实训四病毒的鸡胚接种技术.ppt

实训四 病毒的鸡胚接种技术
实训四 病毒的鸡胚接种技术
主Байду номын сангаас内容
• 目的要求 • 仪器及材料 • 方法与步骤 • 病毒的收获 • 注意事项
实训四 病毒的鸡胚接种技术
一、目的要求
掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法， 明确鸡胚培养病毒的应用。
实训四 病毒的鸡胚接种技术
二、仪器及材料
9-12日龄鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋架、胶头滴管、一 次性注射器（1ml）、中号镊子、眼科镊（或眼科剪）、 酒精灯、蜡、锥子、高压蒸汽灭菌器、生理盐水、5%碘酊 棉球、75%酒精棉球、5%石炭酸或3%来苏儿、新城疫Ⅳ系 疫苗、青霉素瓶、水盘等。
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四、病毒的收获
然后破羊膜收获羊水，收获的尿囊液和羊水应清亮，浑浊 说明有细菌污染。收获的病毒经无菌检验合格者冷冻保存。 用具消毒处理，鸡胚置消毒液中浸泡过夜或高压灭菌，然 后弃掉。
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五、注意事项
• 鸡胚接种需严格的无菌操作，以减少污染。 • 操作时应细心，以免引起鸡胚的损伤。 • 病毒培养时应保持恒定的适宜条件，收毒结束，注
意用具、环境的消毒处理。
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六、布置作业
将试验结果正确写入试验报告中，完成试验 报告内容。
• 封孔
接种病毒完成后，用熔化的石蜡将小孔封闭。
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三、方法与步骤
• 继续孵化与照胚
封孔完成后，将鸡胚置温箱中直立孵化3～7d。孵化期间，每 6h照蛋一次，观察胚胎存活情况。弃去接种后24h内死亡的 鸡胚，24h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4h或过夜 （气室朝上直立），一定时间内不能致死的鸡胚也放冰箱 冻死（新城疫Ⅳ系疫苗株一般培养至72小时）。
实训四 病毒的鸡胚接种技术
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三、方法与步骤
• 消毒
在接种部位（气室）先后用5%碘酊棉球和75%酒精棉从中央 向四周进行消毒。
• 打孔
用灭菌的锥子在事先消毒的部位打一小孔。
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三、方法与步骤
• 接种NDV
无菌操作用一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插 入气室,刺入尿囊腔，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
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四、病毒的收获
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四、病毒的收获
绒毛尿囊腔接种新城疫病毒时，一般收获尿囊液和羊水。 将鸡胚取出，无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳 膜，形成直径1.5～2.0cm的开口。用灭菌镊子夹起并撕开 或用眼科剪剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管 从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素瓶或试管内。
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三、方法与步骤
鸡胚结构示意图
1. 气室 8.羊水腔
2. 胚壳
9.绒毛尿囊膜
3. 卵黄囊
4. 清蛋白
5. 尿囊腔
6. 壳膜
7. 胚体
实训四 病毒的鸡胚接种技术
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三、方法与步骤
• 照蛋
以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及 日期气室朝上立于蛋架上。尿囊腔接种选9～12日龄的鸡 胚，接种部位可选择在气室中心或远离胚胎侧气室边缘， 避开大血管。