生物化学 第二章 蛋白质化学
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第二节 肽
肽是氨基酸通过肽键连接在一起形成 的化合物。通常把分子量小于10000的 称为肽,而分子量更大的称为蛋白质。
肽键(peptide bond)
氨基末端
氨基酸残基
羧基末端
Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu
几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)
GSH是体内重要的还原剂
• 当我们搬进一个新寝室时,我们会如何 向我们的外校的同学对其进行描述?
当你看到这张图片时, 你怎么向别人描述?
第三节 蛋白质的结构
蛋白质的分子结构包括
一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure)
• 对成人来说,这类氨基酸有8种,包括赖氨 酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、 缬氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。对婴儿来说, 组氨酸和精氨酸也是必需氨基酸。
请记住上述必需氨基酸
• 携(缬)一(异)两(亮)本(苯)单 (蛋)色书(苏)来(赖)——携一两本 单色书来
• 笨蛋来宿舍晾凉鞋
氨基酸参与的化学反应
蛋白质一级结构
一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学 功能的基础。
蛋白质一级结构测定
流程:
确定多肽链的数目 拆开并分离出每条肽链 水解测定肽链的氨基酸组成 测定肽链两末端氨基酸残基 肽链水解为小片段并测序 片段重叠得出整个肽链的序列 确定二硫键的位置
肽链末端分析
• N-末端测定 (1)DNFB法 (2)PTH法
DNFB(dinitrofiuorobenzene)
弱碱中
氨基酸
DNP-AA(黄色)
+ HF
氨基酸与苯异硫氰酯(PITC)的反应 (Edman反应)
+
PITC(phenylisothiocyanate)
弱碱中 (400 C)
(硝基甲烷 400 C) H+
苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA) (pБайду номын сангаасenylisothiohydantion-AA)
一级结构
蛋 primary structure
白 质 二级结构
secondary structure
结
超二级结构
构 supersecondary structure
的
结构域 Structure doman
主
三级结构
要
Tertiary structure
层
次
四级结构
quariernary structure
等电点(概念)
• 氨基酸所带净电荷为零时氨基酸溶液的pH 值称为该氨基酸的等电点(pI)。
侧链基团带有可解离基团的 氨基酸的等电点怎么计算?
pK1=2.19 pKR=4.25 pK2=9.67
必需氨基酸
• 人体(或其它脊椎动物)必不可少,而机 体内又不能合成的,必须从食物中补充的 氨基酸,称必需氨基酸。
第二章 蛋白质化学
第一节 氨基酸
氨基酸的通式
20种氨基酸的结构
两种C原子的标示方法(易混淆)
氨基酸的构型
蛋白质中的氨基酸都是L型
不常见氨基酸
4-羟脯氨酸 5-羟赖氨酸
硒代半胱氨酸 (有时被认为是第21种氨基酸)
氨基酸的性质
氨基酸的两性性质
氨基酸的滴定曲线(甘氨酸为例)
H2O2
2GSH
GSH过氧 化物酶
NADP+
GSH还原酶
2H2O
GSSG
NADPH+H+
谷胱甘肽在体内参与氧化还原过程,作为某些氧化还 原酶的辅因子,或保护巯基酶,或防止过氧化物积累。
2. 多肽类激素及神经肽
• 体内许多激素属寡肽或多肽
由下丘脑分泌,其功能是促进腺垂体释放促甲状腺 素(调节糖代谢)。
(2)化学裂解法
溴化氰(CNBr)只断裂Met羧基参与形成的肽 键。由于大多数蛋白质只含有很少的Met, 因此CNBr断裂产生的肤段不多。
Sample
DNP-Glu
蛋白质的化学合成
DNP-氨基酸
• C-末端测定 (1)肼解法
缺点:Asn,Gln,Cys被破坏,Arg转变为鸟氨酸。
(2)羧肽酶法
羧肽酶能特异水解C末端氨基酸残基,其 中羧肽酶A能释放除Pro,Arg,Lys以外所 有的氨基酸残基,羧肽酶B只能水解以Arg 和Lys为C末端残基的肽链。
• 二硫键的断裂
• 肽链的断裂 (1) 酶裂解法
茚三酮反应
氨基酸与茚三酮水合物共热,可生成 蓝紫色化合物,其最大吸收峰在570nm处。 由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比 关系,因此可作为氨基酸定量分析方法。
氨基酸与茚三酮反应
但脯 氨酸 与茚 三酮 反应 生成 黄色
纸层析法
氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应
(sanger反应)
+