛的背部区域 对照部位
供试品部位
结果观察
在除去敷贴物后1h、24h、48h和72h 记录各接触部位情况。如存在持久性损 伤有必要延长观察时间, 以评价这种损伤 的可逆性或不可逆性,但延长期不必超过 14d。
红斑与水肿的原发性刺激记分相加后再除以观 察总数(总数为6:2个计分类型和3个观察期)。 当用0.9％氯化钠注射液对照时，计算出对照 原发性刺激记分，将试验材料原发性刺激记分 减去该记分，即得出每只动物原发性刺激记分。 使用24h、48h和72h的观察数据进行计算。 试验之前或72h后的恢复观察数据不用于计算。 每只动物的记分相加后除以动物总数即为原 发性刺激指数。
试验方法
试验前用75％的(V/V)乙醇擦拭背部去毛区域， 等变干后根据供试品的不同性状选用不同的 方法进行操作。
粉剂或液体样品
取0.5g或0.5mL的试验材料，直接涂 抹到剃毛皮肤部位。 粉剂使用前用少量 的水制成糊状，有利于涂抹。
用25mm×25mm透气性好的敷料敷贴 涂抹样品的皮肤部位, •然后敷料外层用 纱布包裹，再用半封闭性包扎带固定敷 料和纱布4h以上。接触期结束后依次取 下包扎带、纱布及敷料, 对接触部位进行 标记,用温水清洗并擦干。
供试品制备
根据产品标准的规定制备供试品。
试验动物
应使用清洁级健康、初成年的、未使用 过的试验用（新西兰）兔，雌雄兼用, 同 一品系,同一饲养条件 体重不低于2kg。
预试验
试验材料初试至少采用2只动物。
初试反应如可疑或不明确, 应考虑进行复 试。
试验步骤
试验前一天，将试验用兔人工固定或固定到固定装置 上，然后把背部脊柱两侧的被毛用手术剪粗剪后再用 推子小心的把被毛去除干净(约10cm×20cm区域),作 为试验和观察部位。去毛过程应确保动物皮肤健康无 损伤。
皮内刺激试验
简述 评价材料通过皮内注射浸提液产生刺激
反应的潜在性。 应排除的试验材料 任何对皮肤、眼、粘膜组织有刺激的材
料或产品, 如具有腐蚀性的强酸或强碱材 料(pH≤2或≥11.5)不应再进行本试验。
试验材料与仪器
天平
精度 0.01或0.1g
供试品称量用
精度 0.1或1mg
试剂称量用
皮肤刺激试验
评价材料在试验条件下产生皮 肤刺激反应的潜在性。
家兔为首选，预期无反应，可 直接使用3家兔。
试验材料与仪器
天平
精度 0.01或0.1g
供试品称量用
精度 0.1或1mg
试剂称量用
精度 50g
试验用兔称量用
兔固定装置、手术剪刀、推子、游标卡尺、 称量瓶、吸管、移液管、包扎带、医用纱布、 烧杯、压力蒸汽灭菌器。
如试验动物没有出现清晰的红斑或水肿 反应时,应至少再选用2只动物进行试验。
试验步骤
动物准备
试验前一天, 将试验用兔人工固定或固 定到固定装置上，然后把背部脊柱两侧 的被毛用手术剪粗剪后再用推子小心的 把被毛去除干净(约10cm×15cm区域),作 为试验和观察部位。去毛过程应确保动 物皮肤健康无损伤。
固体样品
研成粉末，试验材料可用水充分湿化以 保证与皮肤良好的接触性。
用25mm×25mm的透气性好的敷料块覆 盖材料接触部位, 然后敷料外层用纱布包 裹，再用半封闭性包扎带固定敷料和纱 布4h以上，依次取下包扎带、纱布及敷 料, 对接触部位进行标记,用温水清洗并 擦干。
药包材：
铝质软胶管：取试样5 支，向每支加入标示 容量的0.9％氯化钠注射液，振荡5分钟后， 合并提取液备用。
试验用兔的抓取固定方法
试验用兔比较驯服不会咬人，但脚爪较尖应避 免兔抓伤。进行刺激试验时，只需将兔抓牢或 按住即可，抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地 拿在手心，抓住颈后部的皮厚处，提取兔，然 后用左手托住臀部，使兔的体重大部分落在左 手上，不能单提两耳、捉拿四肢、提抓腰部和 背部。
预试验
试验材料应使用1只动物进行初试。 如 动物出现清晰红斑或水肿时，不必再进 行其他试验。
按下表规定的分类系统, 描述每一接 触部位在每一规定时间内皮肤红斑和水 肿反应情况并评分, 记录结果以出具试验 报告。
表14 观察损伤情况及评分标准
反应
记分
红斑和焦痂形成
无红斑
0
极轻微红斑(勉强可见)
1
红斑清晰
中度红斑
2
重度红斑(紫红色) 至焦痂形成
3
水肿形成
4
无水肿
0
极轻微水肿(勉强可见)
1
水肿清晰(肿起, 不超出区域边缘)
2
中度水肿 (肿起约1mm)
3
重度水肿(肿起超过1mm, 并超出接触区)
4
刺激最高记分
8
注: 记录并报告皮肤部位的其他异常情况。
表15皮Fra Baidu bibliotek刺激试验结果评价
反应类型
极轻微 轻度 中度 重度
平均记分
0.0 ～ 0.4 0.5 ～ 1.9 2.0 ～ 4.9 5.0 ～ 8.0
结果评价
按下列规定确定原发性刺激指数(PII)。 将每只动物在每一规定时间试验材料引起的
精度 50g
试验用兔称量用
兔固定装置、手术剪刀、推子、称量瓶、 吸管、移液管、注射器（2mL）、注射 针（5＃、8＃）、烧杯、压力蒸汽灭菌 器。
试剂
75%(V/V)乙醇、0.9％氯化钠注射液、植物油 或其它规定的溶剂。
器具灭菌
与供试品接触的所有器具应采用可靠的方法灭 菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃恒温20分钟， 或置电热干燥箱内160℃干烤2h。
试剂与器具灭菌
试剂 75%(V/V)乙醇、0.9％氯化钠注射液或其它规
定的浸提介质。 器具灭菌 与供试品接触的所有器具应采用可靠的方法
灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃恒温20分 钟，或置电热干燥箱内160℃干烤2h。
试验动物
应使用清洁级健康、初成年的、未使用过 的试验用（新西兰）兔，雌雄兼用, 同一品系, 同一饲养条件，体重应不低于2kg。