血液制品的生产工艺及产品安全性-1

HIV-1/2抗体 丙肝抗体 乙肝表面抗原 HCV RNA HBV DNA HIV-1 RNA
血浆样品
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确保质量和安全性的措施
捐献后信息（PDI） 任何有关捐献者或捐献物的信息，都将作为捐献后信息，可影响血 浆产品的质量和/或安全： - 延缓出现的症状 - 错误放行 - 反馈通知 （捐献者血清转化、可疑的输血后感染） - CJD / vCJD
黄病毒科
40 - 60 牛病毒性腹泻 (BVDV) , 丙肝，西尼罗病毒
疱疹病毒科
100 - 180 1型和2型疱疹，HHV-8, 伪狂犬病
痘病毒科
~250 x 350
牛痘、天花
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病毒大小
病毒大小
某些病毒具有和蛋白相似的“大小” (流体直径)
分 子 量 [log]
40
直径2Rs [nm]
病毒过滤研究的挑战
6
经销商到患者的物质流程图
分销至客户
分销至患者
销售渠道的责任
7
可溯源性
通过文档记录追踪每一份产品流向
捐献者
捐献者身份识别 将捐献者和捐献物相关联
批次追踪
捐献列表 患者
运输
患者资料
分销
8
生产过程
9
普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分馏 批量生产 无菌灌装
灯检 包装
生产过程
10
普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分馏 批量生产 无菌灌装
是蛋白质！ 因此，病原体灭活就像走钢丝，总有一定的风险！
怎样在不影响产品 “生物体”成分的前提下灭活病原体？
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病原体灭活
可采用以下方法： • 溶剂/清洁剂处理 • 低pH值培养 • 巴氏灭菌 • UV / γ照射 • 化学修饰
7.5
5.0
Log TCID50
2.5
0.0 0
低pH值灭活HIV
灯检 包装
批量生产
中间产物到最终剂型
• 减少杂质 (蛋白) • 减少沉淀剂(乙醇) • 浓缩 • 病原体安全性 • 稳定性
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批量生产
减少杂质 (蛋白、脂类、IgA等)
• 进行沉淀
减少沉淀剂 (乙醇)
• 超滤 / 渗析
浓缩 ( 2%到25 %)
• 超滤
病原体安全性
• 巴氏灭菌 60 °C加热，10小时 • 病毒灭活
HIV-1/2抗体 丙肝抗体 乙肝表面抗原
• 小样本核酸检测 （NAT） : HIV-1 RNA HCV RNA
HBV DNA HAV RNA B19病毒DNA
排除反应呈阳性的捐献者
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过程控制 （生产过程）
对混合血浆样本原料进行病毒标志物和病毒遗传物质检测
• 对所有生产混合血浆样品进行血清学/ 核酸检测:
恒温室
保持温度30-32°C
生产过程
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普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分馏 批量生产 无菌灌装
灯检 包装
灯检
在灌装前，对所有空瓶进行100%的控制 对介质灌装进行100%控制
在包装前，对所有已灌装的瓶子进行100%的控制 对所有溶剂进行100%控制
例子:
24
例子:
生产过程
25
普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分离 批量生产 无菌灌装
评估所有受影响中间产品和成品的风险，如有需要，采取适当的 措施
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生产期间的安全措施
有三种不同的机制来消除生产过程中潜在病毒，即
隔离 灭活 根据大小进行消除
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通过隔离减少病原体
起始材料
中间产物
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废料和病原 体
层析法 分馏
离心分离
深层过滤 等……
病原体灭活
病原体灭活的主要目标是目标物质中所含有的、同一级别的分 子，即:
料)
保存期限: 10年
美国联邦法规
• 没有明确指定运输温度；在储存或运输期间，若不慎暴露于一定范围内的 高温，可被接受。
4
从捐献者到生产厂物质流程图
捐献者筛查
血液/血浆采 集
捐献物测试
血浆放行
运输到生产厂
采集机构的责任
5
从生产厂到经销商的物质流程图
原材料放行
生产
质量控制 wk.baidu.com试
产品放行
运输到市场
生产厂的责任
冷冻条件取决于预制备的血浆制品
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血浆冷冻及储存条件
新鲜冷冻血浆
(从全血捐献或血浆分馏置 换法制得，用于静脉输注)
与红细胞分离后8小时内置于 保存期限:
冰箱内，储存在-18°C 或更低 自采集之日
温度
起1年
美国联邦法规
单采血浆
灌装后立刻储存于-20°C或更
(通过血浆分离置换法采集， 低温度
用作生产注射产品的原材
灯检 包装
包装
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预印
贴标 单件包装 运输包装 货盘装运
白蛋白
•
白蛋白适用于因失血或烧伤导致休克的
病人，也适用于危急情况，如ARDS、心肺分
流术、急性肝衰竭、肾病、和新生儿的溶血
性疾病。
•
人血清白蛋白作为一种赋形剂，同时在
医疗发展和生产多个领域具有良好的使用价
值。
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确保质量和安全性的措施
符合药品生产质量管理规范(GMPs) 企业自愿采取的措施(例如，血浆编目保存、核酸检测) 捐献后信息 上市后药物监测
(药物警戒)
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强化安全观念降低风险
群体
捐
不
血
相 关 风
献 者 筛
液 PCR 测测
病 毒 消 除
同 批 次
试试
险
查
隔
离
收集&生产过程
患者
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捐献者筛查
筛查过程可确保排除高风险行为捐献者：
捐献者教育 捐献者问卷调查 体格检查 隐私自我排除
排除有风险的捐献者
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捐献物测试
• 对每一份捐献物进行血清学检验:
规模 缩小
20 m2
14 cm2
生产和实验室规模的关键参数必须相同：压力、蛋白浓度、 pH值、每平方米过滤面积的容量。
41
感谢您的关注!
42
灯检 包装
分馏
• 基础分馏
• 血浆到中间产品
制备血浆
融化
离心分离
冰冻沉淀物
过滤
沉淀物A
VIII因子
沉淀物IV
过滤
沉淀物C
过滤
过滤
沉淀物B
过滤
沉淀物GG
白蛋白
11
IVIG（免疫球蛋白）
基础分馏
血浆鉴定
混合
分馏: - 沉淀 - 过滤
12
血浆蛋白
醋酸薄膜电泳
Α2 Β
Α1 球 球
球
蛋蛋
γ 球
白
蛋
白白
蛋
蛋白
白
白
基础分馏
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基础分馏
蛋白质溶解度
参数:
pH
温度
乙醇浓度
离子强度
蛋白浓度
7.4到4.0 0°C到-7°C 0到40 % 0.14到0.005
5.7到1.0 %
E.J. Cohn, L. E. Strong, W. L. Hughes, D. J. Mulford, J. N. Ashworth, M. Melin, H. L. Thaylor；血清和血浆蛋白的制备和特性。一个将生物组织和液体 分成蛋白和脂蛋白两部分的分离系统。； 美国化学学会杂志 68, 459-475 (1946) P.Kistler, H.Nitschmann; 人血浆成分的大规模生产；血液之声 7, 414-424 (1962)
稳定性
• 辛酸、色氨酸
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批量生产
20
沉淀物C再悬浮 过滤 中和
超滤/透滤
最终剂型
生产过程
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普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分馏 批量生产 无菌灌装
灯检 包装
灌装过程
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洁净等级 C级房间
洁净等级 A/B级房间
批量储存
无菌过滤 无菌灌装
配塞
无菌塞子 清洗和消毒瓶子
A级空气供应
轧盖
E级房间 巴氏灭菌（60 °C，10小时）
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基础分馏
• 白蛋白溶解度
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乙醇浓度
基础分馏
生产设备
初始血浆容量 最终沉淀容量 过滤面积 沉淀物重量
4000 L 8000 L 40 – 60 m2 250 – 350 kg
中间产品 (沉淀物)
冷冻, - 20°C 储存, 1到2年
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生产过程
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普通血浆
特定血浆
制备血浆 基础分馏 批量生产 无菌灌装
100 200 300 400
分钟
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病原体灭活
溶剂/清洁剂: S/D介导破坏包膜
例如 - Triton-X100 / 磷酸三丁酯 - 胆酸盐 / 磷酸三丁酯
胆酸盐
仅对有包膜的病毒有效!
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TX-100 TNBP
病毒大小
细小病毒科
18 - 25 B19V, 鼠微小病毒（MVM）
小核糖核酸病毒科 ~30 甲肝，脊髓灰质炎
血浆制品的生产工艺及产品安全性
Uwe E. Jocham
药剂师 制药工程药剂师
1
血浆分离置换法生产血浆
PCS2生理盐水回流一次性装置 AC接口
生理盐水接口
血液过滤器
全血入
血浆 富含血小板血浆
白细胞 红细胞
吹塑筒 收集容器
去除部分
DPM过滤器 针头适配器
2
血浆冷冻及储存条件
关于冻存条件的特殊规定指南： • 欧洲药典“用于分馏的血浆”（0853） • 美国食品药品监督管理局联邦法规第21篇第640部分“血液和 血液制品的其他标准”，§ 640.34, 640.69