中药血清药理学实验方法与相关问题探讨
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2 供体动物是否需要造模
目前对于供体动物是否需要造模还未达成共识。在药 物的作用下，病理和正常生理环境中，经过消化吸收，生 物转化等过程后，产生的有效组分不同，药代动力学参数 不一致，且血液中的某些生物活性物质会随着机体内环境 的变化而发生相应改变，所以供体动物是否造模在一定程 度上决定了我们能否对药效进行正确评价。目前最常用正 常动物作为含药血清的供体动物，但有学者认为必须对血 清供体动物造模才能真实评价药效[3]，然而含药血清中有效 成分的定量分析检测尚未见有突破性进展，且血清成分复 杂，不可控因素很多，所以目前无法准确比较病理和正常 生理状况下血清及其代谢产物以及经过体内生物转化后有 效成分的药代动力学差异[4-5]。
6 含药血清制备过程中应注意的问题
（1）含药血清制备时选用的动物多为大鼠，在取血 的过程中应注意尽量减少溶血，这对以后的实验结果具有 一定的影响，笔者经过试验，大鼠腹主动脉取血时，平行 血管进针，进针时，针头位置为腹主动脉与肾动脉的分支 处或略向上，此处的动脉血流量大，血管较粗，针头不易 吸黏血管，血流通畅，从而减少取血时间，降低血细胞溶 破率。
5 含药血清的预处理及保存
制备成功含药血清后，需要对血清进行灭活，因为 血清中的成分复杂，其中的一些抗体，补体，酶，细胞因 子等活性物质可能会对实验结果产生干扰，通用的方法是 56℃左右水浴加热进行灭活，一般为30min。但是此方法可 能也会使血清中某些药物有效成分发生变化甚至失活[1]，研 究药物作用机制时发生偏差，从而不能正确评价药效。此 时应注意体外实验要与体内实验相互对照，从而正确阐明 药物的作用机理。为了去除血清中可能存在的微生物对实 验结果的影响，含药血清需除菌处理，一般用0.22μm微孔 滤膜进行过滤，此方法可以有效除去血清中的微生物，且 不会破坏其有效成分。含药血清存放于-20℃，若长期存放 应在-80℃或液氮中保存，但实验应尽量选择新鲜血清，因 为血清在低温长时间放置时，其有效成分也会降解[8]。
（2）含药血清分组进行实验时，应考虑到血清是细胞 培养时的主要营养物质，不同组培养基中的血清量应能够 满足细胞基础的营养所需，若含药血清的用量低于细胞生 存所必须的营养，需要用正常血清补齐，否则无法由实验 结果判断细胞是因为药物作用还是由于没有足够的营养的 原因。
7 讨论与展望
中药含药血清进行体外实验的方法已经应用于许多方 面并取得成果。中药本身成分的复杂性决定了制备其含药 血清的可变性：给药时间，采血时间，血清的添加量，血 清作用细胞的时间等都会随药物的不同而改变。不过这些 因素大多都可以通过预实验确定。血清药理学虽然有许多 尚未解决的问题，有些实验方法还不完全成熟，但因其可 以排除中药中其他杂质的影响，反映药物在体内经一系列 生化反应及生物转化及代谢过程后药物真正起效的部分，
【中图分类号】R96
【文献标识码】A
【文章编号】ISSN.2095-7882.2019.31.125.02
1 供体动物种属的选择
不同种属动物的血清成分不同，目前体外实验中，含 药血清供体动物以大鼠、家兔、豚鼠居多[2]，不仅因为它们 的血量丰富，容易获得，还因为他们与人类的生物特性较 为接近。血清成分成分复杂，其组成成份虽大部分已知， 但还有一部分尚不清楚，为了避免个体差异，供体动物应 选择雌雄各半，4只以上进行实验。同时，为了避免免疫反 应而影响实验结果，含血清和体外培养细胞的供体动物应 为同一种属，且药物血清实验组和正常对照组的血清必须 采自同一种属的同类动物，否则不同组别得出实验结果的 差异性无法判断是因为血清成分不同还是因为含药血清中 药物的作用。
活动度
表1 Aldrete评分
呼吸
循环
神经系统状态
氧饱和度
不能按照指示抬头或 窒息；条件需要的通 血压或高或低，但与术前相比上
即时给予氧供，氧饱
（下转136页）
全科口腔医学电子杂志
2019 年11月 第6卷/第31期
1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ6
Electronic Journal Of General Stomatology
Vol.6, No.31 Nov. 2019
室护士评估后无任何不良反应才可离开医院或者回病房。
4 结 论
通过对15000多例七氟烷吸入麻醉行MRI/CT复苏室的 护理不良事件的总结，复苏室护士严格执行复苏室的标准 流程，可有效的保证患儿在复苏室的安全。
2019 年11月 第6卷/第31期
全科口腔医学电子杂志
Vol.6, No.31 Nov. 2019
Electronic Journal Of General Stomatology
125
中药血清药理学实验方法与相关问题探讨
李若飞，于春萍，兰丁璇，付子杰 （华北理工大学，河北 唐山 063200）
【关键词】中药；血清药理学；实验方法
4 含药血清添加量的问题
血清是细胞的主要营养物质，然而高浓度血清对细胞
也有毒性作用，可抑制细胞增殖[7]。体外实验中含药血清浓 度多选用10%，然而血清对细胞的毒作用也与细胞株的种类 有关，不同细胞所用的最适血清浓度可能也不相同。为了 寻找合适的血清浓度来反映体内的血药浓度，从而评价药 效，可以稀释不同浓度的含药血清进行预实验来确定。
3 给药时间及采血时间的确定
有研究者通过实验对大量中药的药代动力学参数进行 分析后，提出一种普遍适用的给药时间及采血时间方案， 即每日两次，早晚各一，连续3 d，末次给药后1 h采血，称 之为“通法”[6]。给药时间及采血时间的确定是由血药浓 度来确定的，多数药物在体内按照一级动力学消除，药物 经过4-5个半衰期（t1/2）达到稳态浓度（Css），所以中药 的半衰期长短决定了给药时间的长短。药物在体内经过吸 收、分布、代谢、排泄过程，给药后体内的血药浓度随时 间的推移先升高后降低，理想的采血时间是血药浓度达峰 值的时刻，但由于选择动物、药物本身、给药次数等多种 因素不同，采血时间也不尽相同。一般来说，血药浓度的 高峰期在末次给药后30min~2 h，更准确的采血时间还需要 在此基础上由预实验来确定。
目前对于供体动物是否需要造模还未达成共识。在药 物的作用下，病理和正常生理环境中，经过消化吸收，生 物转化等过程后，产生的有效组分不同，药代动力学参数 不一致，且血液中的某些生物活性物质会随着机体内环境 的变化而发生相应改变，所以供体动物是否造模在一定程 度上决定了我们能否对药效进行正确评价。目前最常用正 常动物作为含药血清的供体动物，但有学者认为必须对血 清供体动物造模才能真实评价药效[3]，然而含药血清中有效 成分的定量分析检测尚未见有突破性进展，且血清成分复 杂，不可控因素很多，所以目前无法准确比较病理和正常 生理状况下血清及其代谢产物以及经过体内生物转化后有 效成分的药代动力学差异[4-5]。
6 含药血清制备过程中应注意的问题
（1）含药血清制备时选用的动物多为大鼠，在取血 的过程中应注意尽量减少溶血，这对以后的实验结果具有 一定的影响，笔者经过试验，大鼠腹主动脉取血时，平行 血管进针，进针时，针头位置为腹主动脉与肾动脉的分支 处或略向上，此处的动脉血流量大，血管较粗，针头不易 吸黏血管，血流通畅，从而减少取血时间，降低血细胞溶 破率。
5 含药血清的预处理及保存
制备成功含药血清后，需要对血清进行灭活，因为 血清中的成分复杂，其中的一些抗体，补体，酶，细胞因 子等活性物质可能会对实验结果产生干扰，通用的方法是 56℃左右水浴加热进行灭活，一般为30min。但是此方法可 能也会使血清中某些药物有效成分发生变化甚至失活[1]，研 究药物作用机制时发生偏差，从而不能正确评价药效。此 时应注意体外实验要与体内实验相互对照，从而正确阐明 药物的作用机理。为了去除血清中可能存在的微生物对实 验结果的影响，含药血清需除菌处理，一般用0.22μm微孔 滤膜进行过滤，此方法可以有效除去血清中的微生物，且 不会破坏其有效成分。含药血清存放于-20℃，若长期存放 应在-80℃或液氮中保存，但实验应尽量选择新鲜血清，因 为血清在低温长时间放置时，其有效成分也会降解[8]。
（2）含药血清分组进行实验时，应考虑到血清是细胞 培养时的主要营养物质，不同组培养基中的血清量应能够 满足细胞基础的营养所需，若含药血清的用量低于细胞生 存所必须的营养，需要用正常血清补齐，否则无法由实验 结果判断细胞是因为药物作用还是由于没有足够的营养的 原因。
7 讨论与展望
中药含药血清进行体外实验的方法已经应用于许多方 面并取得成果。中药本身成分的复杂性决定了制备其含药 血清的可变性：给药时间，采血时间，血清的添加量，血 清作用细胞的时间等都会随药物的不同而改变。不过这些 因素大多都可以通过预实验确定。血清药理学虽然有许多 尚未解决的问题，有些实验方法还不完全成熟，但因其可 以排除中药中其他杂质的影响，反映药物在体内经一系列 生化反应及生物转化及代谢过程后药物真正起效的部分，
【中图分类号】R96
【文献标识码】A
【文章编号】ISSN.2095-7882.2019.31.125.02
1 供体动物种属的选择
不同种属动物的血清成分不同，目前体外实验中，含 药血清供体动物以大鼠、家兔、豚鼠居多[2]，不仅因为它们 的血量丰富，容易获得，还因为他们与人类的生物特性较 为接近。血清成分成分复杂，其组成成份虽大部分已知， 但还有一部分尚不清楚，为了避免个体差异，供体动物应 选择雌雄各半，4只以上进行实验。同时，为了避免免疫反 应而影响实验结果，含血清和体外培养细胞的供体动物应 为同一种属，且药物血清实验组和正常对照组的血清必须 采自同一种属的同类动物，否则不同组别得出实验结果的 差异性无法判断是因为血清成分不同还是因为含药血清中 药物的作用。
活动度
表1 Aldrete评分
呼吸
循环
神经系统状态
氧饱和度
不能按照指示抬头或 窒息；条件需要的通 血压或高或低，但与术前相比上
即时给予氧供，氧饱
（下转136页）
全科口腔医学电子杂志
2019 年11月 第6卷/第31期
1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ6
Electronic Journal Of General Stomatology
Vol.6, No.31 Nov. 2019
室护士评估后无任何不良反应才可离开医院或者回病房。
4 结 论
通过对15000多例七氟烷吸入麻醉行MRI/CT复苏室的 护理不良事件的总结，复苏室护士严格执行复苏室的标准 流程，可有效的保证患儿在复苏室的安全。
2019 年11月 第6卷/第31期
全科口腔医学电子杂志
Vol.6, No.31 Nov. 2019
Electronic Journal Of General Stomatology
125
中药血清药理学实验方法与相关问题探讨
李若飞，于春萍，兰丁璇，付子杰 （华北理工大学，河北 唐山 063200）
【关键词】中药；血清药理学；实验方法
4 含药血清添加量的问题
血清是细胞的主要营养物质，然而高浓度血清对细胞
也有毒性作用，可抑制细胞增殖[7]。体外实验中含药血清浓 度多选用10%，然而血清对细胞的毒作用也与细胞株的种类 有关，不同细胞所用的最适血清浓度可能也不相同。为了 寻找合适的血清浓度来反映体内的血药浓度，从而评价药 效，可以稀释不同浓度的含药血清进行预实验来确定。
3 给药时间及采血时间的确定
有研究者通过实验对大量中药的药代动力学参数进行 分析后，提出一种普遍适用的给药时间及采血时间方案， 即每日两次，早晚各一，连续3 d，末次给药后1 h采血，称 之为“通法”[6]。给药时间及采血时间的确定是由血药浓 度来确定的，多数药物在体内按照一级动力学消除，药物 经过4-5个半衰期（t1/2）达到稳态浓度（Css），所以中药 的半衰期长短决定了给药时间的长短。药物在体内经过吸 收、分布、代谢、排泄过程，给药后体内的血药浓度随时 间的推移先升高后降低，理想的采血时间是血药浓度达峰 值的时刻，但由于选择动物、药物本身、给药次数等多种 因素不同，采血时间也不尽相同。一般来说，血药浓度的 高峰期在末次给药后30min~2 h，更准确的采血时间还需要 在此基础上由预实验来确定。