蛋白质表达最优条件的摸索

以下是我们的做法，供你参考（已经成功表达多个基因）：
1.挑单克隆放入离心管中37度摇过夜（5ml左右即可）
２.过夜菌液按１：１００稀释继续摇到对数中期（测ＯＤ值）
３.加ＩＰＴＧ诱导３－４小时
４.收集菌体，电泳．

其中第一步用试管即可，以下的步骤建议你用锥形瓶或烧瓶，具体用多大的瓶原则上按照：所摇的液体不超过瓶体积的２０％，即１０００ＭＬ的烧瓶别超过２００ＭＬ．摇床转速一般在２００转／分以上最好．

具体到条件的优化，最主要的是诱导时的温度（第３步），他关系到可溶性表达比例的高低，ＩＰＴＧ的浓度影响不是太大，因为你现在不表达，建议你用一个ＩＰＴＧ浓度（０.２－０.６都行）实验就行了，先确定到底表不表达，再考虑优化条件．
当然，每个基因不同所需的表达条件也不同，最终需要你自己摸索．
ＧＯＯＤ　ＬＵＣＫ！

1诱导时的菌提浓度对他的表达量影响可能很大,,,,反正在我的实验中是这样的
2.你可以看一下在诱导前后细菌的军体蛋白在电泳图上有无变化,,我觉得在这种图上可以大概判定基因是否转录,,也就是说估计一下是在转录还是翻译水平上出现了问题..或者是蛋白在翻译后是否被降解....
还有设对照看加诱导剂后细菌的生长情况.等

总之我觉得应该将各种现象观察仔细综合分析..应该是能发现一些迹象的

还有,,你的氧含量明显太低,,,这也是一个对表达影响很大的因素哟..我在做一个lac启动子表达时只要容氧量低于70%,,,转束低于180 温度低于35.5就无表达

不好意思，我想问一下。如果空载体的表达情况很好，可是融合蛋白就是不表达，会不会也跟菌有关呢
如果是那样，说明细菌没问题，可能是：
1. 融合蛋白基因序列有问题，测序鉴定；
2. 表达蛋白对载体细菌有毒性，可通过用加葡萄糖的LB来鉴定，具体方法就不写了，搜搜园子里一大堆关于表达蛋白毒性及解决方法的帖子；
3. 换一下表达条件，摸个梯度，包括IPTG，表达时间等等。
有问题可以在这里发帖子或者PM我。Good Luck！

我认为你可以自己试着摸索一下你蛋白的最优化条件，因为不同的蛋白的表达条件都是不一样的。下面说一下我的蛋白（表达菌BL21）的表达条件：
1，将转化后的平板中挑单个菌落，放3ml培养液中37度摇过夜。
2，按1：100取50ul加入到五支分别盛有5ml培养基的试管中，摇至OD值为600，然后分别加IPTG至终浓度分别为0.2，0.6，0.8，1.0，1.2，摇菌4小时，然后分别跑胶看表达量。
3，然后按IPTG最优化条件，再分别按1：10，1：50，1：100，1：150，1：200，然后摇菌4小时，然后跑胶看

表达量。
4，按IPTG和取菌量最优化条件分别加IPTG分别摇1小时，2小时，3小时，4小时，5小时，分别跑胶看表达量。
经过这几个步骤你就能综合出，你蛋白表达的最优化条件，大概需要三四天的时间吧。