肿瘤个体化治疗基因检测教程PPT课件

• 新鲜标本用10%中性福尔马林固定或用RNAlater浸 泡20分钟以上（常温可保存10天）
• 外借病理蜡块，常规病理大小即可
• 常规石蜡切片（10张白片），5-10um，常温送检
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样本评估
• 血：保存温度、时间，是否凝固
• 胸腹水、尿及痰：涂片HE染色观察结果是 否有癌细胞
• 蜡块或白片：组织保存时间、福尔马林固 定时间、组织大小、有无癌细胞
厄罗替尼（特罗凯）
300mL
K-ras突 变
BRAF 突变
密码子 12,13,61
V600E
肠癌、肺癌、胃 癌、甲状腺癌
预测西妥昔单抗（爱比 妥）、帕尼单抗（维克替 比）疗效，甲状腺癌辅助 诊断
石蜡白片
C-kit突变 外显子
9,11,17
胃肠间质瘤、肉 预测伊马替尼（格列 石蜡白片
瘤
卫）疗效
PDGFα突 外显子14、
变
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肿瘤个体化治疗基因检测项目
检测项目
涉及肿瘤
预测内容
Байду номын сангаас
样本类型
JAK-2 突变 ABL突变
Her-2/CEP17
VEGF/β-actin VEGFR/β-actin
外显子 12，14
真性红细胞增多症，
原发性骨髓纤维化、 原发性血小板增多症
酪氨酸 髓细胞白血病 激酶区 点突变
辅助临床诊断
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第二章 标本前处理
• 一、申请单填写 1、登记患者基本情况，包括姓名、性别、年
龄、送检单位、床位、门诊号/住院号、送 检日期、取材部位、病理诊断、标本病理 号等 2、患者签署知情同意书，留下联系方式 3、患者病史及临床情况
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患者病史及临床情况登记事项
• 有无手术（穿刺标本） • 手术时间 术前术后有无化疗，化疗方案及化疗效
果及毒副作用（相关血项指标、胃肠反应、皮肤 反应、神经反应等），治疗的单位。 • 癌症有无转移，复发或者不能切除 • 相关病史及家族史
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送检标本种类：
• 外周全血；胸腹水；痰；尿 • 新鲜(冰冻)标本； • 内镜活检标本； • 手术标本蜡块或切片
送检标本要求：
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第一章 病理常规操作
• 1. 病理样本的接收 • 2. 组织固定 • 3. 取材 • 4. 包埋 • 5. 组织石蜡切片 • 6. HE染色
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1. 病理样本的接收
• 1．首先核对病理申请单与标本上的红色号码是否一致。 • 2．核查病理申请单上写明的送检标本及数目是否与实际送检标
肿瘤个体化治疗基因检测教程
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教程目录
• 第一章 病理常规操作 • 第二章 样本前处理（申请单填写、标本类
型、标本评估及登记等）
• 第三章 样本预处理（DNA、RNA提取及质 量评估）
• 第四章 基因操作（测序、片段分析及QPCR）
• 第五章 结果解读及诊断报告出具 • 第六章 资料汇总，资料库建立
预测化疗和α干扰素疗 效
2mL抗凝血或骨 髓活检
预测伊马替尼（格列 2mL抗凝血或骨
卫）疗效
髓活检
FISH 乳腺癌、胃癌
mRNA表 肠癌、肺癌、胃癌、
达量
乳腺癌、肾癌
乳头状癌诊断
预测曲妥珠单抗（赫 赛汀）疗效
预测贝伐单抗（阿瓦 斯丁）疗效
石蜡白片
石蜡白片+2mL抗 凝血
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肿瘤个体化治疗基因检测项目
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2. 组织固定
• 临床医师切取标本后，应尽快将标本置 于盛有足够量固定液的容器内，尽量避 免可能出现固定不及时或不充分导致标 本干涸或腐败，无法进行切片制作。添 加的量应6～10倍于标本体积.
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3. 取材及其后期处理
• 病理科病理医生取材 • 核对标本及其标志与申请单是否一致。 • 按照病理取材规范选取病变及正常组织。 • 对送检标本进行大体描述。 • 取材后的标本保存至少两周。 • 放入自动脱水机进行水洗－脱水－透明－
本一致。 • 3．观察送检标本的大小及固定液比例是否合适。(1)穿刺活检
及纤支镜所取的小标本，4％中性甲醛(10％中性福尔马林)固定 组织的量应在6～10倍。(2)对于较大的手术切除标本，应及时 切开固定；核对后将病理申请单和标本编上病理标本号。 • 4．将病人姓名、性别、年龄、病历号、科别、临床诊断、部位 、标本来源、标本例数等逐项录入电脑存储。 • 5．作为病理资料不仅要做好计算机录入工作，还须进行文字登 记，以便病理档案长期保存。
浸蜡前处理。
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4.包埋
• 先将熔化的石蜡倾入模具，再用加热的镊 子夹取已经浸蜡的组织块，注意：特定的 制定面或最下面向下埋入熔蜡。
• 注意标本的编号和标本要对准，防止污染 。
• 为下一步切片准备，提供介质。
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5.切片
• 刀片锋利，组织块预冷。 • 切5-10um的连续组织切片，置于玻片上。 • 捞片，烘干。
石蜡白片+2mL抗 凝血
TS/β-actin mRNA
表达量
胃癌、肠癌、肺癌、 乳腺癌、
肺癌
预测氟尿嘧啶类药物 疗效
预测培美曲塞疗效
石蜡白片+2mL抗 凝血
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肿瘤个体化治疗基因检测项目
检测项目
涉及肿瘤
预测内容
样本类型
TOP-
FISH/m
ⅡA/CEP1 RNA表
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将申请单登记入册
• 登记基因检测申请号、姓名、送检单位、病理号、 检测项目
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肿瘤个体化治疗基因检测项目
检测项目
涉及肿瘤
预测内容
样本类型
EGFR 突变
外显子18, 19, 非小细胞肺癌、 21, (CA)n 食道癌、头颈肿
瘤等
外显子
20(T790M)
预测吉非替尼（易瑞沙）、 石蜡白片或胸水
检测项目
涉及肿瘤
预测内容
样本类型
ERCC1/β- mRNA
actin
表达量
BRCA1 /β- mRNA
actin
表达量
RRM1/β- mRNA
actin
表达量
肺癌、胃癌、肠癌、 预测铂类疗效
卵巢癌、宫颈癌、 乳腺癌、胰腺癌、 预测铂类疗效
胆囊癌
紫杉醇类和长春碱类
药物疗效
石蜡白片+2mL抗 凝血
肺癌、胰腺癌、胆 预测吉西他滨疗效 管癌
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6.HE染色
• 苏木素－伊红染色。
• 苏木素染细胞核（核酸），伊红染细胞质 （蛋白），使组织细胞对比清晰，便于显 微镜下观察。
• 主要流程：二甲苯脱蜡－梯度酒精脱二甲 苯－苏木素染色－分化、返蓝－伊红－梯 度酒精、二甲苯－封片。
《临床技术操作规范病理学分册》 2004年第1版
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