液相色谱使用注意事项整理

液相色谱使用注意事项

重点1：大容量瓶中的管不能长时间浸泡在水或者缓冲盐中，易产生微生物使头堵塞，并且浓度达不到所设定的要求，易产生拖尾现象。包括其他瓶中装有酸碱盐时，需用水大量冲洗，再放入有机溶剂中。只要换个流动相就需将头都清洗一遍，并保存。

正确使用方法：用15%-20%硝酸，浸泡2小时，取出，完全用水置换再进行超声（10-30分钟），再用100%有机溶剂（例甲醇）再超声10-20 min，最后将头浸入有机溶剂中。

重点2：在流动相中预先加入酸（甲酸、乙酸）或碱，以消除氢键的作用。酸中的COO-和OH-愈合，先产生氢键导致样品本身没有产生氢键的途径。流动相中pH约为2.8。因此加碱时需注意，一般加三乙胺。磷酸较好，他在紫外区超低吸收。

流动相要现用现配。娃哈哈虽干净，但内部含有颗粒，建议过滤。如果检测波长在210-220 nm时用娃哈哈可以，但检测波长在254 nm或280 nm时，用一次蒸馏水过滤没问题。低波长容易引起基线不稳。越干净的水意外峰出现的情况越少。

重点3：实验后用洗瓶连续洗头儿，再在烧杯水中晃动清洗多次，将头中的磷酸清洗干净，90-95%的水+10%的甲醇。实验数据不好可能就是头被污染了。

重点4：设定梯度洗脱程序时，最后浓度要回到原始浓度，再继续保持10-15 min。针与针之间保持10-15 min。多查国外核心期刊。

建议：20 min, 10%-40%;30 min,40%;35 min,10%;50 min,10%。

重点5：假如最近样品做的较多（无论什么样品），用甲醇60%-70%，四氢呋喃或乙酸乙酯冲洗柱子，因为天然物中的弱极性组分还会残留在柱子中，用100%的乙腈冲洗不掉，冲洗不超过30 min。建议不要用三氯甲烷。比例建议50：50或60：40。二种试剂要混合（不能单独用三氯甲烷）超声处理，再进行冲洗柱子，30min。

重点6：单一溶剂不需要超声，混合溶剂需要超声。水最好是现蒸，开盖就用。水中有气泡出现，可能就是头堵塞了。装瓶是如果发现气泡可以倒几下，甩掉气泡，不必小心翼翼。加样是用漏斗沿着内壁缓缓倒入瓶内，注意细节。

重点7：乙腈价格是甲醇的好几倍，建议使用甲醇。

重点8：国标、分析类的核心期刊——色谱杂志、分析实验室、分析科学、分析化学、药物分析、中成药及中草药等。

重点9：定性时，信噪比≥3；定量时，信噪比≥10。

重点10：标样为啥出来两个峰：1.色谱柱有问题……

补充：

1、柱子下方的小瓶，最好三天换一次；可以用10%甲醇；

2、R瓶是用来冲洗针头的，通常是50%水+50%甲醇，但最好要随样品进行浓度调整；

3、100%甲醇冲洗柱子时，注意压力稳定，要记录，如果压力发生变化说明设备存在问题；

4、测定样品时，最好测溶剂的空白；

5、需要准备2个250 mL（内装100%甲醇），装水瓶的头。