【精品课件】狂犬病的实验室检测与诊断技术

2. 对安全操作的建议
操作所有潜在狂犬病感染的材料均应在
P2或P3生物安全实验室内进行。
对狂犬病实验室诊断的安全性要求：
①一个封闭的环境，专作狂犬病感染性工作
②通过缓冲更衣间并限制一定的专业人员进入； ③穿专用的实验室隔离无菌衣和鞋； ④操作完毕对操作台进行消毒(当材料偶然地溢出时应立即用3％的雷苏尔溶液或其他 相应的消毒剂消毒)； ⑤每日应至少消毒地板一次； ⑥所有用后剩余的标本，尸解工具，实验室材料在拿出实验室前应进行高压蒸气消 毒。
3. 动物和人狂犬病的死后诊断
抗原检测 病毒分离 病毒鉴定等。
为了确保实验室结果的可信性，必需满足若干条 件：
1. 标本质量要好； 2. 标本送达实验室的条件要好（符合GLP标准， 获得一定级别的资格认证）； 3. 获得结果的等待时间要短； 4. 结果的传递要迅速。
二 狂犬病诊断实验室的安全措施
(2)角膜涂片，用显微镜载玻片直接接触角 膜操作(不要用棉拭)，标记玻片，空气干燥并 用铝锡纸单片包裹。
Ｂ。检测抗体：血液、CSF或血清采集于干燥 试管内，并低温冰冻存放。
2) 标本取自死亡后的个体
送至实验室标本的方式依动物种类不同而不同。
(1) 小的野生动物(包括蝙蝠)
送完整的个体以便对动物品种进行准确鉴定。
三 狂犬病毒抗原的检测பைடு நூலகம்
1. 标本选择 在选择、运送标本前，实际操作获
得标本的人员与实验室检测人员事先取 得联系共同选择实验方法是很重要的。
1) 标本取自个体的生命期
Ａ．检查病毒和(或)抗原：样品应放在干燥试 管内。样品的获取可按下述方法进行。
(1)用注射器或吸管吸入法采集唾液(不用棉 拭)，CSF，皮肤活检等样品。
角膜印片(切勿划痕)取自伴有脑炎的患者，用显微镜的载波 片轻轻触及角膜的中心部位。
角膜印片及皮肤活组织标本的质量很重要，采取后应立即冷 冻，直至检测。不过，用FA技术做生存期内的诊断，其敏感性是 有限的。
人狂犬病的生存期内诊断
已证实患者及自然感染和实验感染动物的
角膜印片中存在狂犬病抗原。但是，角膜印片
在生物安全柜或隔离器内打开动物颅盖骨的操作很困难，技术人员在操 作这项工作时应带面罩，护目镜、手套和围裙。
由于与狂犬病相关病毒对人的致病性还不很了解，所有操作可能含有
这些病毒的标本均应在生物安全柜内进行。
所有实验室工作人员务必进行狂犬病疫苗的暴露前免疫，这些人员的中 和抗体应定期检查，所有意外地暴露于感染时必需立即报告负责人。
生物安全级别＆对工作人员的要求
(Biological Safety Level, BSL ) (Protection, P ) BSL-1：实验人员在实验程序方面受过特殊训练，由受
过微生物学或相关科学一般训练的科学工作者监督实验。
BSL-2：实验人员均接受过病源处理方面的特殊培训，
并由有资格的科学工作者指导。
(2) 家养食肉动物(狗、猫)或野生食肉动物
(狐狸、貉、浣熊、臭鼬、豺等) 仅送头部。
(3) 更大的动物(家养或野生食草动物)
打开头盖骨并取脑送至实验室。
标本取自死亡后的个体（人）
对人狂犬病在有可能进行全面尸解时，把 整个脑取出，或选择一些部位切下(海马角、 脑干、皮质、小脑)送至实验室。
在特殊情况下(困难的野外条件，动物流行 病学检测)以及因宗教或传统原因对狂犬病人 无法尸解时，可以用塑料管或吸管穿进枕骨孔 或眼窝后取出一些脑组织)。
1. 危险性
在一般的实验室条件，技术人员暴露于以下传染的危险： ——野生狂犬病毒(即街毒)，当实验室对接收到的动物标本进 行尸体解剖时或对标本进行加工时(悬液制备，离心)等，这一类 操作是非常危险的，必须在P3以上条件的专业实验室中进行。 ——实验室适应的病毒(即固定毒)，当接种实验动物或操作感 染的细胞培养时，特别是制备大量的高浓度病毒时，主要的传染 来源为手指被有感染的玻璃或工具刺伤或割破；新糜烂的皮肤或 粘膜与感染物接触也应认为是一种传染的危险。虽然固定毒的毒 力已大为下降，历史上仅有一例死于固定毒操作的报道，但仍有 一定的危险性，因此操作固定毒仍须十分小心。
检出率较低，阳性结果可肯定是狂犬病，而阴 性结果并不能排除是狂犬病的可能。
虽然在临床症状开始时，在皮肤活组织中 可能检出狂犬病抗原，但早期症状时仅有2550%的患者为阳性，随着病情的进展阳性率也 增加。颈背部皮肤活组织检查只有一些患者呈 阳性结果，特别是在临床疾病的早期。
用FA检查皮肤活组织的灵敏度一般高于检 查角膜印片。
BSL-3：实验人员应在处理致病性的和可能使人致死的
病源方面受过专业训练，并由对该病源工作有经验的、 有资格的科学工作者监督。
BSL-4：实验室成员应在处理特别危险的传染源方面受
过特殊和全面的训练，应了解标准和特殊操作中一级和 二级遏制的作用、遏制设备、实验室设计性能。实验由 在有关病源方面受过训练、并有工作经验的、有资格的 科学工作者监督。
2. 人狂犬病的生存期内诊断
生存期内的诊断技术的选择主要随着病程的不同而异。
在病后最初几天，检测抗原一般是敏感的。
脑脊液及血清中的病毒中和抗体常常趋向于在病后7—10天
出现。
检测抗原可用荧光抗体（FA）法检查狂犬病患者角膜印片或
皮肤活组织，但是，FA阳性标本在发病的后期更常见。皮肤活组 织检查常常从颈背部取含有末稍神经的带有毛囊的标本。
2. 标本的运送
标本运送必需严格遵循安全要求，包装务必要有保证。
1) 可靠的诊断要有一个保存良好的标本；
2) 运送狂犬病标本的服务人员应事先进行过抗狂犬病免疫并证 明已得到完全的保护。
3) 小动物的躯体或较大动物切下的头部标本可用10％甲醛溶液 处理过的材料包裹，然后放入一个厚塑料袋内扎紧。
狂犬病的 实验室检测与诊断技术
1. 临床诊断与实验室诊断
实验室手段对狂犬病的确诊非常必要。 ＷＨＯ要求狂犬病病例的统计上报资料要注明 诊断的依据（是否包括实验室诊断？）。目前 国际上公认狂犬病的死亡率是100%，原则上不 承认有狂犬病康复的可能，即狂犬病的发病率 应与死亡率相等。没有合格实验室给出的肯定 诊断的康复病例应从狂犬病病例的统计数字中 剔除。 “狂犬病患者必死无疑，不死不算狂犬 病” ，要挑战这个命题，必须提供确切、完整 的病史和权威的实验室诊断资料。