【课件】形态学实验技术ppt
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
方法：透明后的组织 520C－540C（软蜡）1 小时 540C－560C石蜡1小时 580C－600C （硬蜡）1小时 540C－560C石蜡进行包埋
第三节 组织切片
切片（section） 1.整修蜡块：组织四周应留有2－4 mm 蜡边，
蜡块的上下两边应平行。 2.镶装：镶装平面应尽可能与切片刀刃平行。 3.调整：切片机的进度尺常定在4－6μm，切
流式细胞仪技术（Flow Microfluorimetry）
是一种单细胞定量分析和分选的新技术。 其范围包括了细胞表面或细胞内的各种抗原、 蛋白、酶以及基因表达产物；还有细胞内的核 酸定量或DNA倍体、细胞周期分析；尤其是癌 基因的检测、血细胞表型分析、细胞分子和粘 附分子的检查、细胞凋亡分析、肿瘤相关抗原 及单种细胞的纯化。
固定方法 浸泡固定 注射、灌注固定 微波固定 蒸汽固定
常用的固定剂
单纯性固定剂：甲醛（福尔马林 formalin） 乙醇；乙酸。
混合固定剂：中性甲醛pH 7.0（甲醛、磷酸缓 冲液）；A-F液 （甲醛、酒精）
三、脱水（dehydration）
将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的 过程
片刀的倾斜角在20度左右。 4.修切平面：修切的组织片不能过厚，以免
脱水的目的
标本经固定和水洗后，组织内有大量水份， 不能与二甲苯混溶，因此必须脱水。
常用的脱水剂和脱水方法
脱水剂有：乙醇、丙酮等
80％ 酒精
30 分钟
95％ 酒精
1－2小时
95％ 酒精
1－2小时
100％酒精
1－2小时
100％酒精
1－2小时
四、透明（clearing）
为使石蜡能浸入组织块，组织脱水后必须经 过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂， 而达到石蜡浸入组织块的目的。此时因组织块的 水分被二甲苯取代，其折射指数接近于组织蛋白 的折光指数，组织块变得透亮。因此透明是石蜡 包埋前的一个特定步骤。
透明的目的：便于浸蜡、包埋。透明剂即能与脱水
剂相混溶，又能与包埋剂（石蜡）相混溶，起 到桥梁作用。
大多数脱水剂不能和包埋剂（石蜡）混溶， 故必须通过透明剂置换出脱水剂后才能进行 后续程序。 常用的透明剂
二甲苯：为最常用的透明剂，有毒、易燃、 易挥发；沸点1380C-1400C,长期接触对粘膜 有刺激作用。
4.防止变形：固定后的组织或多或少会产生收 缩现象
5 组织块力求小而薄：切块的大小、厚度及 质地决定了固定的效果，一般情况下，取 材大小为2×1cm，厚度为2－4mm。
二、固定（fixation）
固定是将某些化学试剂（固定液）渗透到 需要保存或制作切片的脏器或组织、细胞 中，使其所含物质尽量保持在生活状态时 的形态结构和位置。
激光扫描共聚焦显微镜技术（Confocal Laser Scanning Microscope）集高、精、尖细胞分析
及工程技术于一体的新技术。该仪器突破了普通光 学显微镜不能对细胞或组织内部进行定位检测的限 制，实现了对细胞内部光学断层扫描成像。可检测 细胞内核酸、细胞骨架、细胞内pH、Ca离子浓度、 膜电位、过氧化物、细胞间通讯、细胞筛选及定量 等。为活细胞功能研究开辟了新途径，成为现代细 胞生物学研究不可缺少的的工具。
形态学实验技术
河北联合大学实验中心 李琪佳
重点介绍：
组织切片制作技术
石蜡切片常规染色技术 石蜡切片特殊染色技术
免疫组织（细胞）化学技术
免疫细胞化学的理论基础 免疫荧光细胞化学技术 免疫酶细胞化学技术 亲和免疫细胞化学技术
电子显微镜技术（electron microscope, EM）
1. 透射电子显微镜 2. 扫描电子显微镜 3.电镜技术与生物医学超微结构 4. 细胞超微结构与超微结构病理
固定的目的：
1.迅速防止组织细胞的死后变化,防止自溶 与腐败使之尽量保持生前的形态结构。
2.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪、酶等成 分变为不溶性物质，以保持其原有形态 及特定位置。
3.能将细胞的半液体状变成半固体状，使 组织变硬以利切片。
4.可使组织内的各种成分产生不同的折光 率。
5.某些固定液可起助染作用而增进染色。
组织切片技术包括组织的取材、固定、 脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色 等。
组织病理学标本大致可分为：手术标本、 内镜取材标本、穿刺标本、细胞学标本
第二节 组织的处理
取材 固Biblioteka Baidu 脱水 透明 浸蜡与包 埋
一、取材（ tisssue processing）
1 材料新鲜：活检组织离体后立即固定，最 迟不能高于30分钟。
五、浸蜡与包埋
浸蜡(paraffin infiltrating)和包埋 (embedding)
是指标本经过前期处理后，再置于支持 物中，使支持物透入组织内部，并将组织埋入、 包裹的过程。常用的支持物有明胶、石蜡、火 棉胶、树脂、炭蜡等，他们及时浸透剂又是包 埋剂。其中最常用的是石蜡。
浸蜡的方法
此法应在560C－620C的温箱内进行，液状石蜡 的量应为标本的25－30倍。
2 取材部位及切面：纵切或横切往往是显示 组织结构明晰的关键。掌握正确的取材部 位就必须熟悉机体的组织结构和解剖特点， 原则上应在病变与正常组织的交界处取材， 避开坏死出血区。
，甚至卷曲变形，特别是神经肌肉组织，可将 其两端扎在木片或小木棍上进行固定。 3. 勿使组织受挤压：取材刀剪应锋利，切开时 取材刀严禁来回挫动，以避免组织结构变形、 细胞破碎。
氯仿:易挥发微溶于水，易溶于醇、醚、苯 等。它比二甲苯透明力差，但不宜使组织变 脆，使大块组织的良好透明剂
常用的透明方法
二甲苯透明法（常用）：彻底脱水的组织块 二甲苯1 二甲苯2，此二步总的时间不超 过40分钟。
氯仿透明法：彻底脱水的组织块按 3：1氯 仿、纯酒精混合液1小时 氯仿1 - 2小时 1：1氯仿石蜡混合液1小时。
第一章 组织切片制作技术
第一节概述
组织切片的制作技术属于组织病理学范 畴它是指采用包埋剂使组织内渗入某种支 持物质，使组织保持一定的硬度，然后利 用切片机切成薄片，经染色在显微镜下观 察。根据支持物的不同，有石蜡切片、明 胶切片、塑料切片、冷冻切片等类别。制 成的切片捞置于载物网上，经烘干后可进 行染色或备用。
第三节 组织切片
切片（section） 1.整修蜡块：组织四周应留有2－4 mm 蜡边，
蜡块的上下两边应平行。 2.镶装：镶装平面应尽可能与切片刀刃平行。 3.调整：切片机的进度尺常定在4－6μm，切
流式细胞仪技术（Flow Microfluorimetry）
是一种单细胞定量分析和分选的新技术。 其范围包括了细胞表面或细胞内的各种抗原、 蛋白、酶以及基因表达产物；还有细胞内的核 酸定量或DNA倍体、细胞周期分析；尤其是癌 基因的检测、血细胞表型分析、细胞分子和粘 附分子的检查、细胞凋亡分析、肿瘤相关抗原 及单种细胞的纯化。
固定方法 浸泡固定 注射、灌注固定 微波固定 蒸汽固定
常用的固定剂
单纯性固定剂：甲醛（福尔马林 formalin） 乙醇；乙酸。
混合固定剂：中性甲醛pH 7.0（甲醛、磷酸缓 冲液）；A-F液 （甲醛、酒精）
三、脱水（dehydration）
将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的 过程
片刀的倾斜角在20度左右。 4.修切平面：修切的组织片不能过厚，以免
脱水的目的
标本经固定和水洗后，组织内有大量水份， 不能与二甲苯混溶，因此必须脱水。
常用的脱水剂和脱水方法
脱水剂有：乙醇、丙酮等
80％ 酒精
30 分钟
95％ 酒精
1－2小时
95％ 酒精
1－2小时
100％酒精
1－2小时
100％酒精
1－2小时
四、透明（clearing）
为使石蜡能浸入组织块，组织脱水后必须经 过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂， 而达到石蜡浸入组织块的目的。此时因组织块的 水分被二甲苯取代，其折射指数接近于组织蛋白 的折光指数，组织块变得透亮。因此透明是石蜡 包埋前的一个特定步骤。
透明的目的：便于浸蜡、包埋。透明剂即能与脱水
剂相混溶，又能与包埋剂（石蜡）相混溶，起 到桥梁作用。
大多数脱水剂不能和包埋剂（石蜡）混溶， 故必须通过透明剂置换出脱水剂后才能进行 后续程序。 常用的透明剂
二甲苯：为最常用的透明剂，有毒、易燃、 易挥发；沸点1380C-1400C,长期接触对粘膜 有刺激作用。
4.防止变形：固定后的组织或多或少会产生收 缩现象
5 组织块力求小而薄：切块的大小、厚度及 质地决定了固定的效果，一般情况下，取 材大小为2×1cm，厚度为2－4mm。
二、固定（fixation）
固定是将某些化学试剂（固定液）渗透到 需要保存或制作切片的脏器或组织、细胞 中，使其所含物质尽量保持在生活状态时 的形态结构和位置。
激光扫描共聚焦显微镜技术（Confocal Laser Scanning Microscope）集高、精、尖细胞分析
及工程技术于一体的新技术。该仪器突破了普通光 学显微镜不能对细胞或组织内部进行定位检测的限 制，实现了对细胞内部光学断层扫描成像。可检测 细胞内核酸、细胞骨架、细胞内pH、Ca离子浓度、 膜电位、过氧化物、细胞间通讯、细胞筛选及定量 等。为活细胞功能研究开辟了新途径，成为现代细 胞生物学研究不可缺少的的工具。
形态学实验技术
河北联合大学实验中心 李琪佳
重点介绍：
组织切片制作技术
石蜡切片常规染色技术 石蜡切片特殊染色技术
免疫组织（细胞）化学技术
免疫细胞化学的理论基础 免疫荧光细胞化学技术 免疫酶细胞化学技术 亲和免疫细胞化学技术
电子显微镜技术（electron microscope, EM）
1. 透射电子显微镜 2. 扫描电子显微镜 3.电镜技术与生物医学超微结构 4. 细胞超微结构与超微结构病理
固定的目的：
1.迅速防止组织细胞的死后变化,防止自溶 与腐败使之尽量保持生前的形态结构。
2.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪、酶等成 分变为不溶性物质，以保持其原有形态 及特定位置。
3.能将细胞的半液体状变成半固体状，使 组织变硬以利切片。
4.可使组织内的各种成分产生不同的折光 率。
5.某些固定液可起助染作用而增进染色。
组织切片技术包括组织的取材、固定、 脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色 等。
组织病理学标本大致可分为：手术标本、 内镜取材标本、穿刺标本、细胞学标本
第二节 组织的处理
取材 固Biblioteka Baidu 脱水 透明 浸蜡与包 埋
一、取材（ tisssue processing）
1 材料新鲜：活检组织离体后立即固定，最 迟不能高于30分钟。
五、浸蜡与包埋
浸蜡(paraffin infiltrating)和包埋 (embedding)
是指标本经过前期处理后，再置于支持 物中，使支持物透入组织内部，并将组织埋入、 包裹的过程。常用的支持物有明胶、石蜡、火 棉胶、树脂、炭蜡等，他们及时浸透剂又是包 埋剂。其中最常用的是石蜡。
浸蜡的方法
此法应在560C－620C的温箱内进行，液状石蜡 的量应为标本的25－30倍。
2 取材部位及切面：纵切或横切往往是显示 组织结构明晰的关键。掌握正确的取材部 位就必须熟悉机体的组织结构和解剖特点， 原则上应在病变与正常组织的交界处取材， 避开坏死出血区。
，甚至卷曲变形，特别是神经肌肉组织，可将 其两端扎在木片或小木棍上进行固定。 3. 勿使组织受挤压：取材刀剪应锋利，切开时 取材刀严禁来回挫动，以避免组织结构变形、 细胞破碎。
氯仿:易挥发微溶于水，易溶于醇、醚、苯 等。它比二甲苯透明力差，但不宜使组织变 脆，使大块组织的良好透明剂
常用的透明方法
二甲苯透明法（常用）：彻底脱水的组织块 二甲苯1 二甲苯2，此二步总的时间不超 过40分钟。
氯仿透明法：彻底脱水的组织块按 3：1氯 仿、纯酒精混合液1小时 氯仿1 - 2小时 1：1氯仿石蜡混合液1小时。
第一章 组织切片制作技术
第一节概述
组织切片的制作技术属于组织病理学范 畴它是指采用包埋剂使组织内渗入某种支 持物质，使组织保持一定的硬度，然后利 用切片机切成薄片，经染色在显微镜下观 察。根据支持物的不同，有石蜡切片、明 胶切片、塑料切片、冷冻切片等类别。制 成的切片捞置于载物网上，经烘干后可进 行染色或备用。