(完整word版)检定菌管理规程
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检定菌管理规程
1目的:
规范药品微生物学检定用菌的管理,确保检定菌正确发放、使用,销毁。
2范围:
适用于检验用菌种的管理,包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁。
3职责:
检定菌保管、使用人员及各有关部门对本规程的实施负责。
4参考文献:
4.1《药品生产质量管理规范》(2010年修订)
4.2《中国药典》(2015年版四部)
5定义:
5.1检定菌:是指微生物测定和其它检查用的标准菌种。
5.2标准菌株:来自认可的国内或国外菌种保藏机构。
5.3标准贮备菌株:标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后,分装于
菌种冻存管,采用低温冷冻干燥、液态贮存、超低温冷冻(低于-30℃)
等方法保存。
5.4工作菌株:采用标准贮备菌株制备转种或实验用的菌株。
6规程
6.1检定菌的申购:检定菌由质量管理部根据使用情况(包括临时检验需要),
列出计划,相关领导审批。
6.2由采购部向中检所菌种保藏中心或省(市)药检所购买冻干菌(标准菌
种),或直接向省(市)药检所购买传代用菌种,购买时,需询问与确定
菌种的代数,以便传代时控制代数。
6.3标准菌株的接收
6.3.1对新购进的标准菌株应仔细核对菌种标签、包装完整性及随菌种附有
的说明书。
6.3.2包装破损的应彻底进行消毒、灭菌处理,使其不得污染其它物品。
6.3.3符合要求的,应点清数量,同时将检定菌的所有信息,填写《检定菌
接收、使用、销毁记录》。
6.4检定菌的保存
6.4.1购买的标准菌株直接存放于2-8℃冰箱保存。
6.4.2工作菌种的保存:工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适
宜的固体斜面培养基上,待菌生长充分以后,转移至2~8℃冰箱中
保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存,菌种保存人员应定期检查
其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,应经灭活处理后销毁。
6.4.3标准贮备菌株的保存:采用甘油冷冻管保藏法。
6.4.4菌种保存应贴菌种标签。
6.5标准贮备菌株的制备(复苏、保藏)
6.5.1菌珠的复苏
6.5.1.1将标准菌株冻干管从冰箱中取出,放至室温后使用。
6.5.1.2菌珠在打开前仔细核对标签上的内容,注意一株菌株使用一套
用具,严防交叉污染。
6.5.1.3应参照标准菌株复苏说明书进行菌种复苏。用适宜的方法打开
标准菌株的安瓿瓶。
6.5.1.4取少量适宜的液体培养基加至菌种管内,轻轻振摇使冻干菌块
溶解。
6.5.1.5随即吸出管内菌液,接种划线到琼脂培养基上或接种到液体培
养基中,在规定的温度和时间下培养,使菌种得以复苏。
6.5.2标准贮备菌株的保藏
6.5.2.1将复苏后的培养物转种至液体培养基内,在适宜的温度和时间
下进行培养。
6.5.2.2取培养好的菌悬液与甘油1:1比例进行混合,振摇均匀,用冻
存管进行分装,按工作需要每种菌种分装成若干支。
6.5.2.3置冰箱超低温冷冻(低于-30℃)保存,作为标准贮备菌株。
6.5.2.4在冷冻管外贴上《检定菌标签》并及时在《检定菌接收、使用、
销毁记录》上登记。
6.6工作菌株的制备
6.6.1甘油冻存管标准贮备菌株制备工作菌株
从冰箱取出冻存管标准贮备菌株移入生物安全柜内,在室温放置20
分钟后,将冻存管内的菌液接入适宜的液体培养基或琼脂培养基上,
在规定的温度和时间下进行培养,作为工作菌株。
6.6.2工作菌株的传代
从冰箱中取出传代用斜面工作菌株,用无菌接种环挑取适量培养物接
种至适宜的液体培养基或琼脂培养基上,在规定的温度和时间下进行
培养,作为下一代工作菌株。
6.6.3所有新制备的菌种管外均应贴上标签,并及时填写《检定菌传代记录
书》。
6.7检定菌的编号
6.7.1从中国食品药品检定研究院购买的CMCC系列冻干粉标准菌株为0
代菌株,其菌种编号为标准菌株标签上编号,如0代金黄色葡萄球菌
标准菌种编号为“26003-4a”。
6.7.2将上述0代标准菌株转种至适宜的培养基上为复苏,复苏得到的菌种
为第1代菌种。其编号为:0代标准菌株编号+复苏日期,如
“26003-4a-170520”表示由第0代编号为“26003-4a”的金黄色葡
萄球菌标准菌株,于2017.05.20复苏得到的第1代菌种。
6.7.3第1代复苏后的菌种转种至液体培养基制成第2代菌种为标准贮备菌
株,用甘油冻存管保存。其编号为:第1代复苏后的菌株编号+G流
水号(分装支数)。如“26003-4a-170520-G1”表示由编号为
“26003-4a-170520”的第1代菌种传代分装的第1只金黄色葡萄球
菌甘油冻存管标准贮备菌株。
6.7.4从第2代标准贮备菌株转种至琼脂培养基上制成第3代工作菌株,其
编号为:标准贮备菌株+A流水号(传代支数);从第2代标准贮备
菌株转种至液体培养基上制成第3代工作菌株,其编号为:标准贮备
菌株+B流水号(传代支数)。
6.7.5可挑选斜面工作菌种长势较好的一只,在其菌种编号前特殊标记,作
为传代用斜面工作菌种制备下一代工作菌种;第4代;第5代工作菌
种的编号规则均遵循6.7.4编号规则。
6.8检定菌的传代、使用