肠道菌群PPT课件

MPN法检测的隐性成本
产品的大肠菌群标准为30 MPN/100 g，而某个样品的 检测结果为90 MPN/100 g，那么你可能会认为你的产 品不合格。但是，让我们看一下90 MPN/100 g的置信 区间，为10 ~ 360 cfu/100g，也就是说有部分结果为90 MPN/100 g的产品，且实际菌落数在10~30 cfu/100g之 间，会被当作不合格产品处理。
用1理盐水或其它稀释液的试管内，振摇试管混 匀．作1：10的稀释液。
另取1m1灭菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释 液，每递增稀释一次，换用 1支1m1灭菌吸管：
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其 他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类 群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、 硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。）的数量 和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌 群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果 也较粗放。
食品中大肠菌群数系以mL(g)检样内大肠菌群 最可能数(MPN)表示。
第一法
大肠菌群计 数MPN法
抑菌剂的选择
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫 酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。
抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌，特别是革兰氏 阳性菌的生长。国家标准中LST肉汤利用十二烷基硫 酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑 菌剂。
2．培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基和 麦康凯培养基上生长良好，为中等大小的光滑型菌 落。有些菌在血琼平板上出现β型溶血，在液体培 养中呈均匀混浊生长。
3．生化反应：发酵葡萄糖，氧化酶阴性。生化反应 活泼，一般说来，生化反应的强弱与其致病作用成 反比。
肠道杆菌流行病学
抵抗力：不强，加热60℃经30分钟即死亡。不耐干 燥,胆盐、煌绿等对大肠杆菌等非致病菌有选择性作 用，可制备肠道杆菌选择性培养基以分离肠道致病 菌。对一般化学消毒剂如漂白粉,酚,甲醛均敏感,对 低温有耐受力.
阳性管数为“0-3-0” 对应的最大概率（Pmax）为 0.00417%，而国标中并没有列出相应的95%置信 区间，是考虑到该置信区间过广，已没有很大的 指导意义。
阳性管数为“2-0-0”的最大概率（Pmax) 为 31.91613%，表明实际的菌落数在10~360 cfu/100 ml(g）之间。
临床意义:肠杆菌科细菌可致化脓性疾病,肺炎,脑膜 炎,败血症以及伤口,泌尿道和肠道的感染,本科细菌 占临床分离细菌总数的50%和临床分离的革兰氏阴性 菌总数的80%,将近50%的败血症,70%以上的泌尿道感 染是由肠杆科细菌引起.
传播方式：污染的饮水及食物、经消化道传播。
肠杆菌科中与卫生医学有关的细菌
MPN法的原理
MPN法的局限性——相同MPN值，但含义不同
MPN值为90时，有四种不同情况的阳性管数。 阳性管数为“0-0-0”“0-1-2”对应的最大概率 （Pmax）极小，此时的MPN值 90 MPN/100 ml(g）无意义，所以在《FDA细菌学手册》中， 已删除了这两种情况。
MPN法的局限性——相同MPN值，但含义不同
大肠菌群为革兰氏阴性菌
一、大肠菌群检验
第一法 大肠菌群MPN法 第二法 大肠菌群平板计数 快速法 大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法
MPN
最大或然数（most probable number，MPN）计数又称稀释培 养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势， 但却具有特殊生理功能的类群
初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
肠道致病菌 肠道非致病菌
多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖
4、抗原构造复杂 5、抵抗力 不强
6、易变异
通过
接合 转导 溶源性转换
引起
耐药性变异 毒力性变异 生化反应性变异
肠道杆菌生物特征
1．形态与结构：中小等大小两端钝圆的革兰氏阴性 杆菌，无芽胞，多数有鞭毛，大多有菌毛，少数有 荚膜或包膜。
30 MPN/100 g的置信区间为<5~90 cfu/100 g （阳性管数 0-0-1）或<5~130 cfu/100 g （阳性管数0-1-0）。也就是 说部分实际菌落数为30~130 cfu/100g的产品，会被当 作合格产品，从而微生物风险增加。
大肠菌群
大肠菌群系指一群在36℃能发酵乳糖、产酸产 气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污 染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有 否污染肠道致病菌的可能。
抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠 菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌 株有时也产生一些抑制作用。
检样稀释
以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌 生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适 当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨 作成1：10的均匀稀释液。调pH为6.5～7.5。
所以，测定MPN值时，要考虑阳性管数。相同的 MPN值，代表的实际菌落数范围却有很大的差别。 假如你的产品标准为100 MPN/100 g，实测值为90 MPN/100 g （阳性管数“0-3-0”），那么很难判定 你的产品是否合格。
MPN值的准确度随PMAX的减小而减小
不同MPN值对应的Pmax值不同，且随着Pmax 值的减小，MPN值的准确度也明显下降，所以 在《FDA细菌学手册》中已删除了极低Pmax值 （<0.004%）的情况，因为这些Pmax值对应的 MPN值没有实际的指导意义。
肠道菌群
肠道杆菌(ENTERIC BACILLI)
一大群居住在人和动物肠道中 生物学性状近似的革兰阴性杆菌
属于肠杆菌科 多数是肠道的正常菌群，
少数为致病菌，是胃肠传染病的最重要病原菌
至少有30个菌属，120个以上的菌种
共同特性
1、相似的形态染色
2、简单的培养条件
3、活泼的生化反应 乳糖发酵试验
重要试验