土壤DNA的提取方法
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1直接法提取DNA
直接法提取DNA的步骤如下：
1)取1 g土样，倒入灭菌的50mL离心管中；
2)加入10 mL TENPP缓冲液(20 mmol/L EDTA, 50 mmol/L Tris, 1% PVPP, 100 mmol/L NaCl,pH 10.0)用振荡仪振荡数分钟，使土样悬浮并充分混匀；
3)10 000 r/min离心5 min，弃上清，重复洗涤3-5次，至上清基本无色；
4)加入 5 mL PBS缓冲液(2.7 mmol/L KCl, 100 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KH2PO4,10 mmol/L Na2HPO4, pH 7.4)漂洗，10 000 r/min离心5 min，弃上清，；
5)加入13.5 mL DNA提取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3PO4, 1.5 M NaCl, 1%CTAB, pH 8.0)，混匀后液氮反复冻溶3次，加入100 μL蛋白酶K(25 mg/mL)和200 μL溶菌酶(50 mg/mL, pH 8. 0)，37℃水浴30 min，期间颠倒混匀3次；
6)加入2 mL 20% SDS，65℃水浴2 h，期间颠倒混匀5-6次；
7)8 000 r/min室温15 min，取上清至新管；
8)用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提，吸出水层，加入0.6倍体积的异丙醇，4℃沉淀1 h或更长；
9)11 000 r/min 4℃离心20 min，沉淀DNA；
10)去上清，用70%乙醇漂洗，11 000 r/min 4℃离心5 min，并重复漂洗1次，置于超净工作台吹干；
11)干燥后，用100 μL ddH2O(含RNAse 20 mg/mL)溶解，转入1.5 mL离心管，37℃放置30 min，置于-20℃冰箱中保存。
2间接法提DNA
间接法提取土壤DNA所用介质为Nycodenz，密度梯度离心，步骤如下：
1) 称取1 g土样，倒入已灭菌的50 mL离心管中；
2) 加入15 mL预冷无菌蒸馏水，并涡旋混匀；
3) 将10 mL Nycodenz(8 g Nycodenz溶于10 mL灭菌蒸馏水，稍加热便于溶解)小心泵入土壤悬浮液底部，4℃，11 000 r/min离心30 min；
4) 小心收集在下层Nycodenz-土壤颗粒与上层水层分界面显白色的微生物细胞层(吸到上层水层对结果没有影响)至新管；
5) 提取DNA按照1.2.1直接法提取DNA第5-11个步骤。