流式细胞术基本原理(完整)PPT参考幻灯片

488 nm laser
- Charged Plates
Single cells sorted into test tubes
FALS Sensor Fluorescence detector
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流式细胞术流程
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应用
• 细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性 • 细胞内离子浓度：H+、Na+、K+和Ca2+ • 细胞周期：全周期分析、S期分析、M期分析 • 细胞表面蛋白质分析：免疫细胞分型、其他表面
流式细胞术的基本原理
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流式细胞术（flow cytometer，FCM）：
利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态 中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参 数、快速的定性、定量分析或分选的技术。
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流式细胞仪：是集现代物理电子技术、激光
技术、光电测量技术、计算机技术以及细 胞荧光化学技术、单克隆抗体技术于一体 的先进科学技术设备
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流式细胞仪分为四部分：
1）流动室与液流系统 2）光源与光学系统 3）信号收集、转换与分析系统 4）细胞分选系统
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1）流动室与液流系统
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2）光源与光学系统
激光（单色性、单向性） 前向散射（FSC）
侧向散射（SSC）
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激发波长 发射波长
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3）信号收集、转换与分析系统
• 激发波长经过滤光片分离不同波长的光信 号分别到达不同的光电倍增管(PMT)，PMT 将光信号转换成电信号，电信号输入到放 大器放大。
蛋白分析 • 细胞功能：如凋亡、抗药性 • 基因表达：内源及外源基因表达 • 细胞分选 • 细胞克隆
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• 放大器分两类：线性放大和对数放大。 • Biblioteka Baidu胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量
等的测量一般选用线性放大测量。 • 细胞膜表面抗原等的检测，由于表面抗原的
分布有时要相差几十倍，甚至几万倍，故取 对数放大。
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光谱重叠与荧光补偿
• 实际中激发波长是正态或偏态曲线，荧光 素之间的波谱常有重叠，故流式细胞仪加 入了电子补偿系统，去除因光谱重叠而进 入其他荧光探测器的荧光信号，即荧光补 偿。
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流式细胞术的对照设置
阴性对照：调节荧光探测器合适的放大倍 数，将仪器归零，确定样本的基础荧光域 值
阳性对照：检测抗体是否有问题或确定实 验方法的稳定性、准确性
空白对照：不标记，自发荧光 PS：补偿对照：多色分析样本时为荧光光谱
重叠进行的的补偿调节
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4）细胞分选系统
• 根据某参数决定细胞液滴是否被分选，然 后由充电电路对其充电，带电液滴通过静 电场发生偏转而分离