V_C纳米脂质体悬浮液及其前体脂质体的制备与稳定性研究_鲍士宝

suspension.
Key words： VC nanoliposomes suspension； proliposomes； preparation； stability
中图分类号： TS202.3
文献标识码： B
文 章 编 号： 1002－0306（ 2013） 03－0228－05
VC 是一种水溶性维生素，具有强还原性，被广泛 应用于食品、药品和化妆品中，保护其他有效成分不 被氧化、抑制酶促褐变或脱色、营养强化等［1］。但 VC 对光、氧、pH 以及温度等环境条件非常敏感，易氧化 变质，因 此 其 贮 藏 稳 定 性 是 一 个 需 要 解 决 的 问 题［2－4］。为了提高 VC 的 稳 定 性 和 利 用 率，有 关 研 究 人员利用各种脂质体自组装技术制备了 VC 脂质体， 以期提高 VC 的稳定性，但已有的研究报道中制备的
1.2 实验方法
1.2.1 VC 纳米脂质体悬浮液及其前体脂质体的制备 1.2.1.1 单因素实验 采用乙醇注入法制备 VC 纳米 脂质体悬浮液，操作如下：
称取一定 质 量 的 VC 和 Tween80 溶 解 于 40mL、 pH6.5、0.05mol / mL 的 Na2 HPO4 － KH2 PO4 缓 冲 液 （ PBS） 中。另称取 400mg 蛋黄卵磷脂和一定量的胆 固醇溶解于 8mL 的无水乙醇中。用注射器将上述脂 质乙醇溶液快速注入溶有 VC 和 Tween80 的 PBS 中， 控制水合温度，水合一定时间，得到 VC 脂质体悬浮 液。将悬浮液移入 150mL 圆底烧瓶内，经 40℃ 减压 旋转蒸发 15min，挥去残留乙醇。
9∶10
57
用于性质研究的 VC 纳米脂质体悬浮液为上述
优化后的最 佳 工 艺 制 备 所 得，为 了 获 得 粒 径 较 小 的
VC 纳米脂质体悬浮液，采用 100MPa 高压均质循环
处理 3 次。
1.2.1.3 VC 前体脂质体的制备 参照 1.2.1.1 中的操
作，向 PBS 中添加 1600mg 海藻糖，按照 1.2.1.2 中的 最佳工艺制备得到含海藻糖的 VC 纳米脂质体悬浮 液。将此悬浮液装于安培瓶中，－60℃ 预冻 24h，后经 冷冻干燥（ 温度－20℃ ； 真空度 ＜ 20Pa） 24h，得 VC 前 体脂质体。 1.2.2 包封率的测定 1.2.2.1 VC 标准曲线的制作 以 PBS 作为溶剂，配 制浓度分别为 0、8、16、32、48、64、80、96μg / mL 的 VC 标准溶液。参照 GB / T5009.86 －2003 中的 2，4 － 二硝 基苯肼法［16］，制作 VC 标准曲线 （ 见图 1 ） ，求得线性 回归方程为 y = 0.00341x + 0.0168，R2 = 0.9998。由此 可知在 0～96μg / mL 浓度范围内，VC 溶液与吸光度线 性关系良好。
polydispersity index（ PDI） were 78.11% ，89.62nm and 0.160，respectively.The proliposomes was obtained from the
VC nanolipoaomes suspension by freeze－ drying method and its average size and PDI were 121.14nm and 0.195. Additionally，it was found that the stability of both VC nanoliposomes suspension and VC proliposomes decreased with the increasing of storage temperature or time，but the proliposomes was more stable than the nanoliposomes
Study on the preparation and stability of VC nanoliposomes suspension and the proliposomes
BAO Shi－bao1 ，YU Ting－ting1 ，MA Fu－min2
（ 1.School of Food and Drug，Anhui Science and Technology University，Fengyang 233100，China； 2.School of Traditional Medicine，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China）
that VC at the dosage of 160mg，cholesterol to lecithin mass ratio of 1 ∶ 5，Tween80 to lecithin mass ratio of 4 ∶ 5， hydration temperature at 55℃ were optimum parameters. VC nanoliposomes suspension obtained were characterized and the results showed that the average encapsulation efficiency，the average size and
图 1 VC 标准曲线
Fig.1 Standard curve of VC
1.2.2.2 包封率的测定 取 VC 脂质体悬浮液 5mL 置 于已处理过的透析袋中，封口，以 200mL PBS 作为透
析外液，室温下透析 16h。取 25mL 透析外液，参照
VC 溶液标准曲线的制作方法，测定透析外液中 VC 的 浓度 C（ μg / mL） 。按式（ 1） 计算包封率（ EE） ：
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
蛋黄卵磷脂 纯度为 99% ，购于华东师范大学 化工厂； VC 、胆固醇、Tween80、甘油、无水乙醇、盐酸、 硫酸、硫脲、活性炭、2，4 － 二硝基苯肼、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钾、海藻糖 均为分析纯，购于上海国药集 团化学试剂有限公司。
RE－52A 型旋转蒸发器 上海青浦沪西仪器厂； SHB－Ⅲ型循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有 限公司； NanoGenizer超高压纳米均质机 苏州微流 纳米生物技术有限公司； 755B 型紫外－可见分光光 度计 上海分析仪器总厂； Nicomp380 Z3000型 粒 径 分 析 仪 苏州微流纳米生物技术有限公司 ； 超低温保存箱青岛海尔低温技术有限公司； LGJ－10 型冷冻干燥机 北京松源华兴科技发展有限公司。
选择 VC 添加量（ 80、120、160、200、240mg） 、胆固 醇与卵磷酯质量比（ 1∶6、1 ∶5、1 ∶4、1 ∶3、1 ∶2 ） 、Tween80 与卵磷脂质量比（ 1 ∶ 5、2 ∶ 5、3 ∶ 5、4 ∶ 5、1 ∶ 1 ） 、水合温度 （ 50、55、60、65、70℃ ） 、水 合 时 间 （ 20、30、40、50、 60min） 为考察因素，研究各因素对悬浮液中 VC 脂质 体包封率的影响。 1.2.1.2 正交实验设计 固定卵磷脂用量为 400mg， 水合 时 间 为 30min、乙 醇 用 量 为 8mL、PBS 用 量 为 40mL，选取 VC 添加量（ A） 、胆固醇与卵磷脂质量比 （ B） 、Tween80 与卵磷脂质量比（ C） 、水合温度（ D） 作 为考察因素，以包封率为指标，通过 L9 （ 34 ） 正交实验 进一步优化 VC 纳米脂质体悬浮液的制备工艺，因素 水平表设计如下。
EE（ % ）
=
W0
－
C ×V 1000
×
100
W0
式（ 1）
式中： W0 为 VC 添加量（ mg） ； V 为透析外液与内
液的总体积（ mL） 。
VC 前体脂质 体 经 PBS 复 水 重 建 后 按 上 述 方 法 测定包封率。
1.2.3 粒径的测定 取 VC 纳米脂质体悬浮液或 VC 前体脂质体适量，以双蒸水稀释到适当浓度，取适量
收稿日期： 2012－07－23 作者简介： 鲍士宝（ 1980 － ） ，男，博士，讲师，研究方向： 功能性食品添
加剂与配料。 基金项目： 安徽省高校自然科学研究资助项目（ KJ2011B057） 。
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VC 脂 质 体 普 遍 存 在 着 包 封 率 不 高、粒 径 过 大 等 问 题［5 －8］ 。虽有新近报 道 表 明，采 用 新 的 脂 质 体 基 质 或 多重包埋方法可以在一定程度上提高 VC 脂质体的包 封率和稳定性，但增加了其平均粒径 。 ［9－12］ 目前制备 脂质体的方法主要有物理分散法、两相分散法与表面 活性剂增溶法三大类［13－15］； 为了细化脂质体的粒径，常 采用超声、高压均质等后处理。乙醇注入法是属于两 相分散法中的一种，该方法制备脂质体具有操作简单、 重现性好、产品粒径小、不使用无毒试剂等优点。本实 验通过单因素与正交实验优化乙醇注入－ 高压均质法 制备 VC 纳米脂质体悬浮液的工艺，得到包封率较高、 粒径在纳米级别（ ＜ 100nm） 的 VC 纳米脂质体悬浮液， 并在此基础上制备 VC 前体脂质体，研究 VC 纳米脂质 体悬浮液及其前体脂质体的贮存稳定性。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2013.03.042
VC 纳米脂质体悬浮液及其前体脂质体的 制备与稳定性研究
鲍士宝1 ，喻婷婷1 ，马福敏2 （ 1.安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳 233100； 2.辽宁中医药大学大连药学院，辽宁大连 116600）
摘 要： 通过单因素与正交实验优化了乙醇注入－高压均质法制备 VC 纳米脂质体悬浮液的工艺，并制备了 VC 前体脂 质体。得到 VC 纳米脂质体悬浮液的最佳制备工艺为： VC 添加量 160mg，胆固醇与卵磷脂的质量比 1∶5，Tween80 与卵 磷脂的质量比 4∶5，水合温度 55℃ ； 按此最佳工艺制备的 VC 纳米脂质体悬浮液平均包封率、平均粒径、多分散指数分 别为 78.11% 、89.62nm、0.160； 经冷冻干燥后得到的 VC 前体脂质体的平均粒径、多分散指数分别为 121.14nm、0.195。 贮存稳定性实验结果表明，VC 纳米脂质体悬浮液与 VC 前体脂质体的稳定性都受贮存温度与贮存时间的影响； 但后者 贮存稳定性高于前者。 关键词： VC 纳米脂质体悬浮液，前体脂质体，制备，稳定性
25℃ 条件下贮存 30、60、90、120、150、180d，测定平均
粒径与渗漏率。按式（ 2） 计算渗漏率（ LR） ：
置于粒 径 分 析 仪 的 聚 苯 乙 烯 比 色 皿 中 （ 折 光 指 数
来自百度文库
1.33） ，25℃ 保温 3min，测定平均粒径和多分散指数。
1.2.4 贮存稳定性实验 取若干份新制备的 VC 纳 米脂质体悬浮液 （ 每份 20mL） 与前体脂质体 （ 每 份
800mg） ，置 于 25mL 的 敞 口 试 管 内，分 别 在 4℃ 与
Abstract： The preparation conditions of VC nanoliposomes suspension prepared by the ethanol injection － high
pressure homogenization method were optimized. The results of single factor tests and orthogonal test indicated
表 1 正交实验因素水平 Table 1 Factors and levels of the orthogonal test
因素
水平
A VC 添加量
B 胆固醇与 卵磷脂
（ mg）
质量比
C Tween80 与卵磷脂
质量比
D 水合温度 （ ℃）
1
140
1∶6
7∶10
53
2
160
1∶5
4∶5
55
3
180
1∶4