二氢杨梅素抗菌活性研究
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１ 材料与方法
１．１ 实验材料 １．１．１ 样品 二氢杨梅素： 刘硕谦博士提供。藤茶的
收稿日期： ２００７－ １０－ ０７
＊ 通讯作者
基金项目： 湖南省教育厅研究课题。
作者简介： 萧力争（１９６３—）， 男， 湖南湘潭人， 博士研究生， 副教授， 主要从事茶叶加工、茶及资源植物成分化学研究工作。
１４０ Ｎｏ． ４． ２００８
（ＭＩＣ）不超过 １．７６ ｇ／Ｌ； 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度（ＭＢＣ）分别是 １．７６ ｇ／Ｌ 和 ０．８８ ｇ／
Ｌ， 对链球菌和枯草芽孢杆菌的最低杀菌浓度高于 ３．５２ ｇ／Ｌ； 抑菌活性在 ｐＨ３￣４ 的酸性环境中最强；
二氢杨梅素在一定温度处理后仍具有良好的抑菌效果。
关键词： 食品防腐剂； 二氢杨梅素； 滤纸片法； 试管二倍稀释法； 抑菌活性
杀菌浓度， 重复 ３ 次。 １．２．６ ｐＨ 对二氢杨梅素抑菌活性的影响 将质量浓 度 为 １０．５６ ｇ／Ｌ 二 氢 杨 梅 素 用 氢 氧 化 钠 和 盐 酸 调 成 ６ 个 ｐＨ 梯 度（３￣４、４￣５、５￣６、６￣７、７￣８、８￣９）， 用 上 述 １．２．４ 介绍的方法做抑菌圈的测定， 观察不同 ｐＨ 下二氢杨梅素抑菌效果的变化， 重复 ３ 次。 １．２．７ 温度对二氢杨梅素抑菌活性影响 将二氢杨梅 素用 ７６％乙醇稀释成质量浓度为 １０．５６ ｇ／Ｌ 的药液， 药 液 １２１ ℃处理 １０ ｍｉｎ， 用上述 １．２．４ 介绍的方法观察温 度对二氢杨梅素抑菌活性的影响， 重复 ３ 次。
１２．８
明显
１９．７
明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
啤酒Βιβλιοθήκη Baidu母
１０．５６ １３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
黑曲霉
１０．５６ １３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
１０．５６ 青霉
１３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
注： 表中数据为 ３ 次重复的平均值。
Ｎｏ． ４． ２００８ １４１
提取物与应用
２．２ 二 氢 杨 梅 素 的 最 低 抑 菌 浓 度 （ＭＩＣ）及 杀 菌 浓 度 （ ＭＢＣ ）
表 ２ 二氢杨梅素对供试细菌的最低抑菌浓度
菌种 １
枯草芽孢杆菌 －
试管号
２３
４
５６
－ √ √ √√
大肠杆菌
－
－
－
－
－√
金黄色葡萄球菌 －
－
－
－
－－
链球菌
－
－ √ √ √√
注： “－ ”表示没有细菌生长， ＂√＂ 表示有菌生产。
中图分类号： ＴＳ ２０１．３
文献标志码： Ａ
文章编号： １００５－ ９９８９（２００８）０４－ ０１４０－ ０３
Ｓ ｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ａ ｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａ ｌ ｅ ｆｆｅ ｃｔ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅ ｔｉｎ
ＸＩＡＯ Ｌｉ－ ｚｈｅｎｇ１， ＹＩＮ－ Ｘｉａ１， ＬＩＵ Ｓｕ－ ｃｈｕｎ２＊， ＧＵＯ Ｗｅｉ２
２ 结果与分析
２．１ 二氢杨梅素抑菌活性测定与分析 本研究的结果显示， 不同质量浓度的二氢杨梅
素对供试的霉菌和酵母无明显的抑制作用， 而对各种 供试的细菌， 无论是球菌和杆菌， 革兰阴性菌和革兰 阳性菌， 都有明显的抑制效果， 结果见表 １。
表 １ 二氢杨梅素对供试菌种的抑制效果
供试菌种 样品质量浓度／（ｇ／Ｌ） 抑菌圈直径／ｍｍ 抑制作用
７．０４
１３．１
明显
枯草芽孢 杆菌
１０．５６ １３．２
１６．４
明显
１６．９
明显
０
－
不明显
７．０４
１７．５
明显
大肠杆菌
１０．５６ １３．２
１９
明显
１６．２
明显
０
－
不明显
７．０４
２０．４
明显
金黄色 葡萄球菌
１０．５６ １３．２
１８．７
明显
１９．４
明显
０
－
不明显
７．０４
１６．５
明显
链球菌
１０．５６ １３．２
究 ， 证 实 藤 茶 的 主 要 成 分 为 二 氢 杨 梅 素［８－ １２］。 二 氢 杨 梅素具有很强的氧化能力， 能有效抑制细菌等微生 物的生长［１３－１５］。以往的研究多集中在藤 茶 和 二 氢 杨 梅 素的药理药效等功能方面， 本研究较深入地探讨了 二氢杨梅素对常见的食品腐败菌的抑菌活性及其作 用条件， 旨在探讨藤茶提取物二氢杨梅素作为天然 食品防腐剂的可能性。
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ａ ｇａｉｎｓ ｔ ｆｏｏｄ ｓ ｐｏｉｌａｇｅ ａｎｄ ｆｏｏｄ － ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓ ｔｅｄ ｂｙ ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｕｂｅ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓ ｕｌｔｓ ｓ ｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｌｅ ｉｔ ｈａｄ ｌｅｓ ｓ ｅｆｆｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓ ｔ ｔｈｅ ｍｏｕｌｄ． Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍｕｍ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｄｏｓ ａｇｅ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ａｇａｉｎｓ ｔ ｔｈｅ ｓ ｕｐｐｌｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ １．７６ ｇ／Ｌ． Ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｃｉｄａｌ ｄｏｓ ａｇｅ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ ： ｅｓ ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ １．７６ ｇ／Ｌ， ｓ ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ０．８８ ｇ／Ｌ， ｓ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｄ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ ｕｂｔｉｌｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ３．５２ ｇ／Ｌ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｂｅｓ ｔ ｉｎ ｐＨ３ ￣４． Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｓ ｔａｂｉｌｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｃｅｒｔａｉｎ ｈｅａｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｆｏｏｄｓ ｔｕｆｆ ａｎｔｉｓ ｅｐｔｉｃ； ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ； ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ； ｔｕｂｅ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ； ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ
（１．Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａ ｎｄ Ｌａ ｎｄｓ ｃａ ｐｅ ， Ｈｕｎａ ｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｃｈａ ｎｇｓ ｈａ ４１０１２８； ２．Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓ ｃｉｅ ｎｃｅ ａ ｎｄ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕｎａ ｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｃｈａ ｎｇｓ ｈａ ４１０１２８）
提取物与应用
二氢杨梅素抗菌活性研究
萧力争 １， 银 霞 １， 刘素纯 ２＊， 郭 维 ２ （１．湖南农业大学园艺园林学院， 长沙 ４１０１２８； ２．湖南农业大学食品科技学院， 长沙 ４１０１２８）
摘要： 使用滤纸片法和试管二倍稀释法测定二氢杨梅素对几种常见食品微生物的抗菌效果。结果表
明： 二氢杨梅素对细菌有很强的抑制活性， 对真菌抑制效果不明显； 对供试菌种的最低抑菌浓度
微生物污染是影响食品卫生和安全的最主要因 素之一， 据估计， 全世界每年约有 １０％～２０％的食 品 损失于腐败， 添加食品防腐剂仍是目前防止食品腐 烂 变 质 的 重 要 手 段 之 一［１－ ４］。 目 前 普 遍 使 用 的 化 学 防 腐剂存在一定的安全隐患［５－６］。天然 防腐剂是从植 物 、 动物、微生物代谢产物提取的抗菌活性物质， 具有 广谱、高效、低毒等化学防腐剂无法比拟的优点， 因 而越来越受到人们的青睐， 已成为天然产物开发和 食 品 加 工 研 究 领 域 的 热 点 ［７］。 显 齿 蛇 葡 萄 俗 称 藤 茶 ， 是葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植 物。不少学者对藤茶的化学成分进行了较深入的研
１
２
３
４ ５６
枯草芽孢杆菌 √ √ √ √ √ √
大肠杆菌
－
－ √ √ √√
金黄色葡萄球菌 －
－
－
√ √√
链球菌
√ √ √ √ √√
注： “－ ”表示没有细菌生长， ＂√＂ 表示有菌生产。
由表 ３ 可知， 样品对链球菌和枯草芽孢杆菌的最
低杀菌浓度高于 ３．５２ ｇ／Ｌ， 对大肠杆菌和金黄色葡萄 球的最低杀菌 浓 度 分 别 是 １．７４ ｇ／Ｌ 和 ０．８８ ｇ／Ｌ。从 表 ２ 和表 ３ 数据分析， 二氢杨梅素具有广谱抑菌、杀菌 的效果， 其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度较低， 这
由表 ２ 可知， 二氢杨梅素对各种供试细菌具有
较低的抑菌浓度， 对枯草芽孢杆菌和链球菌的最低
抑菌浓度为 １．７４ ｇ／Ｌ， 对大肠杆菌的最低抑菌 浓度为
０．２２ ｇ／Ｌ， 而对金黄色葡萄 球 菌 的 抑 菌 浓 度 更 低 ， 小
于 ０．１１ ｇ／Ｌ。
表 ３ 二氢杨梅素对各种细菌的最低杀菌浓度
菌种
试管号
提取物与应用
乙 醇 提 取 物 ： 二 氢 杨 梅 素 含 量 ８８％， 用 ７６％的 乙 醇 溶解此藤茶乙醇提取物， 配制成 ８、１２、１５ ｇ／Ｌ 等不 同质量浓度 的溶液（二氢杨梅素实际质量 浓 度 分 别 为 ７．０４、１０．５６、１３．２０ ｇ／Ｌ）。 １．１．２ 菌种 湖南农业大学微生物实验室提供， 其中 细菌有大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、金黄色 葡 萄 球 菌 （ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ） 、 枯 草 芽 孢 杆 菌 （ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、溶血性链球菌（Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）， 霉菌 有青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ）、黑曲 霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）， 酵 母有啤酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）。 １．２ 实验方法 １．２．１ 圆滤纸片的准备 将滤纸片用滤纸打孔器制成 直径为 ６．５ ｍｍ 圆形小滤纸片， 高温蒸气杀菌后烘干 备用。 １．２．２ 培养基制备、灭菌及平皿的制备 实验中的细 菌培养基和真菌培养基的制备、灭菌及平皿制备均 参考文献［２］中方法进行。 １．２．３ 菌悬液的制备 细菌、酵母菌、霉菌悬液的制 备： 用接种环分别挑取 ３～４ 环培养 １ ｄ 的各供试菌于 带 玻 璃 珠 的 装 有 ９０ ｍＬ 无 菌 生 理 盐 水（０．８５％）的 三 角 瓶内， 振荡均匀， 制成菌悬液。用稀释平板记数法和 血球记数板测定菌数， 调整菌悬液浓度， 使其菌悬 液浓度为 １０６～１０７ ｃｆｕ／ｍＬ， 现配现用。 １．２．４ 二氢杨梅素抑菌效果的测定［１７］ 将样品用 ７６％ 乙醇 溶解， 配 成 质 量 浓 度 分 别 为 ７．０４、１０．５６、１３．２０ ｇ／Ｌ 的 二 氢 杨 梅 素 乙 醇 溶 液 ， 倾 少 量 于 已 灭 菌 的 瓶 内。将已灭菌烘干的圆滤纸片浸入不同浓度的溶液 中 ６￣８ ｈ 后， 用无菌镊子夹出， 贴于含菌平皿中。一 个平皿贴 ３ 片含样品药液的滤纸片， 呈正三角形。平 皿中间贴一个用 ７６％乙醇浸泡同样长时间的滤纸片， 作为对照。将加好药液的平皿置恒温培养箱中培养， 细 菌 于 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ， 酵 母 、 霉 菌 于 ２８ ℃培 养 ４８ ｈ， 取出观察， 测定抑菌圈直径。重复 ３ 次。 １．２．５ 二 氢 杨 梅 素 最 低 抑 菌 浓 度（ＭＩＣ）的 测 定 按 文 献［２］介绍的试管 ２ 倍稀释法进行。具体操作是： 取 ６ 支试管， 于每一支试管内加入培养液 ２ ｍＬ（灭菌 １２１ ℃， ３０ ｍｉｎ）。吸取 ２ ｍＬ 药液（二氢杨梅素浓度为 ７．０４ ｇ／Ｌ）到第 １ 管内， 充分混匀后吸出 ２ ｍＬ 到第 ２ 管中， 依次稀释到第 ６ 管。第 ６ 管充分混匀后吸出 ２ ｍＬ 混 合液丢弃。再向每一管内分别加菌悬液 ０．０５ ｍＬ（菌液 浓 度 １０６￣１０７ ｃｆｕ／ｍＬ）摇 匀 后 细 菌 置 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ 取出观察。以能抑制细菌生长繁殖的药液最高稀释 度为 该 药 的 最 低 抑 菌 浓 度 。将 上 述 稀 释 度 在 ＭＩＣ 以 前（包括 ＭＩＣ）的各菌药混合管取 ０．１ ｍＬ 转接于琼脂平 板上， 用无菌玻璃刮铲涂抹均匀后， 细菌于 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ， 酵母、霉菌于 ２８ ℃培养 ４８ ｈ， 取出观察结 果， 以仍没菌生长的最高药物稀释度为该药的最低
１．１ 实验材料 １．１．１ 样品 二氢杨梅素： 刘硕谦博士提供。藤茶的
收稿日期： ２００７－ １０－ ０７
＊ 通讯作者
基金项目： 湖南省教育厅研究课题。
作者简介： 萧力争（１９６３—）， 男， 湖南湘潭人， 博士研究生， 副教授， 主要从事茶叶加工、茶及资源植物成分化学研究工作。
１４０ Ｎｏ． ４． ２００８
（ＭＩＣ）不超过 １．７６ ｇ／Ｌ； 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度（ＭＢＣ）分别是 １．７６ ｇ／Ｌ 和 ０．８８ ｇ／
Ｌ， 对链球菌和枯草芽孢杆菌的最低杀菌浓度高于 ３．５２ ｇ／Ｌ； 抑菌活性在 ｐＨ３￣４ 的酸性环境中最强；
二氢杨梅素在一定温度处理后仍具有良好的抑菌效果。
关键词： 食品防腐剂； 二氢杨梅素； 滤纸片法； 试管二倍稀释法； 抑菌活性
杀菌浓度， 重复 ３ 次。 １．２．６ ｐＨ 对二氢杨梅素抑菌活性的影响 将质量浓 度 为 １０．５６ ｇ／Ｌ 二 氢 杨 梅 素 用 氢 氧 化 钠 和 盐 酸 调 成 ６ 个 ｐＨ 梯 度（３￣４、４￣５、５￣６、６￣７、７￣８、８￣９）， 用 上 述 １．２．４ 介绍的方法做抑菌圈的测定， 观察不同 ｐＨ 下二氢杨梅素抑菌效果的变化， 重复 ３ 次。 １．２．７ 温度对二氢杨梅素抑菌活性影响 将二氢杨梅 素用 ７６％乙醇稀释成质量浓度为 １０．５６ ｇ／Ｌ 的药液， 药 液 １２１ ℃处理 １０ ｍｉｎ， 用上述 １．２．４ 介绍的方法观察温 度对二氢杨梅素抑菌活性的影响， 重复 ３ 次。
１２．８
明显
１９．７
明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
啤酒Βιβλιοθήκη Baidu母
１０．５６ １３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
黑曲霉
１０．５６ １３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
７．０４
－
不明显
１０．５６ 青霉
１３．２
－
不明显
－
不明显
０
－
不明显
注： 表中数据为 ３ 次重复的平均值。
Ｎｏ． ４． ２００８ １４１
提取物与应用
２．２ 二 氢 杨 梅 素 的 最 低 抑 菌 浓 度 （ＭＩＣ）及 杀 菌 浓 度 （ ＭＢＣ ）
表 ２ 二氢杨梅素对供试细菌的最低抑菌浓度
菌种 １
枯草芽孢杆菌 －
试管号
２３
４
５６
－ √ √ √√
大肠杆菌
－
－
－
－
－√
金黄色葡萄球菌 －
－
－
－
－－
链球菌
－
－ √ √ √√
注： “－ ”表示没有细菌生长， ＂√＂ 表示有菌生产。
中图分类号： ＴＳ ２０１．３
文献标志码： Ａ
文章编号： １００５－ ９９８９（２００８）０４－ ０１４０－ ０３
Ｓ ｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ａ ｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａ ｌ ｅ ｆｆｅ ｃｔ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅ ｔｉｎ
ＸＩＡＯ Ｌｉ－ ｚｈｅｎｇ１， ＹＩＮ－ Ｘｉａ１， ＬＩＵ Ｓｕ－ ｃｈｕｎ２＊， ＧＵＯ Ｗｅｉ２
２ 结果与分析
２．１ 二氢杨梅素抑菌活性测定与分析 本研究的结果显示， 不同质量浓度的二氢杨梅
素对供试的霉菌和酵母无明显的抑制作用， 而对各种 供试的细菌， 无论是球菌和杆菌， 革兰阴性菌和革兰 阳性菌， 都有明显的抑制效果， 结果见表 １。
表 １ 二氢杨梅素对供试菌种的抑制效果
供试菌种 样品质量浓度／（ｇ／Ｌ） 抑菌圈直径／ｍｍ 抑制作用
７．０４
１３．１
明显
枯草芽孢 杆菌
１０．５６ １３．２
１６．４
明显
１６．９
明显
０
－
不明显
７．０４
１７．５
明显
大肠杆菌
１０．５６ １３．２
１９
明显
１６．２
明显
０
－
不明显
７．０４
２０．４
明显
金黄色 葡萄球菌
１０．５６ １３．２
１８．７
明显
１９．４
明显
０
－
不明显
７．０４
１６．５
明显
链球菌
１０．５６ １３．２
究 ， 证 实 藤 茶 的 主 要 成 分 为 二 氢 杨 梅 素［８－ １２］。 二 氢 杨 梅素具有很强的氧化能力， 能有效抑制细菌等微生 物的生长［１３－１５］。以往的研究多集中在藤 茶 和 二 氢 杨 梅 素的药理药效等功能方面， 本研究较深入地探讨了 二氢杨梅素对常见的食品腐败菌的抑菌活性及其作 用条件， 旨在探讨藤茶提取物二氢杨梅素作为天然 食品防腐剂的可能性。
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ａ ｇａｉｎｓ ｔ ｆｏｏｄ ｓ ｐｏｉｌａｇｅ ａｎｄ ｆｏｏｄ － ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓ ｔｅｄ ｂｙ ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｕｂｅ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓ ｕｌｔｓ ｓ ｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｌｅ ｉｔ ｈａｄ ｌｅｓ ｓ ｅｆｆｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓ ｔ ｔｈｅ ｍｏｕｌｄ． Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍｕｍ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｄｏｓ ａｇｅ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ａｇａｉｎｓ ｔ ｔｈｅ ｓ ｕｐｐｌｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ １．７６ ｇ／Ｌ． Ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｃｉｄａｌ ｄｏｓ ａｇｅ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ ： ｅｓ ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ １．７６ ｇ／Ｌ， ｓ ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ０．８８ ｇ／Ｌ， ｓ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｄ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ ｕｂｔｉｌｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ３．５２ ｇ／Ｌ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｂｅｓ ｔ ｉｎ ｐＨ３ ￣４． Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｓ ｔａｂｉｌｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｃｅｒｔａｉｎ ｈｅａｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｆｏｏｄｓ ｔｕｆｆ ａｎｔｉｓ ｅｐｔｉｃ； ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ； ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ； ｔｕｂｅ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ； ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ
（１．Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａ ｎｄ Ｌａ ｎｄｓ ｃａ ｐｅ ， Ｈｕｎａ ｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｃｈａ ｎｇｓ ｈａ ４１０１２８； ２．Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓ ｃｉｅ ｎｃｅ ａ ｎｄ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕｎａ ｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｃｈａ ｎｇｓ ｈａ ４１０１２８）
提取物与应用
二氢杨梅素抗菌活性研究
萧力争 １， 银 霞 １， 刘素纯 ２＊， 郭 维 ２ （１．湖南农业大学园艺园林学院， 长沙 ４１０１２８； ２．湖南农业大学食品科技学院， 长沙 ４１０１２８）
摘要： 使用滤纸片法和试管二倍稀释法测定二氢杨梅素对几种常见食品微生物的抗菌效果。结果表
明： 二氢杨梅素对细菌有很强的抑制活性， 对真菌抑制效果不明显； 对供试菌种的最低抑菌浓度
微生物污染是影响食品卫生和安全的最主要因 素之一， 据估计， 全世界每年约有 １０％～２０％的食 品 损失于腐败， 添加食品防腐剂仍是目前防止食品腐 烂 变 质 的 重 要 手 段 之 一［１－ ４］。 目 前 普 遍 使 用 的 化 学 防 腐剂存在一定的安全隐患［５－６］。天然 防腐剂是从植 物 、 动物、微生物代谢产物提取的抗菌活性物质， 具有 广谱、高效、低毒等化学防腐剂无法比拟的优点， 因 而越来越受到人们的青睐， 已成为天然产物开发和 食 品 加 工 研 究 领 域 的 热 点 ［７］。 显 齿 蛇 葡 萄 俗 称 藤 茶 ， 是葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植 物。不少学者对藤茶的化学成分进行了较深入的研
１
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枯草芽孢杆菌 √ √ √ √ √ √
大肠杆菌
－
－ √ √ √√
金黄色葡萄球菌 －
－
－
√ √√
链球菌
√ √ √ √ √√
注： “－ ”表示没有细菌生长， ＂√＂ 表示有菌生产。
由表 ３ 可知， 样品对链球菌和枯草芽孢杆菌的最
低杀菌浓度高于 ３．５２ ｇ／Ｌ， 对大肠杆菌和金黄色葡萄 球的最低杀菌 浓 度 分 别 是 １．７４ ｇ／Ｌ 和 ０．８８ ｇ／Ｌ。从 表 ２ 和表 ３ 数据分析， 二氢杨梅素具有广谱抑菌、杀菌 的效果， 其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度较低， 这
由表 ２ 可知， 二氢杨梅素对各种供试细菌具有
较低的抑菌浓度， 对枯草芽孢杆菌和链球菌的最低
抑菌浓度为 １．７４ ｇ／Ｌ， 对大肠杆菌的最低抑菌 浓度为
０．２２ ｇ／Ｌ， 而对金黄色葡萄 球 菌 的 抑 菌 浓 度 更 低 ， 小
于 ０．１１ ｇ／Ｌ。
表 ３ 二氢杨梅素对各种细菌的最低杀菌浓度
菌种
试管号
提取物与应用
乙 醇 提 取 物 ： 二 氢 杨 梅 素 含 量 ８８％， 用 ７６％的 乙 醇 溶解此藤茶乙醇提取物， 配制成 ８、１２、１５ ｇ／Ｌ 等不 同质量浓度 的溶液（二氢杨梅素实际质量 浓 度 分 别 为 ７．０４、１０．５６、１３．２０ ｇ／Ｌ）。 １．１．２ 菌种 湖南农业大学微生物实验室提供， 其中 细菌有大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、金黄色 葡 萄 球 菌 （ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ） 、 枯 草 芽 孢 杆 菌 （ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、溶血性链球菌（Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）， 霉菌 有青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ）、黑曲 霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）， 酵 母有啤酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）。 １．２ 实验方法 １．２．１ 圆滤纸片的准备 将滤纸片用滤纸打孔器制成 直径为 ６．５ ｍｍ 圆形小滤纸片， 高温蒸气杀菌后烘干 备用。 １．２．２ 培养基制备、灭菌及平皿的制备 实验中的细 菌培养基和真菌培养基的制备、灭菌及平皿制备均 参考文献［２］中方法进行。 １．２．３ 菌悬液的制备 细菌、酵母菌、霉菌悬液的制 备： 用接种环分别挑取 ３～４ 环培养 １ ｄ 的各供试菌于 带 玻 璃 珠 的 装 有 ９０ ｍＬ 无 菌 生 理 盐 水（０．８５％）的 三 角 瓶内， 振荡均匀， 制成菌悬液。用稀释平板记数法和 血球记数板测定菌数， 调整菌悬液浓度， 使其菌悬 液浓度为 １０６～１０７ ｃｆｕ／ｍＬ， 现配现用。 １．２．４ 二氢杨梅素抑菌效果的测定［１７］ 将样品用 ７６％ 乙醇 溶解， 配 成 质 量 浓 度 分 别 为 ７．０４、１０．５６、１３．２０ ｇ／Ｌ 的 二 氢 杨 梅 素 乙 醇 溶 液 ， 倾 少 量 于 已 灭 菌 的 瓶 内。将已灭菌烘干的圆滤纸片浸入不同浓度的溶液 中 ６￣８ ｈ 后， 用无菌镊子夹出， 贴于含菌平皿中。一 个平皿贴 ３ 片含样品药液的滤纸片， 呈正三角形。平 皿中间贴一个用 ７６％乙醇浸泡同样长时间的滤纸片， 作为对照。将加好药液的平皿置恒温培养箱中培养， 细 菌 于 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ， 酵 母 、 霉 菌 于 ２８ ℃培 养 ４８ ｈ， 取出观察， 测定抑菌圈直径。重复 ３ 次。 １．２．５ 二 氢 杨 梅 素 最 低 抑 菌 浓 度（ＭＩＣ）的 测 定 按 文 献［２］介绍的试管 ２ 倍稀释法进行。具体操作是： 取 ６ 支试管， 于每一支试管内加入培养液 ２ ｍＬ（灭菌 １２１ ℃， ３０ ｍｉｎ）。吸取 ２ ｍＬ 药液（二氢杨梅素浓度为 ７．０４ ｇ／Ｌ）到第 １ 管内， 充分混匀后吸出 ２ ｍＬ 到第 ２ 管中， 依次稀释到第 ６ 管。第 ６ 管充分混匀后吸出 ２ ｍＬ 混 合液丢弃。再向每一管内分别加菌悬液 ０．０５ ｍＬ（菌液 浓 度 １０６￣１０７ ｃｆｕ／ｍＬ）摇 匀 后 细 菌 置 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ 取出观察。以能抑制细菌生长繁殖的药液最高稀释 度为 该 药 的 最 低 抑 菌 浓 度 。将 上 述 稀 释 度 在 ＭＩＣ 以 前（包括 ＭＩＣ）的各菌药混合管取 ０．１ ｍＬ 转接于琼脂平 板上， 用无菌玻璃刮铲涂抹均匀后， 细菌于 ３７ ℃培 养 ２４ ｈ， 酵母、霉菌于 ２８ ℃培养 ４８ ｈ， 取出观察结 果， 以仍没菌生长的最高药物稀释度为该药的最低