实验四 柱层析分离
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3. 洗脱 加好样品后，控制流速，20-30 滴，先用50%的乙醇冲洗，再用90%的乙醇冲洗。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 当柱子最前沿为黄色时，开始收 集，每瓶接收约30 ml。色带距离1cm以上， 可换90%E
• 5. 检测 分离结果用TLC检测。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
与聚酰胺之间形成氢键的能力不同。在聚
酰胺膜上做层析分离时，流动相从薄膜表
面流过，被分离物质在溶剂和薄膜之间发
生不同速率的吸附与解吸，从而使混合物 得到有序的分离。
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。
• 一）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比
例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序:
• 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 • 理论: 用反相色谱理论来解释
Байду номын сангаас
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序:
• 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统，将芦丁 先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从聚 酰胺柱上洗脱出来。
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g（30-80目），加
水40ml，搅匀，倒入层析柱中（打开层 析柱活塞，让水滴出，让聚酰胺自由沉 降而填实。注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺适量，在水浴上除尽甲 醇，成颗粒状，将所拌样品通过漏斗，轻 轻的置于柱上端，加滤纸。
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。
二、实验原理
1. 槲皮素与芦丁的结构
OH
HO
O
OH
OH
OH
O
HO
O
槲皮素
OH OH
O Glc Rha
OH
O
芦丁（Rutin）又称芸香苷（Rutioside）， 即槲皮素-3-O-芸香糖
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为4-8 cm,取 出薄层板，晾干。
• 6. 喷1％的AlCl3显色。 • 7. 实验结果见图1。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
二、实验原理
2. 聚酰胺的结构
固定相
CH2 NH
OC CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
HN CO
CH2
CH2 OC
NH CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CO HN
CH2
O
O
HO
移动相
• 聚酰胺含有大量酰胺基团，以其－CO－或 －NH－与极性化合物的－OH 或＝O 之间 形成氢键，从而发生吸附作用。不同物质
• 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1； 丙酮：水（8：2）；90%-95%E
• 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 的高度4mm左右。
• 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、试样3-
--，点样一般为圆点，点样直径一般不大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面（点样量， 约2-3毛细管）。点一次吹干一次。
• 2.干法上样：讨论样品过柱时为什么要加 甲醇溶解，聚酰胺吸附？
三．实验操作步骤
• 4. 收集 当柱子最前沿为黄色时，开始收 集，每瓶接收约30 ml。色带距离1cm以上， 可换90%E
• 5. 检测 分离结果用TLC检测。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
与聚酰胺之间形成氢键的能力不同。在聚
酰胺膜上做层析分离时，流动相从薄膜表
面流过，被分离物质在溶剂和薄膜之间发
生不同速率的吸附与解吸，从而使混合物 得到有序的分离。
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。
• 一）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比
例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序:
• 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 • 理论: 用反相色谱理论来解释
Байду номын сангаас
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序:
• 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统，将芦丁 先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从聚 酰胺柱上洗脱出来。
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g（30-80目），加
水40ml，搅匀，倒入层析柱中（打开层 析柱活塞，让水滴出，让聚酰胺自由沉 降而填实。注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺适量，在水浴上除尽甲 醇，成颗粒状，将所拌样品通过漏斗，轻 轻的置于柱上端，加滤纸。
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。
二、实验原理
1. 槲皮素与芦丁的结构
OH
HO
O
OH
OH
OH
O
HO
O
槲皮素
OH OH
O Glc Rha
OH
O
芦丁（Rutin）又称芸香苷（Rutioside）， 即槲皮素-3-O-芸香糖
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为4-8 cm,取 出薄层板，晾干。
• 6. 喷1％的AlCl3显色。 • 7. 实验结果见图1。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
二、实验原理
2. 聚酰胺的结构
固定相
CH2 NH
OC CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
HN CO
CH2
CH2 OC
NH CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CO HN
CH2
O
O
HO
移动相
• 聚酰胺含有大量酰胺基团，以其－CO－或 －NH－与极性化合物的－OH 或＝O 之间 形成氢键，从而发生吸附作用。不同物质
• 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1； 丙酮：水（8：2）；90%-95%E
• 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 的高度4mm左右。
• 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、试样3-
--，点样一般为圆点，点样直径一般不大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面（点样量， 约2-3毛细管）。点一次吹干一次。
• 2.干法上样：讨论样品过柱时为什么要加 甲醇溶解，聚酰胺吸附？