亚微米级免疫磁球及其在细菌分离中的应用
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粒 子的 乙醇溶液分 批加人 到反应 体 系中 ， 后 停止 反应 ， 乙醇反复 离心清 洗磁性微 球 ３次 ， ９ｈ 用 最后将
微球置 于去离 子水 中保 存 ， 取适 量样 品进行 Ｔ Ｍ 表征 ． Ｅ
１３ 免疫磁球 的制 备 ．
利用 在碱性 条件下 ＦＴ ＩＣ的碳 酰胺键 可与抗 体赖氨 酸 的 氨基 共价 结合 的 特点 ， 备标 记有 ＦＴ 制 ＩＣ 的羊抗兔 ＩＧ抗 体 ．利用激 光 动态 光 散 射 扫描 仪 对 自制 的磁 性 微 球进 行 粒 径 和 表 面 电位 的 表征 ．取 ｇ ２０Ｉ 磁性微 球 与 ５ ｇ标记 有 ＦＴ ０ ｇ ｘ ０ ＩＣ的羊抗兔 ＩＧ抗 体分散 在 １ｍ Ｐ Ｓ溶液 中， 常温混合 振荡 ｇ Ｌ１× Ｂ 于
品．首先 ， 各取 ２ ０ Ｉ 免疫 磁球 １和 Ｄ ｎｂ ａ ｓ 品分别 加入 至 １ｍ ０ ｇ ｘ ｙ ａ ｅｄ 产 Ｌ浓 度 为 ｌ ０和 １ ｆ／ Ｌ的沙 门 ０ ｃｕ ｍ
氏菌溶液 中 ，常温混合 ３ ｉ，磁分 离后 用微 生物平 板计数 法对 ４个 不 同样 品的上 清液 和磁 分 离液进 ０ｍｎ 行菌 落计数 ，同时对原始 的沙 门 氏菌 液对 照样 品计 数 ．参 考 Ｄｎｂａｓ 明 书提 供 的磁 分 离条 件 ，降 ｙａｅｄ 说 低免疫 磁球 的浓度 ， 各取 ５ ｇ的免疫磁 球 １和 Ｄ ｎｂａｓ 品分别 加入 至 １ｍ ０ ｙａｅｄ 产 Ｌ浓 度为 １ ０和 １ ｆ ０ｅ／ ｕ ｍ Ｌ的沙 门氏菌溶液 中 ， 温混合 ３ ｉ， 常 ０ｍｎ 磁分 离后用 微生 物平板 计数法对 ４个不 同样品 的上 清液进 行 菌落计数 ，同时对 原始 的沙 门氏菌 液对 照样 品计 数并计 算 出磁分离 效率．
光光谱 和酶联免疫（ ＬＳ 等方法研究了抗体在磁性微球表面的吸附行为．在 沙门氏菌磁分离实验中 ， Ｅ ＩＡ） 通过 调节投料抗体的浓度 ， 研究 了免疫磁球表面抗体浓度和 磁分离效率 的相关性 ，与微米级 商品化免疫磁球 相 比， 亚微米级 的免疫磁球表现出了更高的磁分离效率 ． 关键词 亚微米 ； 免疫磁球 ； 沙门 氏菌 ； 磁分离效率
牛 牧 杜 美红 ， ，邓 奕 ，高明远
（ ．中 国科 学 院化 学 研究 所 ， 京 １０ ９ ； ．北 京 市 理 化 分 析测 试 中心 ， 京 １０ ８ ） １ 北 ０ １０ ２ 北 ００ ９
摘要
以亚微米级的单分散磁性微球为基础 ， 制备 了表面包覆沙 门氏菌抗体的免疫磁球．利用表 面电位 、 荧
取 ２０ｉ 磁性 微球 ， ０ ｇ ， ｚ 用无菌 去离子水 清洗 ３次 ， 散在 １ｍ Ｐ Ｓ溶液 中 ， 分 Ｌ１× Ｂ 分别 加入 ５ ， ０ ５ ０ ｌ， 和 ０５Ｉ ． ｇ沙 门氏菌多克 隆 ＩＧ抗体 ， ｘ ｇ 常温 振荡混 合 ２ｈ 磁分 离 ， 洗．将制 备的磁 性微球用 质量 分数 ， 清 为 １ 的 Ｂ Ａ溶液封 闭得到 免疫磁性 微球 ， 次记 为免疫磁 球 １～ ．然后 ， Ｅ ＩＡ法标 定免 疫磁 球 ％ Ｓ 依 ４ 用 ＬＳ 表面的抗体含量． 将得到的表面具有不同抗体量的免疫磁性微球与浓度为 １ ｆ ｍ ０ ｃ ／ Ｌ的沙门氏菌液混 ｕ 合， 常温 轻微振 荡 ３ ｉ ， ０ｒｎ后 磁分离 ．最后 ， ａ 用微 生物 平板计数 法对 ４个样 品的上清 液进行 菌落计数 ， 同时对原始 的沙 门氏菌液对 照样 品计数 并计算 出磁分 离效 率． 为 了考 察免疫 磁球粒 径对磁 分离效 率 的影 响 ，选 择粒径 更 大 的商 品化产 品 Ｄ ｎｂａｓ ｙａｅｄ 作为 对 照样
均为去 离子水 ．
Ｍｏｅ６０型酶标仪 （ Ｉ －Ａ ｄｌ ８ ＢＯＲ Ｄ公 司 ， 国 ） Ｃ ｒ ｃｉｓ 美 ； ａ Ｅ ｌ ｅ型荧 光 分 光光 度 计 （ Ａ ＩＮ公 司 ，美 ｙ ｐ Ｖ ＲＡ
国 ） Ｊ Ｍ一 ０ Ｘ Ｉ透射 电子显微 镜 （ ；Ｅ １ Ｃ ０ Ｉ 日本 ） ．
２ｈ后 ，进行 磁分 离 ，得 到上 清液 １ 然 后再 将制 得 的免疫 磁球 分散 在 １ｍＬＰ Ｓ缓 冲液 中 ，常温 振 荡 ； Ｂ ２ｈ ， Ａ 进行 磁分 离 ， 到上清 液 ２ 重 复这一 过 程 ，得 到 上清 液 ３ 得 ； ．测 定上 清液 １～３的荧 光 光谱 ．同 时， 对清洗 ３次后 得到 的免疫磁 球粒 径和表 面 电位 进行表 征．用未标 记 ＦＴ ＩＣ的抗 体重 复上述 实验 ， 将 得到 的上清液 用酶联 免疫 （ ＬＳ 法再 次测定 各个上 清液 中的抗体 浓度 ． Ｅ ＩＡ）
０４ ６８ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０５ －７ ０ ２ １ ）２ ３２ ５ ２ １ ９ （０ １ ０ － ２ － ０ ０ ０ 中 图分 类号
免 疫磁性 微球是指 表 面包 覆抗体 的磁性微 球 ， 可与含 有相 应抗 原 的靶 物质 特异 性地 结合 ．通 过在 磁性复 合微球 表面偶联 或者 吸附上特定 抗体 ， 形成 免疫磁性 微球 ＿ ．２ ｌ ０世纪 ８ 代 ， ｇｌ ａ ＿ ｊ ０年 Ｕｅｔ ｓ ｄ等 ２ Ｊ 利用 “ 活溶胀 ” 激 法成功制 备 了单 分 散 的磁性 微 球 ，并 在磁 性 微球 表 面 连接 上 抗 体制 备 出免 疫 磁性 微 球， 在细胞 分离领域 取得 了 良好 的分 离效果 ．随着 以此 技 术为 基础 制 备 的商 品化 产 品 Ｄ ｎｂａｓ ｙａｅｄ 种类 的不断 丰富 ，近年来 免疫磁 性微球在 核酸分 析 、蛋 白质分 离 和纯化 以及 靶 向药 物载体 等 领域都 得 到 了
收稿 １期 ： ０ ０１ －１ ３ ２ １—１ ． ０
基金项 目： 国家卫生部重大专项 （ 批准号 ： ０ ８ Ｘ ００ －１ ） 中国科学院知识创新工程 （ ２０ Ｚ １０ １０４ 和 批准号 ： Ｊ Ｘ ｗ— ５ 资助 Ｋ Ｃ ２Ｙ Ｍ１ ） 联系人简介 ：高明远 ，男，博士，研究员 ，博士生导师 ，主要从事无 机纳米材料的制备及其生物应用研究．
不足 以抵 消重力作 用 的影 响 ，因而在 体系 中容易沉淀 ，不利 于免疫 识 别 和捕 获过 程 ， 是 能够 快速 磁 但
分 离的优 势使得微米 级免疫 磁球得 到 了广 泛应用 ¨ ．针对 目前微 米级免疫 磁球存 在 的问题 ， 如果 能够
将免 疫磁球 的粒径减 小到亚微 米级 ， 不仅 有助 于提高其胶 体稳 定性 ，而且 随着 其 比表 面积 的增 大有利 于提 高反应 活性．但是 ， 磁分离 过程是 外加磁 场克服 微球 之 间相互 斥力 的过程 ， 体 稳定 性 的提 高 意 胶 味着 微球之 问的相互 排斥力增 强 ， 在一定程 度上会 降低 微球 的磁 响应性 ．为 了解决 这 一 问题 ， 课题 本 组通 过前期 的研究工 作 ， 功地制 备 了具 有 良好胶 体稳定 性与磁 响应性 的亚微 米级磁性 微球 ， 在 成 并
１ ２ 磁性 微球 的制备 ．
参考文 献 ［７ 方 法 ， １８ｍ １］ 将 ． Ｌ苯 乙烯单体 、 ０ｍ ５ 、 ０ ｇＰ Ｐ ２ Ｌ乙醇和 ３ｍ ９ ｇＶ ０ ３０ｍ Ｖ 、 ５ｍ Ｌ去离 子 水加 入到 ５ Ｌ三颈瓶 中 ， ７ ０ｍ 在 ０℃条 件下进行 聚合 反应 ， 反应 开始 ２ｈ后 ， Ｐ Ｐ包覆 的 Ｆ 将 Ｖ ｅＯ 纳米
Ｅ ｍａ ｌ ｇ ｏ ＠ ｉ ｃ ｓ ａ ｃ — ｉ： ａ ｍｙ ｃ ａ ． ｃ． ｎ
Ｎ ． ｏ２
牛
牧 等 ：亚微 米 级 免 疫磁 球及 其在 细 菌分 离 中的 应 用
３３ ２
鼠Ｉ ｇ Ｇ抗体 （ 北京博奥森生物技术有限公司） 沙门氏菌多克隆 ＩＧ抗体 （ ｍ ／ Ｌ 美 国 Ｋ Ｌ公司） ； ｇ １ ｇｍ ， Ｐ ； 沙 门氏标准菌株 （ ａｍ ｎｌ ｐ ， Ｓ ｌ ｏｅ ａｓ ． 菌株 编号 ： ． ５ ２ ｌ １ １５ ，中国科 学 院微 生物 研 究所 ） ；实验 过 程 中所用 水
电荷 ， 而所制备 的磁性 微球表 面带有 较强 的正 电荷 ，因此 ，某些 ＩＧ可 以通过 静 电作 用 吸附 在微球 表 ｇ
将制备得 到 的免疫磁球 用质 量分数 为 １ 的 Ｂ Ａ溶液 封闭 １ｈ ， Ｒ ２０标 记 的羊抗 鼠 ＩＧ抗 ％ Ｓ 后 与 Ｂ０ ｇ 体混 合 ０５ｈ 磁分 离后 比较 上清 液 中的 Ｒ ２０标 记 的羊 抗 鼠 ＩＧ的荧光 变化． ． ， Ｂ０ ｇ
１４ 免疫磁 球的细菌 分离 实验 ．
广泛应用 ．此外 ， 免疫 磁球在食 品卫生 检测领域 也得 到 了应用 ¨ ， ， 利用 免疫磁 性分 离技 术不 仅 ” 大大缩短 了检测 时间 ， 有助 于提高 检测 的灵 敏度 ’ ． 更 目前 ， 品化的免疫 磁性微 球粒径 通常都是 微米 级 ，从理 论上 讲 ， 米 级免 疫磁 球 之 间的 排斥 力 商 微
５ｍ ， ｎｉｏｅ 司 ） Ｌ Ｉｖｒｇｎ公 ｔ ；牛血清 白蛋 白（ Ｓ Ｓｇ — ｌ ｃ 司） 异 硫氰 酸荧 光素 （ ＩＣ， ３ ５ —０ Ｂ Ａ， ｉ Ａｄ ｈ公 ｍａ ｒ ｉ ； ＦＴ Ｆ ６ １１０
ｍ ， ｉ ａＡｄ ｃ 司 ） ｇ Ｓ ｍ —ｌｒｈ公 ｇ ｉ ；四乙基 罗丹 明（ Ｂ ０ ， ８９４１０ｍ ， ｉ ａＡｄｉ Ｒ ２０ ２３２ —０ ｇ Ｓｇ ．ｌｒｈ公 司 ） ｍ ｃ ；羊抗 兔 和羊抗
Ｖ０． ２ １３
高 等 学 校 化 学 学 报
Ｃ ＭＩ ＡＬ Ｊ ＨＥ Ｃ ＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＩ ＮＥＳ Ｅ ＵＮＩ ＶＥＲ Ｔ Ｅ ＳＩＩ Ｓ
Ｎｏ． ２
３ ２～３ ６ ２ ２
２１ ０ １年 ２月
亚 微 米 级 免 疫 磁 球 及 其 在 细 菌 分 离 中 的 应 用
细菌 分离 的初 步实验 中取得 了 良好 的分离效果 ¨ ． 本 文在前 期研究 工作基础 上 ， 亚微米 级免疫磁 球 的制 备过程 进行详 细研究 ， 一步完 善 了磁 对 进 分离捕 获沙 门氏菌 的相 关工作 ．
１ 实验 部分
１ １ 试 剂与仪 ．
苯 乙烯 （ 北京 化学试剂 公 司） 用前 减压蒸馏 ； 氮二异 丁基脒二 盐酸 盐 （ ５ ，纯度 ９ ％ ， ｉ 使 偶 Ｖ０ ７ Ｓｇ ｍａ Ａｄ ｃ 司 ） 无 水 乙醇和聚 乙烯 基吡 咯烷酮 （ Ｖ Ｋ ０ 等均 为分析 纯试剂 ； ｌｒｈ公 ｉ ； Ｐ Ｐ， ３ ） 参考 文献 ［８ 方法制备 １］ Ｐ Ｐ包覆 Ｆ 纳 米 粒 子 ，粒 径 大 小 约 为 ５８ｎ Ｖ ｅＯ ． ｍ；商 品 化磁 球 Ｄ ｎｂａｓ ａｔＳｌｏｅａ 规 格 为 ｙａｅｄ＠ ｎｉ ａｍ ｎｌ （ ． ｌ
２ 结果 与讨 论
２ １ 磁 性 微 球 ．
利用 透射 电镜 对磁性 微球 形 貌进 行 表 征 ， 果 见 图 １ 结 ．可 以看 出 磁性 微 球具 有 良好 的单 分散 性 ，
粒径尺寸约为（０ ± ８ ｎｌ 与动态水合尺寸相一致 ， ４ ２ １ ） ｎ， 从图 １ 插图的放大照片可以看出， 磁性纳米粒 子与聚苯 乙烯 能很 好地 复合 在一 起．而微球 之 间未 发生相 互 聚集 ，制备 的磁性 微球 水溶 液 可以稳 定放 置 １ 而不出现沉淀 ， ０５Ｔ的外加磁场条件下 ， ０ｒｎ就可以将全部磁性微球分离出来． ２ｈ 在 ． ３ ｉ ａ ２ ２ 免疫磁 性微球 ． ． ＩＧ类 蛋 白分 子的等 电点大 都在 ５— ｇ ８之 间 ，因此 部分 ＩＧ￣ ｇ＇ Ｅ体在 中性 条件 下 ， 白质表 面带 有负 蛋
微球置 于去离 子水 中保 存 ， 取适 量样 品进行 Ｔ Ｍ 表征 ． Ｅ
１３ 免疫磁球 的制 备 ．
利用 在碱性 条件下 ＦＴ ＩＣ的碳 酰胺键 可与抗 体赖氨 酸 的 氨基 共价 结合 的 特点 ， 备标 记有 ＦＴ 制 ＩＣ 的羊抗兔 ＩＧ抗 体 ．利用激 光 动态 光 散 射 扫描 仪 对 自制 的磁 性 微 球进 行 粒 径 和 表 面 电位 的 表征 ．取 ｇ ２０Ｉ 磁性微 球 与 ５ ｇ标记 有 ＦＴ ０ ｇ ｘ ０ ＩＣ的羊抗兔 ＩＧ抗 体分散 在 １ｍ Ｐ Ｓ溶液 中， 常温混合 振荡 ｇ Ｌ１× Ｂ 于
品．首先 ， 各取 ２ ０ Ｉ 免疫 磁球 １和 Ｄ ｎｂ ａ ｓ 品分别 加入 至 １ｍ ０ ｇ ｘ ｙ ａ ｅｄ 产 Ｌ浓 度 为 ｌ ０和 １ ｆ／ Ｌ的沙 门 ０ ｃｕ ｍ
氏菌溶液 中 ，常温混合 ３ ｉ，磁分 离后 用微 生物平 板计数 法对 ４个 不 同样 品的上 清液 和磁 分 离液进 ０ｍｎ 行菌 落计数 ，同时对原始 的沙 门 氏菌 液对 照样 品计 数 ．参 考 Ｄｎｂａｓ 明 书提 供 的磁 分 离条 件 ，降 ｙａｅｄ 说 低免疫 磁球 的浓度 ， 各取 ５ ｇ的免疫磁 球 １和 Ｄ ｎｂａｓ 品分别 加入 至 １ｍ ０ ｙａｅｄ 产 Ｌ浓 度为 １ ０和 １ ｆ ０ｅ／ ｕ ｍ Ｌ的沙 门氏菌溶液 中 ， 温混合 ３ ｉ， 常 ０ｍｎ 磁分 离后用 微生 物平板 计数法对 ４个不 同样品 的上 清液进 行 菌落计数 ，同时对 原始 的沙 门氏菌 液对 照样 品计 数并计 算 出磁分离 效率．
光光谱 和酶联免疫（ ＬＳ 等方法研究了抗体在磁性微球表面的吸附行为．在 沙门氏菌磁分离实验中 ， Ｅ ＩＡ） 通过 调节投料抗体的浓度 ， 研究 了免疫磁球表面抗体浓度和 磁分离效率 的相关性 ，与微米级 商品化免疫磁球 相 比， 亚微米级 的免疫磁球表现出了更高的磁分离效率 ． 关键词 亚微米 ； 免疫磁球 ； 沙门 氏菌 ； 磁分离效率
牛 牧 杜 美红 ， ，邓 奕 ，高明远
（ ．中 国科 学 院化 学 研究 所 ， 京 １０ ９ ； ．北 京 市 理 化 分 析测 试 中心 ， 京 １０ ８ ） １ 北 ０ １０ ２ 北 ００ ９
摘要
以亚微米级的单分散磁性微球为基础 ， 制备 了表面包覆沙 门氏菌抗体的免疫磁球．利用表 面电位 、 荧
取 ２０ｉ 磁性 微球 ， ０ ｇ ， ｚ 用无菌 去离子水 清洗 ３次 ， 散在 １ｍ Ｐ Ｓ溶液 中 ， 分 Ｌ１× Ｂ 分别 加入 ５ ， ０ ５ ０ ｌ， 和 ０５Ｉ ． ｇ沙 门氏菌多克 隆 ＩＧ抗体 ， ｘ ｇ 常温 振荡混 合 ２ｈ 磁分 离 ， 洗．将制 备的磁 性微球用 质量 分数 ， 清 为 １ 的 Ｂ Ａ溶液封 闭得到 免疫磁性 微球 ， 次记 为免疫磁 球 １～ ．然后 ， Ｅ ＩＡ法标 定免 疫磁 球 ％ Ｓ 依 ４ 用 ＬＳ 表面的抗体含量． 将得到的表面具有不同抗体量的免疫磁性微球与浓度为 １ ｆ ｍ ０ ｃ ／ Ｌ的沙门氏菌液混 ｕ 合， 常温 轻微振 荡 ３ ｉ ， ０ｒｎ后 磁分离 ．最后 ， ａ 用微 生物 平板计数 法对 ４个样 品的上清 液进行 菌落计数 ， 同时对原始 的沙 门氏菌液对 照样 品计数 并计算 出磁分 离效 率． 为 了考 察免疫 磁球粒 径对磁 分离效 率 的影 响 ，选 择粒径 更 大 的商 品化产 品 Ｄ ｎｂａｓ ｙａｅｄ 作为 对 照样
均为去 离子水 ．
Ｍｏｅ６０型酶标仪 （ Ｉ －Ａ ｄｌ ８ ＢＯＲ Ｄ公 司 ， 国 ） Ｃ ｒ ｃｉｓ 美 ； ａ Ｅ ｌ ｅ型荧 光 分 光光 度 计 （ Ａ ＩＮ公 司 ，美 ｙ ｐ Ｖ ＲＡ
国 ） Ｊ Ｍ一 ０ Ｘ Ｉ透射 电子显微 镜 （ ；Ｅ １ Ｃ ０ Ｉ 日本 ） ．
２ｈ后 ，进行 磁分 离 ，得 到上 清液 １ 然 后再 将制 得 的免疫 磁球 分散 在 １ｍＬＰ Ｓ缓 冲液 中 ，常温 振 荡 ； Ｂ ２ｈ ， Ａ 进行 磁分 离 ， 到上清 液 ２ 重 复这一 过 程 ，得 到 上清 液 ３ 得 ； ．测 定上 清液 １～３的荧 光 光谱 ．同 时， 对清洗 ３次后 得到 的免疫磁 球粒 径和表 面 电位 进行表 征．用未标 记 ＦＴ ＩＣ的抗 体重 复上述 实验 ， 将 得到 的上清液 用酶联 免疫 （ ＬＳ 法再 次测定 各个上 清液 中的抗体 浓度 ． Ｅ ＩＡ）
０４ ６８ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０５ －７ ０ ２ １ ）２ ３２ ５ ２ １ ９ （０ １ ０ － ２ － ０ ０ ０ 中 图分 类号
免 疫磁性 微球是指 表 面包 覆抗体 的磁性微 球 ， 可与含 有相 应抗 原 的靶 物质 特异 性地 结合 ．通 过在 磁性复 合微球 表面偶联 或者 吸附上特定 抗体 ， 形成 免疫磁性 微球 ＿ ．２ ｌ ０世纪 ８ 代 ， ｇｌ ａ ＿ ｊ ０年 Ｕｅｔ ｓ ｄ等 ２ Ｊ 利用 “ 活溶胀 ” 激 法成功制 备 了单 分 散 的磁性 微 球 ，并 在磁 性 微球 表 面 连接 上 抗 体制 备 出免 疫 磁性 微 球， 在细胞 分离领域 取得 了 良好 的分 离效果 ．随着 以此 技 术为 基础 制 备 的商 品化 产 品 Ｄ ｎｂａｓ ｙａｅｄ 种类 的不断 丰富 ，近年来 免疫磁 性微球在 核酸分 析 、蛋 白质分 离 和纯化 以及 靶 向药 物载体 等 领域都 得 到 了
收稿 １期 ： ０ ０１ －１ ３ ２ １—１ ． ０
基金项 目： 国家卫生部重大专项 （ 批准号 ： ０ ８ Ｘ ００ －１ ） 中国科学院知识创新工程 （ ２０ Ｚ １０ １０４ 和 批准号 ： Ｊ Ｘ ｗ— ５ 资助 Ｋ Ｃ ２Ｙ Ｍ１ ） 联系人简介 ：高明远 ，男，博士，研究员 ，博士生导师 ，主要从事无 机纳米材料的制备及其生物应用研究．
不足 以抵 消重力作 用 的影 响 ，因而在 体系 中容易沉淀 ，不利 于免疫 识 别 和捕 获过 程 ， 是 能够 快速 磁 但
分 离的优 势使得微米 级免疫 磁球得 到 了广 泛应用 ¨ ．针对 目前微 米级免疫 磁球存 在 的问题 ， 如果 能够
将免 疫磁球 的粒径减 小到亚微 米级 ， 不仅 有助 于提高其胶 体稳 定性 ，而且 随着 其 比表 面积 的增 大有利 于提 高反应 活性．但是 ， 磁分离 过程是 外加磁 场克服 微球 之 间相互 斥力 的过程 ， 体 稳定 性 的提 高 意 胶 味着 微球之 问的相互 排斥力增 强 ， 在一定程 度上会 降低 微球 的磁 响应性 ．为 了解决 这 一 问题 ， 课题 本 组通 过前期 的研究工 作 ， 功地制 备 了具 有 良好胶 体稳定 性与磁 响应性 的亚微 米级磁性 微球 ， 在 成 并
１ ２ 磁性 微球 的制备 ．
参考文 献 ［７ 方 法 ， １８ｍ １］ 将 ． Ｌ苯 乙烯单体 、 ０ｍ ５ 、 ０ ｇＰ Ｐ ２ Ｌ乙醇和 ３ｍ ９ ｇＶ ０ ３０ｍ Ｖ 、 ５ｍ Ｌ去离 子 水加 入到 ５ Ｌ三颈瓶 中 ， ７ ０ｍ 在 ０℃条 件下进行 聚合 反应 ， 反应 开始 ２ｈ后 ， Ｐ Ｐ包覆 的 Ｆ 将 Ｖ ｅＯ 纳米
Ｅ ｍａ ｌ ｇ ｏ ＠ ｉ ｃ ｓ ａ ｃ — ｉ： ａ ｍｙ ｃ ａ ． ｃ． ｎ
Ｎ ． ｏ２
牛
牧 等 ：亚微 米 级 免 疫磁 球及 其在 细 菌分 离 中的 应 用
３３ ２
鼠Ｉ ｇ Ｇ抗体 （ 北京博奥森生物技术有限公司） 沙门氏菌多克隆 ＩＧ抗体 （ ｍ ／ Ｌ 美 国 Ｋ Ｌ公司） ； ｇ １ ｇｍ ， Ｐ ； 沙 门氏标准菌株 （ ａｍ ｎｌ ｐ ， Ｓ ｌ ｏｅ ａｓ ． 菌株 编号 ： ． ５ ２ ｌ １ １５ ，中国科 学 院微 生物 研 究所 ） ；实验 过 程 中所用 水
电荷 ， 而所制备 的磁性 微球表 面带有 较强 的正 电荷 ，因此 ，某些 ＩＧ可 以通过 静 电作 用 吸附 在微球 表 ｇ
将制备得 到 的免疫磁球 用质 量分数 为 １ 的 Ｂ Ａ溶液 封闭 １ｈ ， Ｒ ２０标 记 的羊抗 鼠 ＩＧ抗 ％ Ｓ 后 与 Ｂ０ ｇ 体混 合 ０５ｈ 磁分 离后 比较 上清 液 中的 Ｒ ２０标 记 的羊 抗 鼠 ＩＧ的荧光 变化． ． ， Ｂ０ ｇ
１４ 免疫磁 球的细菌 分离 实验 ．
广泛应用 ．此外 ， 免疫 磁球在食 品卫生 检测领域 也得 到 了应用 ¨ ， ， 利用 免疫磁 性分 离技 术不 仅 ” 大大缩短 了检测 时间 ， 有助 于提高 检测 的灵 敏度 ’ ． 更 目前 ， 品化的免疫 磁性微 球粒径 通常都是 微米 级 ，从理 论上 讲 ， 米 级免 疫磁 球 之 间的 排斥 力 商 微
５ｍ ， ｎｉｏｅ 司 ） Ｌ Ｉｖｒｇｎ公 ｔ ；牛血清 白蛋 白（ Ｓ Ｓｇ — ｌ ｃ 司） 异 硫氰 酸荧 光素 （ ＩＣ， ３ ５ —０ Ｂ Ａ， ｉ Ａｄ ｈ公 ｍａ ｒ ｉ ； ＦＴ Ｆ ６ １１０
ｍ ， ｉ ａＡｄ ｃ 司 ） ｇ Ｓ ｍ —ｌｒｈ公 ｇ ｉ ；四乙基 罗丹 明（ Ｂ ０ ， ８９４１０ｍ ， ｉ ａＡｄｉ Ｒ ２０ ２３２ —０ ｇ Ｓｇ ．ｌｒｈ公 司 ） ｍ ｃ ；羊抗 兔 和羊抗
Ｖ０． ２ １３
高 等 学 校 化 学 学 报
Ｃ ＭＩ ＡＬ Ｊ ＨＥ Ｃ ＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＩ ＮＥＳ Ｅ ＵＮＩ ＶＥＲ Ｔ Ｅ ＳＩＩ Ｓ
Ｎｏ． ２
３ ２～３ ６ ２ ２
２１ ０ １年 ２月
亚 微 米 级 免 疫 磁 球 及 其 在 细 菌 分 离 中 的 应 用
细菌 分离 的初 步实验 中取得 了 良好 的分离效果 ¨ ． 本 文在前 期研究 工作基础 上 ， 亚微米 级免疫磁 球 的制 备过程 进行详 细研究 ， 一步完 善 了磁 对 进 分离捕 获沙 门氏菌 的相 关工作 ．
１ 实验 部分
１ １ 试 剂与仪 ．
苯 乙烯 （ 北京 化学试剂 公 司） 用前 减压蒸馏 ； 氮二异 丁基脒二 盐酸 盐 （ ５ ，纯度 ９ ％ ， ｉ 使 偶 Ｖ０ ７ Ｓｇ ｍａ Ａｄ ｃ 司 ） 无 水 乙醇和聚 乙烯 基吡 咯烷酮 （ Ｖ Ｋ ０ 等均 为分析 纯试剂 ； ｌｒｈ公 ｉ ； Ｐ Ｐ， ３ ） 参考 文献 ［８ 方法制备 １］ Ｐ Ｐ包覆 Ｆ 纳 米 粒 子 ，粒 径 大 小 约 为 ５８ｎ Ｖ ｅＯ ． ｍ；商 品 化磁 球 Ｄ ｎｂａｓ ａｔＳｌｏｅａ 规 格 为 ｙａｅｄ＠ ｎｉ ａｍ ｎｌ （ ． ｌ
２ 结果 与讨 论
２ １ 磁 性 微 球 ．
利用 透射 电镜 对磁性 微球 形 貌进 行 表 征 ， 果 见 图 １ 结 ．可 以看 出 磁性 微 球具 有 良好 的单 分散 性 ，
粒径尺寸约为（０ ± ８ ｎｌ 与动态水合尺寸相一致 ， ４ ２ １ ） ｎ， 从图 １ 插图的放大照片可以看出， 磁性纳米粒 子与聚苯 乙烯 能很 好地 复合 在一 起．而微球 之 间未 发生相 互 聚集 ，制备 的磁性 微球 水溶 液 可以稳 定放 置 １ 而不出现沉淀 ， ０５Ｔ的外加磁场条件下 ， ０ｒｎ就可以将全部磁性微球分离出来． ２ｈ 在 ． ３ ｉ ａ ２ ２ 免疫磁 性微球 ． ． ＩＧ类 蛋 白分 子的等 电点大 都在 ５— ｇ ８之 间 ，因此 部分 ＩＧ￣ ｇ＇ Ｅ体在 中性 条件 下 ， 白质表 面带 有负 蛋