血小板聚集试验临床应用

①包膜
磷脂
(TXA2 )、血小板活化因子等
② 提供催化表面（PF3）
静态下血小板形态
②膜下：微管与微丝框架 ③胞浆：血栓收缩蛋白 三种特殊颗粒： -颗粒、致密颗粒、溶酶体 变形 活化
血凝块缩小、加固
血栓形成事件
血小板功能
1.粘附功能（adhesion function）
指血小板具有粘附于血管内皮下胶原及其他
试剂
聚集试剂将诱导血小板发生聚集
二磷酸腺苷(ADP) 肾上腺素(EPN) 胶原蛋白(GOLL) 花生四烯酸(ACA) 瑞斯托霉素(Rist)
【方法】
•在特定的连续搅拌条件下于富含血小板血浆(PRP)(浓度为 200×109/L)中加入诱导剂(肾上腺素、ADP、胶原、瑞斯托霉 素)时，由于血小板发生聚集，悬液的浊度就会发生相应的改 变，比浊时以乏血小板血浆为空白管，光电池将浊度的变化 转换为电讯号的变化，在记录仪上予以记录，根据聚集曲线 可计算出血小板聚集程度和时间 •临床医师根据临床需要选择不同诱导试剂，将提供更多有意 义的临床信息 •建议至少使用2种诱导剂，特别是胶原和花生四烯酸
纤维蛋白网 血凝块 收缩 血栓收缩蛋白
血小板
血清被挤出 血块缩小加固
5．血小板促凝活性
PF3提供凝血因子催化表面
血小板止血功能（小结）
① 维持血管壁的完整性，毛细血管的通透性 ② 粘附、聚集在血管破损处，形成白色血栓 ③ 释放活性物质，促进血小板聚集，增强血管收缩
④ 促进凝血过程
⑤ 血块收缩，形成稳固血栓
血小板聚集检测原理
Platelet Rich Plasma (PRP)
+
Aggregating Reagent
Aggregate Clumping
Baseline Light Transmission
Increased Light Transmission
血小板聚集试验
【结果】 ADP0.5μmol/L时
在缺血性脑血管病的二级预防中以由阿司匹林为主的抗 血小板聚集药物的应用比较广泛 阿司匹林可在6个月内使脑卒中患者的症状有所改善， 并使病死率和卒中复发率降低，建议对急性缺血性脑卒 中患者应尽早给予阿司匹林 但在最佳剂量上尚存争议。对于不能耐受阿司匹林或服 用阿司匹林后仍发生缺血者，可选用其他抗血小板聚集 药物，如噻氯匹啶或氯吡格雷 对高危患者的二级预防可选择两种抗血小板聚集药物联 合应用，如阿司匹林与缓释潘生丁、阿司匹林与氯吡格 雷
血小板糖蛋白Ⅱb/ Ⅲa 受体拮抗剂
血小板在心血管疾病中起着十分重要的作用。血小板 糖蛋白GP Ⅱb/ Ⅲa 受体拮抗剂可抑制血小板凝集过 程中的最后途径,达到抑制血小板凝集的作用 目前临床上使用的GP Ⅱb/ Ⅲa受体拮抗剂有3 类:抗 GP Ⅱb/ Ⅲa 受体单克隆抗体,含KGD 序列的肽类及含RGD 序列的小分子拟肽,即阿昔单抗 (Reo2pro) 、埃替巴肽( Integrilin) 和替罗非班( Tirofiban) ,这3 种均为静脉制剂 抑制各种诱导剂诱导的血小板聚集
粘附与聚集的结果
血小板大量聚集、 粘附于血管破损处 形成白色血栓
暂时止血
3．释放功能 ：(release reaction)
指血小板在诱导剂的作用下，将胞浆内特殊颗粒中的内含
物释放出血小板的反应
-颗粒 · 致密颗粒 · 溶酶体
与血小板粘附、聚集、炎症反应、创伤修复动脉粥样硬化 等作用有关
4．血块收缩功能
血小板的生成
成熟的血小板
血小板由巨细胞生成，呈圆盘状 巨细胞
骨髓
储存和循环中的血小板
33% 储存 67% 循环中
巨细胞
脾
血小板在止血机能中的作用
血小板来自骨髓成熟的巨核细胞
静态下血小板形态
蛋白质 glycoprotein GP 如：GPIa Ib IIb Ⅲa Ⅸ ① 代谢产生花生四烯酸、血栓烷A2
阿司匹林对血小板聚集功能的影响
阿司匹林对血小板环氧化酶有抑制作用，环氧化酶是花生 四烯酸合成前列腺素内过氧化物(PGG2、PGH2)和血栓烷 A2(TXA2) 必需的酶。这些物质,特别是TXA2有强大的促血 小板聚集和收缩血管的作用 当服用阿司匹林后,由于这些物质形成减少,因此血小板不 能聚集，阿司匹林可完全而持久地抑制血小板环氧化酶， 导致花生四烯酸转化为TXA2减少，从而抑制TXA2依赖性血 小板激活作用 阿司匹林除了可抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集反应外 ，尚可抑制胶原和肾上腺素的聚集并部分抑制二磷酸腺苷 的聚集
PRP
典型的双相波
二期反应(Release)
PPP
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
初期反应 lag 试剂加入点
图谱
二磷酸腺苷主要是通过与其受体蛋白相结合而诱导血小板发生聚集反应
通过促进二磷酸腺苷释放及TXA2的生成而产生诱导作用
通过促进二磷酸腺苷释放及TXA2的生成而产生诱导作用
阿司匹林对血小板的影响
Arachidonic acid
Aspirin
CycloOxygenase Endoperoxides Dense Body ADP TxA2 Thromboxane Synthetase
Platelet Aggregation
TxA2 Released
阿司匹林对血小板聚集功能的影响
异物表面的能力
需要物质
GPIb-Ⅸ vWF III型胶原 纤维结合蛋白（Fn）
2.聚集功能（aggregation function）
指活化后的血小板与血小板之间相互连接的特性, 是指血小板之间
互相黏附，也是血小板的一种重要的止血功能。
参加因素
GPIIb/IIIa 纤维蛋白原 钙离子 聚集诱导剂： ADP、肾上腺素、TXA2、花生四烯酸
【注意事项】 一、血小板数 应固定在200×109/L 二、采血前应停服l周下列药品：阿司匹林、潘生丁、肝素、 双香豆素等 三、实验应在3h内完成，过长会降低聚集强度。温度以 15℃～25℃室温为宜，冷环境中可使血小板外形改变及粘 附、聚集能力增加。比浊测定时宜在37℃下进行 四、pH值 pH6.8～8.5可获最佳聚集，低于6.4会使聚集受 抑。抗凝剂EDTA可络合Ca2+，使ADP不能引起血小板聚集， 故应避免使用 五、红细胞混杂、溶血、高脂血症等因素可降低悬液透光度， 因此采血当天禁食高脂食物。操作时应避免混入红细胞
噻氯匹啶和氯吡格雷
主要抑制二磷酸腺苷的聚集
临床应用
心肺搭桥对凝血机制的影响
各种介入治疗措施皆以损伤或撕裂血管内膜为代价， 同时伴有斑块内高度致凝脂质的释放或暴露，激活血 小板和形成凝血酶，血栓形成的过程与不稳定性心绞 痛相类似 支架的置入只是解决机械方面的问题，诸如弹性回 缩，严重内膜撕裂形成的夹层等，对预防血栓闭塞有 利，但并未消除血栓形成的基础，反而由于异物刺激 诱发血小板激活和血栓形成，阿司匹林与抵克立得联 合抗血小板治疗能明显降低支架术后的血管事件，便 是血小板发挥作用的一个最好的例证
血小板聚集率的测定
• 是一种功能性测定,是血小板活化及其释放反应,膜 糖蛋白受体等综合因素的共同表现,是血小板功能 检测的基础 • 在体内血小板参与最初止血机能，在血管受损部位 只要3秒时间产生血小板黏着於受损部位到10秒时 间产生血小板聚集，以达到止血功能
• 除ADP外，胶原纤维、凝血酶、肾上腺素等 也可使血小板发生聚集并诱发血小板释放内 源性ADP.
肺源性心脏病(肺心病)
•慢性肺心病患者长期缺氧和二氧化碳潴留是血小板活 化的主要病理生理因素,缺氧使肺泡巨噬细胞释放血小 板激活因子(PAF),导致血小板胞膜蛋白激酶C(PKC)活性 明显升高,从而激活血小板；二氧化碳潴留使机体内氧 自由基大量增加,后者攻击血小板膜,使钙通道开放,钙 内流增加,激活血小板 •肺细胞内皮损伤等也使血小板激活。血小板激活释放 出多种收缩血管及凝血活性物质,其中血栓素A2(TXA2) 是已知最强的促血小板聚集和血管收缩的物质 •损伤的血管壁反过来又促进循环血小板的活化,由此形 成恶性循环,所以肺心病患者血小板聚集功能升高,临床 上在常规治疗的基础上应辅以抗凝治疗 •用途：监测治疗的效果
血小板聚集试验及其临床应用 （PAgT）
中国医大一院 宋鉴清
正 常 止 血 机 能
两 个 方 面 四 个 因 素
凝血机制 抗凝机制 血管壁（vessel wall） 血小板（platelet） 凝血系统（coagulation system） 抗凝及纤溶系统（anticoagulation
and fibrinolytic）
ADP1.0μmol/L时 肾上腺素0.4μg/ml MAR(最大聚集率) 37.4%±14.3% MAR 62.75±16.1% MAR 67.8%±17.8% MAR 71.7%±16.3%
胶原0.2μg/ml
临床意义
1.血小板聚集性增加见于手术后，糖尿病，急性心肌梗塞，静脉血栓 形成：青紫型先天性心脏病、肺炎、高β-脂蛋白血症，抗体-抗原 复合物反应，肾移植的排异反应，人工心脏瓣膜移植术，多发性硬 化症。口服避孕药，高脂肪食谱、吸烟 2.血小板聚集性降低血小板无力症（Glanzmann病）原发及继发血小 板疾病Bernard-soulier综合症，释放反应异常（贮藏池疾患）， 血管性假性血友病，May-Hegglin异常，Swisscheese病，先天性低 纤维蛋白原血症 3.迁延性及严重肝病，Wilson病、肾病（尿毒症）维生素B12缺乏、 细菌性心内膜炎、抗血小板抗体、术后低纤维蛋白原血症
血小板聚集
•在体外实验血小板聚集功能测试使用多种不同诱导试剂（如ADP、 collagen、epinephrine、ristocetin、和arachidonicacid等）用以 诱导血小板产生聚集，并由精密仪器记录其变化过程 •由血小板聚集功能异常可检测出因聚集功能低下所造成之出血倾向疾 病，或因聚集功能过高所形成血栓，诊断血栓栓塞并发症，如中风， 心梗等疾病的监测，并可提早预防避免发生 •可用於如血小板药物学研究，中西药节选抗血小板药物之测定，研究 中医药活血化瘀机理等
药物对血小板的影响
阿司匹林 噻氯匹定（抵克立得） 氯吡格雷（波立维） 双嘧达莫（潘生丁） 曲克芦丁（维脑路通） 其它（中草药）
•有许多药物能够使血小板功能丧失、而造成出血，最常见的机制为干扰 血小板膜或膜上的受体，使其丧失正常功能 •现在全世界已将Aspirin大量用於心脏病及中风的预防，但在使用 Aspirin的同时，又担心Aspirin所造的负面效果 •目前唯一实际可用於Aspirin药物治疗之监测，就是以Arachidonic Acid-花生四烯酸为诱导剂测其血小板聚集功能是否正常
诊断步骤
• • • • 血小板计数 外周血涂片 血小板聚集 出血时间
•血小板聚集系指血小板之间相互粘着的能力 •血小板膜上存在着ADP特殊受体，ADP可使血小板聚 集 •ADP主要来源于血管损伤部位，发生血小板粘附后的 损伤组织及红细胞释放的ADP，但主要是由血小板释 放内源性ADP可使血小板聚集 •如果血小板释放内源性ADP量不足或不能释放，血小 板就会解聚而恢复正常形态
血小板聚集分析仪应用
一、血小板聚集功能异常 聚集功能低下造成的出血倾向疾病
聚集功能过高所形成的血栓
二、抗血小板药物的监测 三、血小板功能的研究
Leabharlann Baidu
【原理】(比浊法) •血小板粘附后立即发生变形、释放和聚集等一系列的 活化反应；聚集(aggregation)是活化的血小板相互作 用聚集成团的特性 •在特定的连续搅拌条件下，富含血小板血浆中加入致 聚剂时，由于血小板聚集，悬液的浊度发生相应的改变， 光浊度的变化通过仪器转为电讯号的变化，在记录仪上 根据描记曲线即可计算出血小板聚集的程度和速度
双嘧达莫（潘生丁）
长期以来，双嘧达莫作为冠心病、心绞痛的预防和 治疗药物，已为人们所熟知 通过多种机制抑制血小板粘附和聚集 能抑制血小板的粘附性,防止其粘附于血管壁的损 伤部位；抑制血液中的腺苷脱氢酶,减少腺苷分解,并 抑制腺苷再摄取,腺苷含量增加可激活腺苷酸环化酶, 使血小板内cAMP合成增加 抑制磷酸二酯酶,减少cAMP分解；抑制血小板生成 A2(TXA2),并能增加前列腺环素(PGI2)合成与活性,降 低血小板聚集作用。 抑制各种诱导剂诱导的聚集