植物线粒体蛋白提取方法
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
wenku.baidu.com
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头
● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器
● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项: 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
1. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 1g 植物组织样本剪碎①,采用以下一种方法 处理: i. 加入 3ml 提取液后用匀浆机/Dounce 匀浆器匀浆。
ii.置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入 3ml 冷的提取液 。 iii.加入 3ml 提取液直接置冰上研磨。 2. 将匀浆用 250 目细胞筛或 3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在 4℃,100×g 力条件 下离心 1 分钟,收集上清,弃沉淀。 3. 将滤液 700g 离心 10 分钟,取上清。 4. 将上清 11000g 离心 20 分钟。 5. 弃上清,留沉淀。 6. 每 200ul 蛋白提取液 B 中加入 1ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀。用 200-400ul 蛋 白提取液 B 重悬沉淀,在 4℃条件下振荡 20 分钟,至无明显沉淀。 7. 在 4℃,14000g 条件下离心 15 分钟。 8. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到线粒体蛋白。 9. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
植物线粒体蛋白提取方法
产品组成:
产品组成 规格
线粒体提取液 A 线粒体蛋白提取液 B 蛋白酶抑制剂混合物
BB-3172-1 50T 200ml 20ml 100ul
BB-3172-2 100T 400ml 40ml 200ul
储存条件: 2-8℃保存。
有效期: 一年。
注意事项: ● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管 底,避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介: 线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、
糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成 ATP,供给细胞生理活动之需。 对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即 可在 1 小时内提取得到线粒体蛋白。
注:
①����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头
● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器
● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项: 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
1. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 1g 植物组织样本剪碎①,采用以下一种方法 处理: i. 加入 3ml 提取液后用匀浆机/Dounce 匀浆器匀浆。
ii.置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入 3ml 冷的提取液 。 iii.加入 3ml 提取液直接置冰上研磨。 2. 将匀浆用 250 目细胞筛或 3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在 4℃,100×g 力条件 下离心 1 分钟,收集上清,弃沉淀。 3. 将滤液 700g 离心 10 分钟,取上清。 4. 将上清 11000g 离心 20 分钟。 5. 弃上清,留沉淀。 6. 每 200ul 蛋白提取液 B 中加入 1ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀。用 200-400ul 蛋 白提取液 B 重悬沉淀,在 4℃条件下振荡 20 分钟,至无明显沉淀。 7. 在 4℃,14000g 条件下离心 15 分钟。 8. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到线粒体蛋白。 9. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
植物线粒体蛋白提取方法
产品组成:
产品组成 规格
线粒体提取液 A 线粒体蛋白提取液 B 蛋白酶抑制剂混合物
BB-3172-1 50T 200ml 20ml 100ul
BB-3172-2 100T 400ml 40ml 200ul
储存条件: 2-8℃保存。
有效期: 一年。
注意事项: ● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管 底,避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介: 线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、
糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成 ATP,供给细胞生理活动之需。 对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即 可在 1 小时内提取得到线粒体蛋白。
注:
①����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������