T细胞检测技术

2、分子生物学检测
（1）Realtime-PCR （2）分子杂交
三、T细胞介导的细胞毒实验
特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别靶细 胞表面特异性抗原，通过Fas途径及颗粒酶途径， 介导靶细胞溶解。
1、51Cr释放实验
铬酸钠（Na251CrO4）中的六价铬能被活 细胞摄取，并在细胞溶解后以三价铬的形 式被释放。
参知政事范仲淹等人遭谗离职，欧阳修上书替他们分辩，被贬到滁州做了两年知州。到任以后，他内心抑郁，但还能发挥“宽简而不扰”的作风，取得了某些政绩。《醉翁亭记》就是在这个时期写就的。目标导学二：朗读文章，通文顺字1．初读文章，结合工具书梳理文章字词。2．朗读文章，划分文章节奏，标出节奏划分有疑难的语句。节奏划分示例
谢谢
11 醉翁亭记
1．反复朗读并背诵课文，培养文言语感。
2．结合注释疏通文义，了解文本内容，掌握文本写作思路。
3．把握文章的艺术特色，理解虚词在文中的作用。
4．体会作者的思想感情，理解作者的政治理想。一、导入新课范仲淹因参与改革被贬，于庆历六年写下《岳阳楼记》，寄托自己“先天下之忧而忧，后天下之乐而乐”的政治理想。实际上，这次改革，受到贬谪的除了范仲淹和滕子京之外，还有范仲淹改革的另一位支持者——北宋大文学家、史学家欧阳修。他于庆历五年被贬谪到滁州，也就是今天的安徽省滁州市。也
方法学评价 优点：简便，快速，敏感 缺点：成本高，受HLA型别的限制
2、表面标志CD107a/b的检测
CD107a/b表达于T细胞内的质膜上，随着脱颗 粒作用，一过性表达于细胞表面；T细胞表面 CD107a/b的检测可反应T细胞的溶解靶细胞效应。
方法学评价 优点：简便，快速，敏感，不受HLA型别的限制 缺点：脱颗粒作用的非特异性
SI

试验孔cpຫໍສະໝຸດ Baidu(A490nm )均值 对照孔cpm(A490nm )均值
优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
（3）CFSE（PKH26等）染色法
原理：
CFSE等染料可连结到细胞内蛋白的氨基酸群 （PKH26能插入脂膜），并随细胞分裂而分配到子 代细胞中，每分裂一次，荧光强度减少一倍。
西)人，因吉州原属庐陵郡，因此他又以“庐陵欧阳修”自居。谥号文忠，世称欧阳文忠公。北宋政治家、文学家、史学家，与韩愈、柳宗元、王安石、苏洵、苏轼、苏辙、曾巩合称“唐宋八大家”。后人又将其与韩愈、柳宗元和苏轼合称“千古文章四大家”。
关于“醉翁”与“六一居士”：初谪滁山，自号醉翁。既老而衰且病，将退休于颍水之上，则又更号六一居士。客有问曰：“六一何谓也？”居士曰：“吾家藏书一万卷，集录三代以来金石遗文一千卷，有琴一张，有棋一局，而常置酒一壶。”客曰：“是为五一尔，奈何？”居士曰：“以吾一翁，老于此五物之间，岂不为六一乎？”写作背景：宋仁宗庆历五年(1045年)，
抗原特异性精确； （3）ICS：可同时检测产生细胞因子的细胞表
型；需要样本量大于ELISPOT，破膜后的细 胞不能做进一步功能检测；
方法学评价
优点：简单，适用性广，应用特异的单克隆抗体， 可检测单一细胞因子的含量； 缺点：无法反应细胞因子的生物活性；不同单克 隆抗体检测的结果不同；敏感性稍差（100pg）
是在此期间，欧阳修在滁州留下了不逊于《岳阳楼记》的千古名篇——《醉翁亭记》。接下来就让我们一起来学习这篇课文吧！【教学提示】结合前文教学，有利于学生把握本文写作背景，进而加深学生对作品含义的理解。二、教学新课目标导学一：认识作者，了解作品背景作者简介：欧阳修(1007—1072)，字永叔，自号醉翁，晚年又号“六一居士”。吉州永丰(今属江
• 方法学评价 优点：操作简单；重复性强；安全； 缺点：CFSE可能干扰细胞增殖
二、T细胞分泌功能的检测
T细胞经各种丝裂原或特异性抗原刺激后, 分泌的各种细胞因子,可借助免疫学、细胞 生物学及分子生物学技术分别检测细胞因 子含量、生物学活性或基因表达水平，从 而间接反映T细胞功能。
1、生物活性检测
T细胞检测技术
机体接受外来抗原及自身抗原刺激后， 通过细胞免疫和体液免疫及相关系统协同 作用，对抗原产生应答。
T 细胞应答： • T细胞增殖 • 分泌细胞因子 • 细胞毒效应 • 表达特定表面标志
一、淋巴细胞增殖实验
1、原理
淋巴细胞
刺激物
DNA合成 母细胞
分化
细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松
• 对于依赖于该细胞因子而增殖的细胞， 细胞增殖程度与细胞因子含量呈正相关。
• 方法学评价 优点：敏感（pg）；显示细胞因子的活性； 缺点：影响因素多（同一细胞分泌多种细胞因子， 多种细胞因子呈现相同功能，细胞因子及其相应受 体同时分泌）；
2、免疫学检测
（1）ELISA: 操作简单，非特异性影响大； （2）ELISPOT: 高度的敏感性，可重复性强，
• 方法学评价 优点：灵敏、特异，是CTL活性测定的经典方法； 缺点：操作繁琐；放射性；靶细胞51Cr自发释放；
2、IC Assay（In vivo cytotoxicity Assay）
表达特定抗原的肿瘤细胞系经CFSE标记后， 皮下注射入小鼠，被小鼠体内抗原特异性CTL作用 24小时后，取出肿瘤细胞，检测其CFSE含量。
2、检测方法 （1）形态学检测
转化率
转化的淋巴细胞数
100%
转化和未转化的淋巴细 胞数
方法学评价
优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能 观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受
主观因素影响，重复性和准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法（MTT法） PHA 淋巴细胞（54h） 3HTdR掺入 （MTT被还原） 收集细胞，检测β射线（490nm吸光度）
方法学评价 优点：反应体内杀伤效果； 缺点：影响因素多；
四、T细胞表面标志的检测
特异性T淋巴细胞活化需要第一信号和第二信号。 因此检测CTL表面特异性受体或相关的表面标志可 以反映CTL的活化状态。
1、Tetramer技术
模拟T细胞活化的第一信号，构建荧光标记的 MHC-肽复合物，被特异性T细胞识别。通过检测 标记的荧光，反应活化的特异性T细胞。