目的基因的获得
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所以目的DNA片段的获得是进行 DNA重组的前提。
（一）DNA片段的获得
1、从基因所在的生物体直接取得
限制性内切酶（restriction enzymes）
2、人工合成DNA片段（DNA合成仪）
3、PCR反应合成DNA
4、 mRNA反转录成cDNA 5、用机械的方法
粘性末端、平整末端 200多种限制性内切酶，切点各不相同
目前用基因工程生产的蛋白质药物已达数十种，许多以前 本不可能大量生产的生长因子，凝血因子等蛋白质药物， 现在用基因工程办法便可能大量生产。
连接酶
（3）、分段合成，结合PCR技术 PCR
方法三、PCR技术 （1）、直接从原核微生物细胞或质粒 中扩增目的片段
（2）、引入突变
a、引物5’端引入 b、定点突变，SOE技术 c、易错PCR
方法四、RT-PCR技术
针对真核生物基因不连续的特点，利用mRNA为核 苷酸信息资源，用逆转录---PCR法获得目的基因
DNA长度太大。
（2）、从染色体以外的遗传物质中 获得目的基因是常用的做法
方法二、化学合成法
人工合成寡聚核苷酸技术：<60bp 在60bp与120bp之间
1.2元/bp 6.8元/bp
提供DNA合成服务的公司： 上海生工生物工程有限公司 上海英俊生物科技有限公司 上海华诺生物科技有限公司 北京奥科生物技术有限责任公司 等
特点： 1、 合成的产物是单链DNA
2、 5’、3’末端均为羟基
3、应用场合： 真核生物基因在原核中表达； 难以得到模板的情况；
获得双链的方法：
（1）、3’末端部分反向互补，混 合后在DNA聚合酶作用下互为模 板形成双链
（2）分段合成法 OH，先用激酶处理，使磷酸化
OH，先用激酶处理，使磷酸化
1.基因工程用于生产蛋白质类药物
治疗糖尿病的胰岛素，是一种 51 个氨基酸残基组成的蛋 白质
1982 年美国 EliLilly 公司推出基因工程制造的人胰岛素， 商品名为(Humulin)。
干扰素用于治疗肝炎等病毒感染性疾病，有良好疗效。
1 升发酵液中所得的干扰素相当于过去从 1000 升人血中 所得。生产成本也大为降低。
基因工程技术（三）
获得目的基因的方法
前言
基因工程技术又称为重组DNA技术， 指将某些特定的基因或DNA片断，通过载 体或其它手段送入受体细胞，使它们在受 体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。
所以目的DNA片段的获得是进行DNA 重组的前提。
方法一：直接从细胞中提取、酶切
特点：
（1）、如果从基因组DNA获取目的基因 相对于目的基因的长度，基因组的
5’
AAA…AAA 3’
wk.baidu.com
T T T…T T T
Complimentary DNA
RT：Reverse Transcriptase
Summary: 1、细胞中提取； 2、化学合成； 3、PCR技术； 4、RT-PCR
前言
基因工程技术又称为重组DNA技术， 指将某些特定的基因或DNA片断，通过载 体或其它手段送入受体细胞，使它们在受 体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。
（二）DNA片段和载体的连 接
——重组体DNA
载体：细菌中的质粒、温和噬菌体
重组体DNA：载体DNA+引入的DNA
粘性末端 平整末端 连接酶
目的基因的表达
目的基因在插入载体后，在其编码 顺序的5’端有能被受体细胞识别的 启动基因顺序及能和核糖体结合的 顺序。则该目的基因就可以表达， 从而使是因工程得以实现。
（一）DNA片段的获得
1、从基因所在的生物体直接取得
限制性内切酶（restriction enzymes）
2、人工合成DNA片段（DNA合成仪）
3、PCR反应合成DNA
4、 mRNA反转录成cDNA 5、用机械的方法
粘性末端、平整末端 200多种限制性内切酶，切点各不相同
目前用基因工程生产的蛋白质药物已达数十种，许多以前 本不可能大量生产的生长因子，凝血因子等蛋白质药物， 现在用基因工程办法便可能大量生产。
连接酶
（3）、分段合成，结合PCR技术 PCR
方法三、PCR技术 （1）、直接从原核微生物细胞或质粒 中扩增目的片段
（2）、引入突变
a、引物5’端引入 b、定点突变，SOE技术 c、易错PCR
方法四、RT-PCR技术
针对真核生物基因不连续的特点，利用mRNA为核 苷酸信息资源，用逆转录---PCR法获得目的基因
DNA长度太大。
（2）、从染色体以外的遗传物质中 获得目的基因是常用的做法
方法二、化学合成法
人工合成寡聚核苷酸技术：<60bp 在60bp与120bp之间
1.2元/bp 6.8元/bp
提供DNA合成服务的公司： 上海生工生物工程有限公司 上海英俊生物科技有限公司 上海华诺生物科技有限公司 北京奥科生物技术有限责任公司 等
特点： 1、 合成的产物是单链DNA
2、 5’、3’末端均为羟基
3、应用场合： 真核生物基因在原核中表达； 难以得到模板的情况；
获得双链的方法：
（1）、3’末端部分反向互补，混 合后在DNA聚合酶作用下互为模 板形成双链
（2）分段合成法 OH，先用激酶处理，使磷酸化
OH，先用激酶处理，使磷酸化
1.基因工程用于生产蛋白质类药物
治疗糖尿病的胰岛素，是一种 51 个氨基酸残基组成的蛋 白质
1982 年美国 EliLilly 公司推出基因工程制造的人胰岛素， 商品名为(Humulin)。
干扰素用于治疗肝炎等病毒感染性疾病，有良好疗效。
1 升发酵液中所得的干扰素相当于过去从 1000 升人血中 所得。生产成本也大为降低。
基因工程技术（三）
获得目的基因的方法
前言
基因工程技术又称为重组DNA技术， 指将某些特定的基因或DNA片断，通过载 体或其它手段送入受体细胞，使它们在受 体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。
所以目的DNA片段的获得是进行DNA 重组的前提。
方法一：直接从细胞中提取、酶切
特点：
（1）、如果从基因组DNA获取目的基因 相对于目的基因的长度，基因组的
5’
AAA…AAA 3’
wk.baidu.com
T T T…T T T
Complimentary DNA
RT：Reverse Transcriptase
Summary: 1、细胞中提取； 2、化学合成； 3、PCR技术； 4、RT-PCR
前言
基因工程技术又称为重组DNA技术， 指将某些特定的基因或DNA片断，通过载 体或其它手段送入受体细胞，使它们在受 体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。
（二）DNA片段和载体的连 接
——重组体DNA
载体：细菌中的质粒、温和噬菌体
重组体DNA：载体DNA+引入的DNA
粘性末端 平整末端 连接酶
目的基因的表达
目的基因在插入载体后，在其编码 顺序的5’端有能被受体细胞识别的 启动基因顺序及能和核糖体结合的 顺序。则该目的基因就可以表达， 从而使是因工程得以实现。