动物细胞工程常用的技术手段课件
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B BB B瘤 瘤瘤 瘤
筛选杂种 细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这 两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠 骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分 裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加 PEG 促融，获得杂种细胞。
植物、动物细胞融合的比较
比较项目
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。 ）
3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
4、气体环境：
保证细胞顺利的 生长增殖
O2和CO 2（95% 空气和5% CO 2 ）
动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和 动物血清等。
丧失感染性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合）
1.过程：
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
提 问
？
1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？
1。抗原
刺激
效应B 动物体内
抗体
2。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激 动物体内 效应B 抗体
抗原不纯
抗体不纯
筛选单一效应B细胞
不能增值产生大量抗体
-化学性质单一、特异性强的抗体。 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
效应？
B细胞
抗？原
2.制备过程：
诱导其融合的 方法有哪些？
细胞融合后培养液中有几种细胞
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞融合的方法
诱导方法 用途
细胞膜的流动性、细胞膜的流动性 植物细胞全能性
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理（离心、 物理、化学方法 振动、电刺激） （同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
获得杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
除通过杂交瘤细胞产生单克隆 抗体外，还有什么方法？
3.单克隆抗体的应用：
①在基础理论研究中具有重要意义
②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。
③生物导弹
一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞
灭活病毒 杂交瘤细胞
一个优势
百度文库
单克隆抗体特异性强、 灵敏度高的优势
”亲母“与莉多
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
程过育培的羊莉多
细胞质
动物体细胞大都生 活在液体的环境
（1）液体培养基 与植物培养基相比其特点是：
（2）含有动物血清
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 培养基性质
细胞的全能性
细胞增殖
固体培养基 液体培养基
培养基特有成分 培养结果
蔗糖、植物 激素
植物体
葡萄糖、动 物血清
细胞株、细胞系
培养目的
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎 或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因 是这样的组织细胞 （ D ）
A. 容易产生各种变异 B ．具有更强的全能性 C.取材十分方便 D ．分裂增殖的能力强
4. 动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 ------------------------------ （ A ）
提问：
? 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 , 植物体细胞杂交
动物细胞工程常用的技术手段：
动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术 是其他动物细胞工程技术的基础。
动物细胞培养和核移植技术
? 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织， 将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。
体细胞核移植技术存在的问题：
许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷， 如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏 器缺陷，免疫失调等。
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改 变的细胞是 --------------------（ A ）
A．细胞系 C．原代细胞
B ．细胞株 D．传代细胞
2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ D ）
3.动物细胞生长特性：
? 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。 要求：
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制 ：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
4.过程：
动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
A. 培养基不同； B. 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C. 动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D. 动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培
养成植株。
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍， 培育作物新品种
1.过程：
物理法
诱导方式
化学法 生物法： 灭活的病毒
仙台病毒 紫外线
1、选材：
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官， 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分 化程度低，容易培养。
2.分散成单个细胞
?在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散 细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动 物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶 (7.2-8.4)的活性较高。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
核移植
胚胎细胞核移植
体细胞核移植 受体细胞：MⅡ期的
（难度高 ）
卵母细胞
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
程过育培的羊莉多
细胞质
细胞核
细胞核移植
融合后的卵细胞
卵裂
早期胚胎
胚胎移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物
细胞核
细胞核移植
快速繁殖、培育 无病毒植株等
获得细胞或 细胞产物
动物细胞培养应用
? 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体）
? 作为基因工程中的受体细胞 ? 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，
判断某种物质的毒性
? 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依 据
二、动物体细胞核移植技术:
将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉 细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新 的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。
筛选杂种 细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这 两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠 骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分 裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加 PEG 促融，获得杂种细胞。
植物、动物细胞融合的比较
比较项目
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。 ）
3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
4、气体环境：
保证细胞顺利的 生长增殖
O2和CO 2（95% 空气和5% CO 2 ）
动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和 动物血清等。
丧失感染性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合）
1.过程：
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
提 问
？
1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？
1。抗原
刺激
效应B 动物体内
抗体
2。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激 动物体内 效应B 抗体
抗原不纯
抗体不纯
筛选单一效应B细胞
不能增值产生大量抗体
-化学性质单一、特异性强的抗体。 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
效应？
B细胞
抗？原
2.制备过程：
诱导其融合的 方法有哪些？
细胞融合后培养液中有几种细胞
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞融合的方法
诱导方法 用途
细胞膜的流动性、细胞膜的流动性 植物细胞全能性
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理（离心、 物理、化学方法 振动、电刺激） （同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
获得杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
除通过杂交瘤细胞产生单克隆 抗体外，还有什么方法？
3.单克隆抗体的应用：
①在基础理论研究中具有重要意义
②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。
③生物导弹
一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞
灭活病毒 杂交瘤细胞
一个优势
百度文库
单克隆抗体特异性强、 灵敏度高的优势
”亲母“与莉多
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
程过育培的羊莉多
细胞质
动物体细胞大都生 活在液体的环境
（1）液体培养基 与植物培养基相比其特点是：
（2）含有动物血清
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 培养基性质
细胞的全能性
细胞增殖
固体培养基 液体培养基
培养基特有成分 培养结果
蔗糖、植物 激素
植物体
葡萄糖、动 物血清
细胞株、细胞系
培养目的
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎 或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因 是这样的组织细胞 （ D ）
A. 容易产生各种变异 B ．具有更强的全能性 C.取材十分方便 D ．分裂增殖的能力强
4. 动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 ------------------------------ （ A ）
提问：
? 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 , 植物体细胞杂交
动物细胞工程常用的技术手段：
动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术 是其他动物细胞工程技术的基础。
动物细胞培养和核移植技术
? 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织， 将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。
体细胞核移植技术存在的问题：
许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷， 如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏 器缺陷，免疫失调等。
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改 变的细胞是 --------------------（ A ）
A．细胞系 C．原代细胞
B ．细胞株 D．传代细胞
2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ D ）
3.动物细胞生长特性：
? 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。 要求：
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制 ：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
4.过程：
动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
A. 培养基不同； B. 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C. 动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D. 动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培
养成植株。
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍， 培育作物新品种
1.过程：
物理法
诱导方式
化学法 生物法： 灭活的病毒
仙台病毒 紫外线
1、选材：
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官， 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分 化程度低，容易培养。
2.分散成单个细胞
?在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散 细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动 物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶 (7.2-8.4)的活性较高。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
核移植
胚胎细胞核移植
体细胞核移植 受体细胞：MⅡ期的
（难度高 ）
卵母细胞
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
程过育培的羊莉多
细胞质
细胞核
细胞核移植
融合后的卵细胞
卵裂
早期胚胎
胚胎移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物
细胞核
细胞核移植
快速繁殖、培育 无病毒植株等
获得细胞或 细胞产物
动物细胞培养应用
? 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体）
? 作为基因工程中的受体细胞 ? 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，
判断某种物质的毒性
? 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依 据
二、动物体细胞核移植技术:
将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉 细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新 的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。