《新导学》2018-2019学年高中生物选修三浙科版课件：第二章 克隆技术 第6课时 .pptx

特异性强、灵敏 产量高，易纯 度高 化分离
血清抗体
各B淋巴细胞
特异性差、灵敏 产量低，分离 度低 困难
互动探究 探究1——理性思维
下列是A细胞与B细胞融合杂交的过程图解。思考回答相关问题：
Leabharlann Baidu
概念 原理
指两个或多个动物细胞融合成一个细胞的现象，其中基 细胞杂交 因型不同的细胞间的融合就是__________ 细胞膜的流动性 ________________
在杂交瘤细胞制备过程中，常用聚乙二醇作介导物质，选择发生免
疫的B细胞和可无限传代的骨髓瘤细胞融合，筛选后获得能产生某一特定 抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞能够无限增殖，且筛选后已分离纯化，因 此杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、克隆培养后，获得的是能产生单一 抗体的连续细胞株。
解析 答案
例2
(2016· 瑞安期中节选)科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了H5N1
禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，如图为单克隆抗体 制备过程示意图，图中A～G分别表示生物技术或细胞名称，请回答有关 问题：
感染H5N1病毒的动物或人 (1) 若 A 细胞是小鼠骨髓瘤细胞 , 则 B 细胞是取自 _______________________ 聚乙二醇 。 的细胞，C过程化学诱导试剂常用_________
诱导融合的方法
过程描述 融合成功的标志 重组细胞的特点 应用
①物理、化学方法：聚乙二醇、电刺激等；②生物 灭活的病毒 方法：___________ 膜融合→质融合→核融合 有丝分裂 杂交细胞进行__________ 杂交细胞具有两个细胞的遗传信息，能表现两个亲
本的性状
检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少 单克隆抗体 的对应关系进行 基因的定位 ；制备___________
免疫反应 ，取经过免疫的小鼠 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在 内，使其发生__________
聚乙二醇 填物质名称)介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各 __________( 克隆培养 后，获得能产生单一抗体 杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、_________ C 的___(A. 连续细胞系 解析 B.有限细胞系 C.连续细胞株 D.有限细胞株)。
①概念： 基因型不同 的细胞间的融合。 染色体丢 ②应用：细胞杂交中 染色体 容易丢失，利用杂交细胞检测特定_________
失 与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系可进行 基因定位 。
2.单克隆抗体的制备 (1)过程
B淋巴
细胞
骨髓瘤细胞
产生特定 抗体的杂 交细胞
提取 抗体
(2)杂交瘤细胞的特点： 无限增殖，产生 单克隆抗体 。 优越 (3)单克隆抗体的优点：其识别抗原部位的专一性，比一般抗血清_____
探究2——图示解读 下列是制备单抗的基本方法 步骤。请完善右图并思考回 答相关问题： 1.制备单克隆抗体的关键思路 是：(1)克隆单一的B淋巴细胞， B淋巴细胞 形成细胞群； (2) 将 _________ 与骨髓瘤细胞融合，获得杂 交瘤细胞。
骨髓瘤
杂交细胞
杂交瘤细胞
体外培养
2.用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因是什么？ 答案 (1)每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；不同种类的B淋巴
大肠杆菌，并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的 LB液体培养基中培养，
经离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。 解析 在基因工程中常用限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶处理并连接目
的基因和质粒。为提高重组质粒导入大肠杆菌的概率，常用CaCl2处理大 肠杆菌，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性。
解析 答案
(2)TOP2A 蛋白单克隆抗体的制备：将 TOP2A蛋白反复多次注射到小鼠体
选修3 现代
第二章 克隆技术
生物技术专题
第6课时 动物的克隆(Ⅱ)
知识内容
要求
考情解读 1.简述动物的细胞融合技术及应用。 2.描述动物细胞全能性的表现程度，说出动 物难以克隆的原因。 3.简述动物细胞核移植的概念和程序。 4.列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应 用和发展前景。
动物的克隆
a
内容索引
例1
(2017· 浙江选考联考)TOP2A蛋白在多种肿瘤细胞中大量表达，成为
抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答： 限制性核酸 (1)利用基因工程制备TOP2A蛋白：TOP2A蛋白基因和质粒用___________ 内切酶和DNA连接酶 处理并连接成重组质粒，然后导入经 ______ CaCl2 处理的 ___________________
5.单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？
答案
第一次筛选是在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，筛选出只有B
淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞。第二次筛选需先在多孔培养皿上
培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能
产生特异性抗体的细胞群。
答案
6.获取单克隆抗体的场所：若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从 培养液 中提取；若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从 腹水 中提取。
一、动物的细胞融合技术及其应用 二、动物的克隆繁殖
达标检测
一、动物的细胞融合
技术及其应用
新知导学 1.细胞融合与细胞杂交
(1)细胞融合
①含义：指 两个或多个细胞 融合成一个细胞的现象。
②促融方法：灭活的 仙台病毒 、 聚乙二醇 介导、电融合技术等，其中
电融合技术 是效率很高的新型细胞融合技术。
(2)细胞杂交
得多 ，原因是一般抗血清中的抗体是____________________________ 一群识别不同抗原部位的抗体混
合物 。 (4)单克隆抗体的应用：单抗可作为 特异探针 ，研究相应抗原蛋白的 结构 、 细胞学分布 及其 功能 。
助学巧记 血清抗体与单克隆抗体比较 项目 单克隆抗体 分泌细胞 杂交瘤细胞 特点 生产
细胞分泌的抗体不同； (2)B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，骨髓瘤细胞能够无限增殖。
答案
3.杂交瘤技术制备单克隆抗体的最大优点：可以从特异抗原成分比例极少 的抗原混合物中获得 单抗 。 4.制备单克隆抗体过程中的几种细胞的特点：(1)免疫的B淋巴细胞：能产 生 单一抗体 ，但不能无限增殖。(2)骨髓瘤细胞：能 无限增殖 ， 但 不 能 产生抗体。(3)杂交瘤细胞：既能产生 特定的抗体 ，又能在培养条件下进 行 无限增殖 。