小鼠非手术胚胎移植方法

植前注射 １ ． ２ ５ ％的 阿 佛 丁 进 行 麻 醉 （ 每 克 体 重
０ ． ０ ２ ｍ１ ） ，每 只母 鼠移 植 囊胚 ６～１ ０枚 ，分 娩 后 记 录 活仔数 以待 分析 。
１ ． ３ 移 植器 械 的制备 １ － ３ ． １ 玻璃 导管 的制 备 。玻璃 管在 酒精 灯火 焰 上轻
栓０ ． ５ ｄ 。见 栓 ３ ． ５ ｄ时 ，用 颈 部 脱 臼法 处 死 小 鼠， 剪 下 小 鼠的子 宫放 到 盛有 Ｍ２操作 液 的 培 养 皿 中 ， 由宫管 结合部 靠 近子 宫角 侧剪 断子 宫 ，用注 射 器吸
取 Ｍ２操 作液 从 子宫 颈端 冲 出囊 胚 。在 体视 显微 镜
小 鼠作 为发 育 和 生 殖 生物 学研 究
买 的小 鼠普通 繁 殖饲 料 ，均 为 自由采 食饮 水 ，试验
小 鼠 菲 手 术 豚 胎 鹤 植 方 环节离不开胚胎移植技术。小鼠非手 验 的所 有操 作均 获河法 北农 业 大学 实验 室动 物保 护 与
术胚胎移植法是将供体小 鼠的胚胎经
法 进 行 了报 道 ， 随 后 Ｌ ． Ｍａ ｒ ｓ ｋ 、Ｔ ．
Ｄａ ｖ ｉ ｓ 、Ｆ ． Ａ． Ｖ ａ ｎ ｄ ｅ ｒ Ｈｏ ｅ ｖ ｅ ｎ等 也 相 继
对 非手 术 胚胎 移植 法 进 行 了研 究 ，但 直到 １ ９ ６ ４年 才 正 式 应 用 非 手 术 胚 胎 移殖 技 术 ，但 主 要还 是 以牛 的胚 胎 移 植 为主 ，本文 主 要 介绍 了小 鼠非手 术 胚 胎移 植 的整 个 过 程 ，让 我们 对 非手 术胚 胎移 植方法 有 一个基 本 的认 识 。
烤 使之软 化 ，离 开火焰 迅 速用 镊子 拉伸 玻璃 管 ，最
４ － ３ 元 青 山 林 场 落 叶 松 白 桦 混 交 林 碳 总 量 为
２ ２ ９ ． ３ ６ ｔ Ｃ ／ ｈ ｍ２ （ 生物碳 ＋土壤碳） 。生物碳 ５ ４ ． ２ ６ ｔ Ｃ ／ ｈ ｍ ，
占碳 总量 的 ２ ３ ． ６ ６ ％；土 壤碳 １ ７ ５ ． １ ｔ Ｃ ／ ｈ ｒ ｎ ２ ， 占碳 总
量的 ７ ６ ． ３ ４ ％。 １ ６ ４ １ ０ ０ 黑龙 江省五 大连 池市元 青 山林场 陈康柏
１ ６ １ ０ ０ ５ 黑龙 江省森 林与 环境科 学研 究 院 李 峰 肖 楠
知 ，元青山林场落叶松、 白桦人工林枯枝落叶及土 壤碳 总储 量 为 １ ７ ５ ． １ ｔ ￣ ｌ ｒ ｆ ｌ ２ ， 其 中 土 壤 碳 储 量 １ ４ ９ ． ６ １ ｔ ／ ｈ ｎ ． １ ２ ， 占枯枝落 叶及土壤 碳 总量 ８ ５ ． ４ ４ ％， 主要 集 中在 Ａ 层 （ Ａ ３ ６ ｃ ｍ） 。该 林 分 抚 育 经 营状 况
４ 结 论
４ ． １ 元青 山林场人工落 叶松与 白桦混交林 每公顷 的 生物 碳 储 量 为 ５ ４ ． ２ ６ ｔ ， 平均 每 年 每 公 顷的 固碳
量为 ２ ． １ ７ ｔ 。碳 储量 与 生 物 量成 正 比 ， 以树 干 、树 根 、树 枝 、树叶 的顺序 由高 到低排 列 。 ４ ． ２ 元 青 山林 场 落 叶 松 、 白桦 人 工 林 枯 枝 落 叶 及
１ 试 验 准备
下用 口吸 管将 形态 正常 的囊胚 依 次转移 到 几滴 大 小
均匀 的 Ｍ２操 作液滴 中洗 涤干 净 ，待后续 试验 。 挑选 发情 状 况 良好 的母 鼠与结 扎 公 鼠合 笼 ，如 果 结扎 公 鼠的数 目有 限 ，可按 １： ２合 笼（ ｇ ０ 一 只公 鼠与 两只 母 鼠合 笼） ，合 笼 的 第 二 天清 晨 检 查 阴道
移植方法。它与手术法相 比，简单快 捷 ，对 小 鼠 的损 伤 小 ，大大 简 化 了胚 胎 移植 的操 作过程 。早 在 １ ９ ５ １ 年 ，Ｒ．
Ａ． Ｂ ｅ ａ ｔ ｔ ｙ首先 对 动 物 非 手 术 胚 胎 移 植
的 比例 与 正常 公 鼠合 笼 ，第 二天清 晨观 察母 鼠阴道 栓来确 定 是否 交 配 ，见栓 即作 为供 体 小 鼠，记 为见
子 宫颈 移植 到 受体 小 鼠子 宫 内 的一 种
使用 委 员会许 可 ，符 合动物 试验 的 ３ Ｒ 原则 。 １ ． ２ 胚 胎 与受 体 准 备 。将 自然 发情 的母 鼠按 １： １Hale Waihona Puke Baidu
中最常见的模式动物 ，其研 究的主要
动物 房 由专人 清 洁 打扫 ，保证 环境 的清洁 卫生 。试
好 ，林地 土 壤深厚 、肥 沃 ，林木 生长 良好 ，碳 储 量 较 高 。元 青 山 林 场 落 叶 松 白桦 混 交 林 碳 总 量 为 ２ ２ ９ ． ３ ６ ｔ Ｃ ／ ｈ ｍ （ 生 物 碳 ＋土 壤 碳 ） 。 其 中 ， 生 物 碳
５ ４ ． ２ ６ ｔ Ｃ ／ ｈ ｍ２ ， 占碳 总 量 的 ２ ３ ． ６ ６ ％ ； 土 壤 碳 １ ７ ５ ． １ ｔ Ｃ ／ ｈ ｍ２ ， 占碳 总量 的 ７ ６ ． ３ ４ ％。
栓 ，见 栓 的 母 鼠记 为 假 孕 ０ ． ５ ｄ 。依 次 类 推 至 假 孕
２ ． ５ ｄ ，即可进 行 非手 术胚 胎移 植 。假 孕 的母 鼠在移
１ ． １ 供 试 小 鼠。试 验 所 用 小 鼠为 ６ ～ ８周龄 的 Ｃ Ｄ． １ 品系小 鼠，购 自北 京 维 通 利 华实 验 动物 技 术 有 限公 司 。试 验 动 物 房 保 持温 度 为 ２ ２℃ ～２ ５℃ ，湿 度为 ５ Ｏ ％ ～６ ０ ％ ，采 用 １ ２ Ｌ ：１ ２ Ｄ 的 循 环 光照 制 度 。试 验 小 鼠饲 喂 商业 购 ３ ． ２ 元 青 山林场 落 叶松 、 白桦 人工 林 枯 枝 落 叶和 土 壤碳储 量 。元青 山林场 落 叶松 、 白桦人 工林 枯枝 落 叶 和 土 壤 碳 储 量及 空 间 分 布 见 表 ３ 。 由表 ３可