尿液微量蛋白检测的临床意义

转铁蛋白检测临床意义
转铁蛋白和白蛋白一样均属小分子带负电荷蛋白。前者 分子量为77000，直径为3.8nm，后者为66000，分子直径 为3.6nm。虽然转铁蛋白分子量略大于白蛋白，但所带的 负电荷明显小于白蛋白。由于漏出肾小球基底膜的蛋白质 除了要受基底膜网孔大小屏障的影响外，还要受到电荷屏 障的影响。肾小球基底膜上存在大量带负电荷的蛋白，如 硫酸肝素糖蛋白、唾液酸等，可阻止带负电荷的循环蛋白 从肾小球中滤过。糖尿病肾病早期、肾小球基底膜电荷屏 障功能减退早于裂孔大小屏障，故带负电荷少的TF比白蛋 白更容易被肾小球滤过。因此对糖尿病早期肾病的预测， 尿TF比微量白蛋白更敏感。在高血压肾病时，尿TF也可显 著增高。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 反应溶液：pH6.5~8.5，适当浓度 电解质（中和抗原抗体复合物表面电荷， 促进凝聚）、离子强度（大，IC形成 快）；一般常用磷酸盐缓冲液。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二 醇（PEG）、吐温-20等，以PEG6000 最好，浓度一般为3%~4%。浓度过高 可致非特异沉淀。
尿液微量蛋白检测和临床意义
艾 迪 康 医 学 检 验 中 心 蔡晓平
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项目清楚： 项目清楚：
“定性”还是“定 定性”还是“ 定性 量” “五项”还是“六 五项” 五项 还是“ 项” 过敏原 最好能写出单个项目名称！ 最好能写出单个项目名称！
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标本少送： 标本少送：
HPV检测 HPV6-11、HPV16-18需要取 需要取2 HPV检测 ： HPV6-11、HPV16-18需要取2管分 泌物标本 C肽/胰岛素释放试验 ： 需要抽5 需要抽5管血
转铁蛋白检测临床意义
脑脊液TRF的临床意义： 增高可见于吉兰-巴雷综合症、结核性脑膜 炎、神经系统肿瘤、脑出血及慢性缺铁性贫 血。 减少：可见于急慢性中枢神经系统感染、脑 膜白血病及脑肿瘤等。
尿免疫球蛋白G检测临床意义 尿免疫球蛋白 检测临床意义
免疫球蛋白是指具有抗体活性或化学结构上与抗 体相似的球蛋白。根据其重链定区的分子结构与 抗原特异性不同,可分为五类,即IgG、IgA、IgM、 IgE 、 IgD 。 人 血 清 中 以 IgG 含 量 最 多 , 占 血 清 中 Ig75~80%。主要由脾脏和淋巴结中浆细胞合成, 半衰期约23天。它较其他Ig更易透过毛细血管壁, 弥散到组织间隙中。人体任何组织中都有IgG分布。 IgG的分子量为15~17万而正常肾小球滤过膜只允 许分子量<4万的蛋白通过。故血清中IgG不能通过 肾小球滤过,尿液含量甚微。
肾 小 球 滤 过 膜 示 意 图
微量白蛋白检测临床意义
微量清蛋白尿对早期肾损害诊断具有重要意义。实践证 明,单一指标有其局限性。因为早期肾损害不仅是肾小球损 害,有的可以是肾小管功能的受损,也可以是两者同时受损。 正常尿中蛋白质以白蛋白为主，而分子量低于50 000的蛋 白质大部分被肾小管重吸收，而尿中含量极微。健康人尿 中mAlb95%可信限<30mg/24h。当尿中mAlb排出量在 30~300mg/24h或排出率20~200µg/min时，称为微量白蛋 白尿。如排出mAlb>95%可信限，即为早期肾小球损伤。 这类患者处于疾病早期，及时检出进行治疗，可阻断病情 向不可逆蛋白阶段发展，对提高病人今后的生存质量和减 轻社会医疗经济负担具有重大意义。
三、尿免疫球蛋白IgG 尿免疫球蛋白IgG 理化性质： 分子量： 分子量：150000 分子直径：10分子直径：10-50nm PI:5.8PI:5.8-7.2 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收： 肾小管重吸收：少量
四、尿β2微球蛋白 β2微球蛋白 理化性质： 分子量： 分子量：11800 分子直径：3.4分子直径：3.4-3.8nm PI:4.9 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收： 肾小管重吸收：几乎全部
免疫透射比浊法
免疫比浊法测定的注意事项： 免疫比浊法测定的注意事项 1.标本 3.定标 2.试剂 4.线性
尿微量白蛋白检测方法 检测方法： 免疫透射比浊法 原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体（羊 抗人白蛋白抗血清）相结合，形成不溶 性免疫复合物，使反应液产生混浊，其 浊度高低即透光度减少、吸光度增加反 映血清样本中白蛋白的浓度，可由校准 品所作的剂量－相应曲线算出。
微量蛋白检测临床意义
正常肾小球基底膜具有3~4nm的微孔 并带 的微孔,并带 正常肾小球基底膜具有 的微孔 有一层负电荷,即具有孔径屏障和电荷屏障 即具有孔径屏障和电荷屏障,使血浆 有一层负电荷 即具有孔径屏障和电荷屏障 使血浆 中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。 中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。 在正常情况下,肾小球滤液中的小分子蛋白质 在正常情况下 肾小球滤液中的小分子蛋白质 95%~99%可通过肾小管重吸收 因而尿液中蛋 可通过肾小管重吸收,因而尿液中蛋 可通过肾小管重吸收 白质含量很少。正常生理情况下,尿中这些蛋白质 白质含量很少。正常生理情况下 尿中这些蛋白质 含量仅为微克或毫微克水平,在各种致病因子作用 含量仅为微克或毫微克水平 在各种致病因子作用 肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤,使 下,肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤 使 肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤 尿液中蛋白质过高,超过了肾小管的重吸收功能而 尿液中蛋白质过高 超过了肾小管的重吸收功能而 出现蛋白尿。 出现蛋白尿。
主要内容
尿微量白蛋白 尿转铁蛋白 尿IgG 尿β2－微球蛋白 － 尿α1－微球蛋白 尿视黄醇结合蛋白
一、尿微量白蛋白
理化性质： 分子量： 分子量：69000 分子直径： 分子直径：3.6nm PI:4.9 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收： 肾小管重吸收：少量
二、尿转铁蛋白 理化性质： 分子量： 分子量：77000 分子直径： 分子直径：3.8nm PI:5.2 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收： 肾小管重吸收：少量
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 R型抗体以家兔免疫血清为代表， 具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只 在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合 物，大多数动物的免疫血均属此型。 H型抗体以马免疫血清为代表，其 抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原 或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合 物。人和许多大动物的抗血清皆属H。
四、标本保存与运送： 标本保存与运送：
• （1）标本由临床运送至实验室要尽可能 必须分离出血清（ 后运送； 快，必须分离出血清（浆）后运送； • （2）标本运送要注意防止标本外溢、蒸 标本运送要注意防止标本外溢、 发和污染（标本管要盖盖子）； 发和污染（标本管要盖盖子）； • （3）足量。 足量。 每一个标本都是唯一的，不可替代的！ 每一个标本都是唯一的，不可替代的！ 每一个标本都是危险的， 每一个标本都是危险的，具有潜在传染 性！
微量白蛋白检测临床意义
进十年来，mAlb检测方法经过放射 免疫法，酶免疫法和免疫浊度法3个阶 段，已逐渐成熟起来。目前，免疫浊度 测定技术已得到推广。速率散射浊度法 灵敏度，准确度，精密度均较好，但需 用高质量的特种蛋白分析仪。而透射比 浊法则可用于各种自动化分析仪，具有 速度快、省试剂、适于批量检测的优点。
尿β2－微球蛋白检测临床意义 －
尿液中的β2-M不很稳定，酸性尿， 尤其是pH5.2以下时极易分解。测定尿 液β2-M的标本，取得后及时测定或调 节pH6.5～7.0，放冰箱保存。
ห้องสมุดไป่ตู้
尿β2－微球蛋白检测临床意义 －
β2-M测定的临床意义： 1.评价肾小球疾病： ①对肾小球滤过功能，其敏感度显著高于目前常 规应用的血肌酐测定，部分患者的肾小球功能虽 已受损，当血肌酐还不能反映异常时，血β2-M已 显示肾功能的异常。因此，对血肌酐测定处于盲 区而肾小球滤过功能已受损害的患者，测定其尿 中β2-M有利于早期发现肾小球滤过功能异常。 ②对IgA肾病，尤其是肾小球硬化者，即使肾功能 正常，β2-M也增高，可能由于该类疾病的患者体 内免疫反应较强，淋巴细胞被激活，从T和B淋巴 细胞中释放的β2-M增加之故。
免疫透射比浊法
原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体 （羊抗人白蛋白抗血清）相结合，形成 不溶性免疫复合物，使反应液产生混浊， 其浊度高低即透光度减少、吸光度增加 反映血清样本中白蛋白的浓度，可由校 准品所作的浓度－吸光度相应曲线算出。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗原、抗体比例与浊度关系：抗原 过量，出现“带现象”，IC分子小，且 可发生再解离，浊度下降，光散射减少。 抗体过量，IC形成随抗原量增加到抗原 抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但 又必须适量，抗体浓度是测定关键。
尿免疫球蛋白G检测临床意义 尿免疫球蛋白 检测临床意义
实验证明,分子量40万的蛋白,可通过毛细血 管内皮孔,但被基膜阻拦。分子量16万,可通 过内皮孔和基膜,但被足细胞裂孔膜阻拦。 分子量4万,能通过三层滤过膜而进入肾小球 囊。故分子量15~17万IgG,能反映肾小球滤 过膜基膜受损情况。有人检测尿IgG以表示 尿蛋白的选择程度,以反映肾小球滤过膜的 “漏洞”,若尿中IgG含量增高,尿蛋白选择 性差,肾小球滤过膜损害严重,预后差。
转铁蛋白检测临床意义
TRF为中分子蛋白，常作为尿蛋白选择性指数的计算指 标。在急性肾小球肾炎、慢性肾小球肾炎、慢性肾功能不 全等疾病中尿TF均可升高。 血清转铁蛋白的临床意义： 血清TRF浓度受铁离子供应的调节，与血浆中铁离子浓度 呈负相关。测定血清中TRF含量可用于贫血的诊断、疗效 观察、肝病预后判断。TRF也是一种负时相反应蛋白。 增高：常见于缺铁性贫血、妊娠未期、口服避孕药及使用 雌激素等。 减少：常见于严重肝病、营养不良、急慢性炎症、恶性肿 瘤、结缔组织病、肾病综合症、慢性肾功能衰竭、严重烧 伤、胃肠道疾病及再生障碍性贫血等。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗体质量：特异性、效价、亲和力、 抗体质量：特异性、效价、亲和力、 R型抗体 型抗体 高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表 位的空间构型上非常适合，两者结合牢 位的空间构型上非常适合， 不容易解离。反之， 固，不容易解离。反之，低亲和性抗体 与抗原形成的复合物较易解离。 与抗原形成的复合物较易解离。
五、尿α1微球蛋白 α1微球蛋白 理化性质： 分子量：26000分子量：26000-33000 分子直径： 分子直径：3.6nm PI:3.6PI:3.6-4.4 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：99.9％ 肾小管重吸收：99.9％
六、尿视黄醇结合蛋白 理化性质： 分子量： 分子量：21000 分子直径： 分子直径：3.8nm PI:4.4PI:4.4-4.8 肾小球滤过膜： 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：95-99％ 肾小管重吸收：95-99％
尿β2－微球蛋白检测临床意义 －
正常人血清内β2-M浓度相当恒定，0.8～ 2.0mg/L(平均为1.8mg/L)，临界范围是2.0～ 2.4mg/L，2.5mg/L以上为异常。 β2-M容易通过肾 小球滤膜，但几乎全部由近曲小管以胞饮形式摄 取，在局部被代谢降解为氨基酸。正常人每天从 肾小球滤过的β2-M约为340mg，但尿中每天最大 排泄量只有370ug，仅占滤过总量的0.1%。尿中 正常健康人β2-M浓度为0.03～0.37mg/L(或＜ 0.30mg/L或＜0.20mg/gCr)。
尿微量蛋白的检测方法
传统测定微量蛋白的方法有酶联免疫吸附试 验(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其检测精度 较差,操作繁杂。免疫散射比浊法操作简便,测量精 , , , 度较高,结果更准确,但是必须使用特定蛋白分析仪, 仪器和试剂昂贵，给使用带来一定的影响，而透 射比浊法则可用于各种自动化分析仪，具有速度 快、省试剂、适于批量检测的优点为临床上高血 压和糖尿病肾损害的早期诊断提供了一个更为快 速、简便的方法。